Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测 货号22823-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测     货号22823 货号 22823 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 503 Em (nm) 525
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡检测的试剂盒,Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具,包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 3/7的活性而用于细胞凋亡检测的。因为Caspase-3 (CPP32/apopain)在细胞凋亡的起始过程中发挥着重要作用,因此其作为一个值得信赖的细胞凋亡指示剂广泛地被大家所接受。Caspase 3具有特异性的底物多肽识别序列,即天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)。本试剂盒用TF2-DEVD-FMK作为荧光指示剂,用于Caspase-3/7活性的检测。TF2-DEVD-FMK具有细胞渗透性、无细胞毒性,在凋亡细胞中能与活化的casepase-3/7进行不可逆的结合。一旦与Caspases结合,这种绿色荧光染料会被保留在细胞中。这种结合可以阻止Caspases进一步的催化作用,但是不会使细胞凋亡的进程停止。这种试剂将在添加介质之后的15分钟内与有活性的Caspase酶进行反应。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它用来对凋亡细胞中绝大多数活化的Caspases的活性进行定量检测,或者用来筛选Caspases抑制剂。这种绿色荧光可以通过流式细胞仪对被激活的Caspases进行直接检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激发
发射: 530/30nm滤波片
通道: FITC通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞,密度为5×105至1×106个细胞/ mL
2.将1μL500XTF2-DEVD-FMK加入0.5mL细胞溶液中
3.在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-4小时
4.将细胞沉淀并将细胞重悬于0.5mL测定缓冲液或生长培养基中
5.使用具有FL1通道的流式细胞仪分析细胞

 

操作步骤

1.对于每个样品,准备细胞在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中,密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡,并产生阳性和阴性对照。

3.将1μL500XTF2-DEVD-FMK(组分A)加入处理过的细胞中。

4.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-4小时。注意:对于贴壁细胞,用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用TF2-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.将细胞洗涤并旋转两次。将细胞重悬于0.5mL测定缓冲液或生长培养基中。注意:TF2-DEVD-FMK是荧光的;因此,清除任何未结合的试剂以去除背景是很重要的。

6.用DNA染色标记细胞(如碘化丙锭或7-AAD用于死细胞)。

7.使用具有FL1通道的流式细胞仪(Ex / Em = 490 / 525nm)监测荧光强度。

 

数据分析

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测     货号22823

图1.使用Jurkat细胞中的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒检测caspase 3/7活性。 加入喜树碱诱导TF2-DEVD-FMK荧光强度。 将Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中不用(蓝色)或用20μM喜树碱(红色)处理4-5小时,然后用TF2-DEVD-FMK染色1小时。

 

参考文献

Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Luis Mario Aguirre Palma, Hanna Flamme, Iris Gerke, Karl-Anton Kreuzer
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13–26

Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Gertrud Knoll, Sebastian Bittner, Maria Kurz, Jonathan Jantsch, Martin Ehrenschwender
Journal: Oncotarget (2016)

microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: Wei He, Jianfang Feng, Yan Zhang, Yuanyuan Wang, Wenqiao Zang, Guoqiang Zhao
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317–324

Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Lin Wang, Xiaofan Hu, Xiangyu Ma, Zhensheng Ma, Yang Zhang, Yizhao Lu, Xiang Li, Wei Lei, Yafei Feng
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452

Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Q Wang, Y Shi, HJ Butler, J Xue, G Wang, P Duan, H Zheng
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006

Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Jianjun Han, Lu Zhang, Hui Guo, Weiya Z Wysham, Dario R Roque, Adam K Willson, Xiugui Sheng, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668–675

IL-7 abrogates the immunosuppressive function of human double-negative T cells by activating Akt/mTOR signaling
Authors: Andrea Allgäuer, Elisabeth Schreiner, Fulvia Ferrazzi, Arif B Ekici, Armin Gerbitz, Andreas Mackensen, Simon Völkl
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139–3148

Insulin improves osteogenesis of titanium implants under diabetic conditions by inhibiting reactive oxygen species overproduction via the PI3K-Akt pathway
Authors: Lin Wang, Xiong Zhao, Bo-yuan Wei, Yi Liu, Xiang-yu Ma, Jian Wang, Peng-chong Cao, Yang Zhang, Ya-bo Yan, Wei Lei
Journal: Biochimie (2015): 85–93

