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PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒 货号21620-AAT Bioquest荧光染料

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PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒

PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒

货号 21620 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 5244
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”，以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子，在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒，可通过重组萤火虫荧光素酶（目录号21610和21609）确定ATP的纳摩尔（nM）范围。这些试剂盒需要酶标仪，通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 荧光ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应，产生过氧化氢，该过氧化氢用我们的Amplite Red底物通过分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约0.4 µM ATP，而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大，简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 荧光ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液（50 µL）
2.添加ATP标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

 

溶液配制

1.制备储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1Amplite 红色底物储备液（200X）：
将30 µL DMSO（组分E）加入小瓶Amplite Red Substrate（组分A）中，制成200X Amplite Red Substrate储备液。

1.2ATP标准溶液（10mM）：
将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液（组分D）的小瓶中，制成10 mM ATP标准溶液。

 

2.制备标准溶液

ATP标准

将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM ATP标准溶液（AS7）。 取100 µM ATP标准溶液（AS7）并进行1：3连续稀释，以使用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液（AS6-AS1）。

 

3.制备工作溶液

3.1将5毫升测定缓冲液（组分C）添加到酶混合瓶（组分B）中，并充分混合。

3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 µL 200X AmpliteTM Red Substrate储备液，充分混合以制成APT工作溶液。

 

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品（AS1-AS7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1 … …
AS2 AS2 … …
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释（0.14至100 µM）
BL 50ul 1 X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备ATP标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光增加。

 

参考文献

ATP-based cell viability assay is superior to trypan blue exclusion and XTT assay in measuring cytotoxicity of anticancer drugs Taxol and Imatinib, and proteasome inhibitor MG-132 on human hepatoma cell line HepG2
Authors: E. Nowak
Journal: Clin Hemorheol Microcirc (2018): 327-336

High-content image analysis (HCIA) assay has the highest correlation with direct counting cell suspension compared to the ATP, WST-8 and Alamar blue assays for measurement of cytotoxicity
Authors: H. Tahara
Journal: J Pharmacol Toxicol Methods (2017): 92-99

High throughput cell-based assay for identification of glycolate oxidase inhibitors as a potential treatment for Primary Hyperoxaluria Type 1
Authors: Mengqiao Wang, Miao Xu, Yan Long, Sonia Fargue, Noel Southall, Xin Hu, John C McKew, Christopher J Danpure, Wei Zheng
Journal: Scientific Reports (2016)

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

The Different Effects of Atorvastatin and Pravastatin on Cell Death and PARP Activity in Pancreatic NIT-1 Cells
Authors: Ya-Hui Chen, Yi-Chun Chen, Chin-San Liu, Ming-Chia Hsieh
Journal: Journal of Diabetes Research (2016)

BPA-induced DNA hypermethylation of the master mitochondrial gene PGC-1α contributes to cardiomyopathy in male rats
Authors: Ying Jiang, Wei Xia, Jie Yang, Yingshuang Zhu, Huailong Chang, Juan Liu, Wenqian Huo, Bing Xu, Xi Chen, Yuanyuan Li
Journal: Toxicology (2015): 21–31

Combination of immunoprecipitation (IP)-ATP_Glo kinase assay and melanogenesis for the assessment of potent and safe PAK1-blockers in cell culture
Authors: B. C. Nguyen
Journal: Drug Discov Ther (2015): 289-95

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Endocrine-related cancer (2015): 577–591

JQ1 suppresses tumor growth through downregulating LDHA in ovarian cancer
Authors: Haifeng Qiu, Amanda L Jackson, Joshua E Kilgore, Yan Zhong, Leo Li-Ying Chan, Paola A Gehrig, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Oncotarget (2015): 6915

Loss of histone deacetylase Hdac1 disrupts metabolic processes in intestinal epithelial cells
Authors: Alexis Gonneaud, Naomie Turgeon, Frančois-Michel Boisvert, Frančois Boudreau, Claude Asselin
Journal: FEBS letters (2015): 2776–2783

 

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产品名称 货号
PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒 Cat#21617
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说明书
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钙离子荧光探针Indo-1,五钾盐 CAS 132319-56-3 货号21040-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Indo-1,五钾盐 CAS 132319-56-3

钙离子荧光探针Indo-1,五钾盐 CAS 132319-56-3

钙离子荧光探针Indo-1,五钾盐 CAS 132319-56-3 货号21040 货号 21040 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 1272
Ex (nm) 330 Em (nm) 404
分子量 840.05 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。在紫外线可激发的钙指示剂中，最常用的是Fura-2和Indo-1。Fura-2可激发，而Indo-1可发射。对于比率成像显微镜，Fura-2是优选的，在比率成像中，更改激发波长比发射波长更实际。结合Ca2 +时，Fura-2表现出吸收位移，可通过扫描300至400 nm之间的激发光谱来观察，同时监测〜510 nm处的发射。相反，Indo-1是流式细胞仪的首选染料，在这种情况下，使用单个激光激发（通常是氩离子激光的351-364 nm光谱线）更为实用。在无Ca2 +的环境中，Indo-1的发射从480 nm移至400 nm（与Ca2 +结合时）。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Indo-1,五钠盐 Cat#21044

说明书
钙离子荧光探针Indo-1,五钾盐 CAS 132319-56-3.pdf

钙离子荧光探针Cal-630 AM 货号20532-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal-630 AM

钙离子荧光探针Cal-630 AM

钙离子荧光探针Cal-630 AM 货号20532 货号 20532 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 9216
Ex (nm) 609 Em (nm) 626
分子量 1282.89 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-630 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： Texas Red
发射： Texas Red
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 600nm
发射： 640nm
cutoff: 630nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

使用Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM，Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从金畔购买。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse 丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从金畔购买。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）对于Calbryte 520 AM，在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试，对于Calbryte 590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte 630 AM，使用610/640nm进行