LGL1 modulates proliferation, apoptosis, and migration of human fetal lung fibroblasts
Authors: Hui Zhang, Neil B Sweezey, Feige Kaplan
Journal: American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology (2015): L391–L402

t-BHQ Provides Protection against Lead Neurotoxicity via Nrf2/HO-1 Pathway
Authors: Fang Ye, Xiaoyi Li, Lili Li, Jing Yuan, Jun Chen
Journal: Oxidative medicine and cellular longevity (2015)

 

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Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 Cat#22795
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 Cat#22796
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 Cat#22797

说明书
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Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测 货号22822-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测     货号22822 货号 22822 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 649 Em (nm) 664
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量活细胞中的通用胱天蛋白酶(胱天蛋白酶-1,-3,-4,-5,-6,-7,-8和-9)激活来检测细胞凋亡。胱天蛋白酶激活被广泛认为是细胞凋亡的可靠指标。大多数胱天蛋白酶具有对肽序列Val-Ala-Asp(VAD)的底物选择性。该试剂盒使用TF5-VAD-FMK作为大多数半胱天冬酶活性的荧光指示剂。 TF5-VAD-FMK是细胞可渗透的,无毒的,并且与凋亡细胞中活化的casepase-1,-3,-4,-5,-6,-7,-8和-9不可逆地结合。一旦与胱天蛋白酶结合,红色荧光试剂将保留在细胞内。结合后阻止了胱天蛋白酶的进一步催化,但不会阻止凋亡的进行。添加到培养基中后的15分钟内,该试剂将开始与活性caspase酶反应。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。它用于定量凋亡细胞中大多数激活的胱天蛋白酶活性,或筛选胱天蛋白酶抑制剂。红色荧光标记允许通过流式细胞仪直接检测凋亡细胞中激活的胱天蛋白酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激发
发射: 530/30nm滤波片
通道: FITC通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 将0.5 µL细胞溶液中加入1 µL 500X TF5-VAD-FMK
  3. 将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-4小时
  4. 沉淀细胞并将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液或生长培养基中
  5. 使用带有660/20 nm滤光片的流式细胞仪分析细胞(APC通道)

 

实验步骤

1.对于每个样品,在0.5mL温热培养基或自备缓冲液中以5×105至1×106cell/ mL的密度制备细胞。注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段时间,以诱导细胞凋亡,并建立阳性和阴性对照。

3.向处理过的细胞中加入1µL 500X TF5-VAD-FMK(组分A)。

4.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-4小时。注意:对于贴壁细胞,用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在与TF5-VAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.洗涤并旋转细胞两次。将细胞重悬于0.5 mL分析缓冲液(组分B)或生长培养基中。注意:TF5-VAD-FMK是荧光的;因此,重要的是洗净任何未结合的试剂以除去背景。

6.可选:用DNA染色剂标记细胞(例如绿色DCS标记死细胞,可以用530/30 nm滤光片(FITC通道)检测到。

7.可选:修复细胞。

8.使用带有660/20 nm滤光片(APC通道)的流式细胞仪检测荧光强度。

 

参考文献

Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Palma, Luis Mario Aguirre and Flamme, Hanna and Gerke, Iris and Kreuzer, Karl-Anton
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13–26

Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Knoll, Gertrud and Bittner, Sebastian and Kurz, Maria and Jantsch, Jonathan and Ehrenschwender, Martin
Journal: Oncotarget (2016)

Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Wang, Lin and Hu, Xiaofan and Ma, Xiangyu and Ma, Zhensheng and Zhang, Yang and Lu, Yizhao and Li, Xiang and Lei, Wei and Feng, Yafei
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452

Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Wang, Q and Shi, Y and Butler, HJ and Xue, J and Wang, G and Duan, P and Zheng, H
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006

microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: He, Wei and Feng, Jianfang and Zhang, Yan and Wang, Yuanyuan and Zang, Wenqiao and Zhao, Guoqiang
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317–324

Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Han, Jianjun and Zhang, Lu and Guo, Hui and Wysham, Weiya Z and Roque, Dario R and Willson, Adam K and Sheng, Xiugui and Zhou, Chunxiao and Bae-Jump, Victoria L
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668–675

IL-7 abrogates the immunosuppressive function of human double-negative T cells by activating Akt/mTOR signaling
Authors: Allgäuer, Andrea and Schreiner, Elisabeth and Ferrazzi, Fulvia and Ekici, Arif B and Gerbitz, Armin and Mackensen, Andreas and Völkl, Simon
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139–3148

Insulin improves osteogenesis of titanium implants under diabetic conditions by inhibiting reactive oxygen species overproduction via the PI3K-Akt pathway
Authors: Wang, Lin and Zhao, Xiong and Wei, Bo-yuan and Liu, Yi and Ma, Xiang-yu and Wang, Jian and Cao, Peng-chong and Zhang, Yang and Yan, Ya-bo and Lei, Wei and others
Journal: Biochimie (2015): 85–93

LGL1 modulates proliferation, apoptosis, and migration of human fetal lung fibroblasts
Authors: Zhang, Hui and Sweezey, Neil B and Kaplan, Feige
Journal: American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology (2015): L391–L402

t-BHQ Provides Protection against Lead Neurotoxicity via Nrf2/HO-1 Pathway
Authors: Ye, Fang and Li, Xiaoyi and Li, Lili and Yuan, Jing and Chen, Jun
Journal: Oxidative medicine and cellular longevity (2015)

说明书
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Live或Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光 货号22760-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Live或Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光

Live或Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光

Live或Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光     货号22760 货号 22760 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1000 Tests 价格 10548
Ex (nm) 492 Em (nm) 515
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞活性检测试剂盒,Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具,包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双重荧光* 使用两种非荧光性指示剂:Calcein AM,用于活细胞;一种非细胞渗透性的DNA结合染料,用于细胞膜不完整的死细胞。Calcein AM是一种疏水性复合物,可以轻易地渗透进入完整的活细胞,通过酯酶的水解作用,产生强烈的荧光。通过细胞内酯酶水解非荧光性Calcein AM,形成具有强烈荧光的亲水性Calcein,并且保留在细胞质中。这种酯酶的活性与活细胞数量成比例关系。DNA结合染料极性非常大,不能渗透进入具有完整细胞膜的活细胞,它只有在与死细胞的DNA结合的情况下才发出荧光。生长在培养板中的细胞可以被染料,且在不到两小时内就可以完成定量分析。本检测法比其它活细胞检测法更加强大、稳定。它可以用于许多荧光实验平台的高通量分析中,例如微孔板分析,免疫组化和流式细胞术。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞,也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中,每孔用试剂100ul,本试剂盒提供的试剂足以进行100次检测;384微孔板中,每孔加试剂25ul,本试剂盒提供的试剂足以进行400次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 细胞活性检测试剂盒。 

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm
发射: 530/30nm, 610/20nm
通道: FITC, PE-Texas Red通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.加入相同体积的CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)
3.在室温或37°C孵育1小时
4.在强度下监测荧光(底部读取模式)Ex / Em = 490 / 525nm(截止= 515nm)和540 / 620nm(截止= 590nm),带有FITC滤光片(细胞存活)的荧光显微镜和TRITC滤光片 (细胞死亡),或FL1和FL2通道的流式细胞仪。

 

溶液配制

1.储存溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
CytoCalcein 绿色原液:
将20μLDMSO(组分C)加入到CytoCalcein Green(组分A)的小瓶中并充分混合以制备CytoCalcein Green原液。 避光。 注意:20μL的CytoCalcein Green原液足以用于一个平板。 存放时,密封管。

 

2.工作溶液配制

将全部内容物(20μL)的CytoCalcein Green储备溶液和20μL碘化丙啶(组分B)加入10mL测定缓冲液(组分C)中并充分混合以制备CytoCalcein Green /碘化丙锭染料 – 工作溶液。 CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液在室温下稳定至少2小时。 注意:如果CHO细胞等细胞含有导致荧光染料随时间泄漏的有机阴离子转运蛋白,应制备丙磺舒储备溶液,并加入到加样缓冲液中,最终孔内工作浓度范围为1到2.5 mM。 未使用的丙磺舒储备溶液可以在≤-20℃下储存。 由于最佳染色条件可能因细胞类型的不同而异,因此建议单独确定组分A和B的适当浓度。有关细胞样品制备的指南,请点击查看。

 

操作步骤

1.用酶标仪或荧光显微镜进行细胞活力测定:

1.1根据需要用测试化合物处理细胞。注意:在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而,如果测试的化合物对血清敏感,则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后加入100μL/孔/ 96孔板和25μL/孔/ 384孔板的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液。或者,细胞可以在无血清培养基中生长。

1.2加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的CytoCalcein TM Green / Propidium Iodide染料加工溶液。

1.3将板在室温或37°C孵育30分钟至1小时,避光。 (孵育时间可以从15分钟到过夜。我们得到了最佳结果,孵育时间少于4小时)。注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。装载后请勿清洗细胞。对于非粘附细胞,建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟,然后关闭制动器。

1.4使用荧光酶标仪(底部读取模式)在Ex / Em = 490 / 525nm(截止= 515nm)和Ex / Em = 540 / 620nm(截止= 590nm,细胞死亡)或荧光下监测荧光强度用于活细胞的FITC过滤器或用于死细胞的TRITC过滤器的显微镜。

 

2.使用流式细胞仪进行细胞活力测定:

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

2.1离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

2.3将细胞重悬于500μL的CytoCalcein™Green / Propidium Iodide染料加工溶液中。

2.4在室温或37°C孵育10至30分钟,避光。

可选:用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中,每管加入1-5×105个细胞。

2.5用流式细胞仪在Ex / Em = 490 / 525nm和Ex / Em = 490 / 620nm(FL1和FL2通道)下监测荧光强度。

 

数据分析

Live或Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光     货号22760

图1. 使用Cell Meter Cell Viability Assay Kit测量Jurkat细胞对皂苷诱导的细胞死亡的影响。 用或不用0.5%皂苷处理2×10 6个细胞/ mL的Jurkat细胞5分钟。 离心细胞,用新鲜培养基替换上清液。 将100uL未处理的细胞(A),各50μL未处理和处理的细胞(B),25uL未处理的和75uL处理的细胞(C)和100uL的0.5%皂苷处理的细胞(D)接种在 96孔黑色墙壁/透明底部聚-D-赖氨酸板。 将细胞与100μL/孔的CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料 – 工作溶液在37℃下孵育1小时。 使用NOVOstar仪器(BMG Labtech)在底部读取模式下在Ex / Em = 490 / 525nm和540 / 650nm下测量荧光强度。 如所示(n = 6)显示活细胞和死细胞上490 / 525nm与540 / 650nm荧光强度的比率。

 

参考文献

Effect of copper nanoparticles on physico-chemical properties of chitosan and gelatin-based scaffold developed for skin tissue engineering application
Authors: Shikha Kumari, Bhisham Narayan Singh, Pradeep Srivastava
Journal: 3 Biotech (2019): 102

Functional imaging of neuronal activity of auditory cortex by using Cal-520 in anesthetized and awake mice
Authors: Jingcheng Li, Jianxiong Zhang, Meng Wang, Junxia Pan, Xiaowei Chen, Xiang Liao
Journal: Biomedical Optics Express (2017): 2599–2610

NINJ2–A novel regulator of endothelial inflammation and activation
Authors: Jingjing Wang, Jingjing Fa, Pengyun Wang, Xinzhen Jia, Huixin Peng, Jing Chen, Yifan Wang, Chenhui Wang, Qiuyun Chen, Xin Tu
Journal: Cellular Signalling (2017)

Erythropoietin Stimulates Endothelial Progenitor Cells to Induce Endothelialization in an Aneurysm Neck After Coil Embolization by Modulating Vascular Endothelial Growth Factor
Authors: Peixi Liu, Yingjie Zhou, Qingzhu An, Yaying Song, Xi Chen, Guo-Yuan Yang, Wei Zhu
Journal: MEDICINE (2016): 1–8

Flexible Endoscopic Spray Application of Respiratory Epithelial Cells as Platform Technology to Apply Cells in Tubular Organs
Authors: Anja Lena Thiebes, Manuel Armin Reddemann, Johannes Palmer, Reinhold Kneer, Stefan Jockenhoevel, Christian Gabriel Cornelissen
Journal: Tissue Engineering Part C: Methods (2016): 322–331

Influence of hypothermia and subsequent rewarming upon leukocyte-endothelial interactions and expression of Junctional-Adhesion-Molecules A and B
Authors: Nicolai V Bogert, Isabella Werner, Angela Kornberger, Patrick Meybohm, Anton Moritz, Till Keller, Ulrich A Stock, Andres Beiras-Fernandez
Journal: Scientific reports (2016)

Inhibition of ABC transport proteins by oil sands process affected water
Authors: Hattan A Alharbi, David MV Saunders, Ahmed Al-Mousa, Jane Alcorn, Alberto S Pereira, Jonathan W Martin, John P Giesy, Steve B Wiseman
Journal: Aquatic Toxicology (2016): 81–88

Rapid generation of collagen-based microtissues to study cell–matrix interactions
Authors: Marie-Elena Brett, Alexandra L Crampton, David K Wood
Journal: Technology (2016): 1–8

Toxicokinetics and toxicodynamics of chlorpyrifos is altered in embryos of Japanese medaka exposed to oil sands process-affected water: evidence for inhibition of P-glycoprotein
Authors: Hattan A Alharbi, Jane Alcorn, Ahmed Al-Mousa, John P Giesy, Steve B Wiseman
Journal: Journal of Applied Toxicology (2016)

Spraying respiratory epithelial cells to coat tissue-engineered constructs
Authors: Anja Lena Thiebes, Stefanie Albers, Christian Klopsch, Stefan Jockenhoevel, Christian G Cornelissen
Journal: BioResearch open access (2015): 278–287

 

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产品详细介绍

简要概述

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒,JC-1在许多实验室中被广泛使用,但其水溶性差导致极大的不便。即使在1μM浓度下,JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时,JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比,JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体,并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm(即JC-10单体形式的发射)向570nm(即J-聚集体形式的发射)的移动。当在490nm处激发时,随着线粒体膜变得更加极化,JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1(FL1)中分析绿色发射,在通道2(FL2)中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外,它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测,并为监测线粒体膜电位变化提供了最强大的检测方法。

这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测,并为监测线粒体膜电位变化提供了最可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中,JC-10浓缩在线粒体基质中,在那里形成红色荧光聚集体。然而,在凋亡和坏死细胞中,JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡激活剂和抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490/540nm
发射: 525/590nm
cutoff: 515/570nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式

产品说明书

96孔板样品分析

概述

准备细胞

添加测试化合物

添加JC-10染料加载溶液(50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板)

在37℃,5%CO2培养箱中孵育30至60分钟

添加测定 缓冲液B(50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板)

在Ex / Em = 490/525和540/590 nm处监测荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞:
1.1对于贴壁细胞:在生长培养基中将细胞以20,000至80,000个细胞/孔/90μL过夜,96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/20μL,用于384孔板。
1.2对于非粘附细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀悬浮于100,000-200,000细胞/孔/90μL的培养基中,用于96孔poly-D赖氨酸平板或25,000-50,000细胞/孔 /20μL,用于384孔聚-D赖氨酸板。 在实验之前,在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

 

2.准备JC-10染料加载溶液:
2.1使用前在室温下清洗所有套件组件。
2.2将50μL100XJC-10(组分A)加入5mL测定缓冲液A(组分B)中,充分混合。
注意:将未使用的100X JC-10(组分A)等分并保存在-20 oC。 避免反复冻/融循环。

 

3.运行JC-10测定:
3.1通过向所需缓冲液(例如PBS或HHBS)中加入10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384-板)来处理细胞。
注意:在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而,如果测试的化合物对血清敏感,则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后将相同体积的HHBS添加到孔中(例如对于96孔板为90μL或对于384孔板为20μL)。或者,细胞可以在无血清培养基中生长。
3.2在室温或37℃,5%CO2培养箱中培养细胞板至少15分钟或所需的时间(对于Jurkat细胞,用喜树碱4-6小时或用星形孢菌素处理3-5小时)到诱导细胞凋亡
3.3将50μL/孔(96孔板)或12.5μL/孔(384孔板)的JC-10染料加载溶液(来自步骤2.2)加入细胞板(来自步骤3.2)。
3.4将染料加载板在37℃,5%CO2培养箱中孵育30-60分钟,避光。
注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5在读取荧光强度之前,将50μL/孔(96孔板)或12.5μL/孔(384孔板)的测定缓冲液B(组分C)加入染料加载板(来自步骤3.4)。
注1:装载后请勿清洗电池。
注2:对于非粘附细胞,建议在加入分析缓冲液B(组分C)后,以800rpm离心细胞板2分钟,同时停止制动。
3.6使用底部读取模式监测Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)和540 / 590nm(在570nm处截止)的荧光强度以进行比率分析。

 

数据分析

Em在525/590处的荧光强度比率用于数据分析。

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测     货号22800

图1.在Jurkat细胞中用JC-10和JC-1测量了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。 用喜树碱(10mM)处理Jurkat细胞4小时后,向孔中加入JC-1和JC-10染料上样溶液并孵育30分钟。 使用NOVOstar酶标仪(BMG Labtech)在Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm下测量J-聚集体和单体形式的JC-1和JC-10的荧光强度。

 

参考文献

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产品名称 货号
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测 Cat#22801

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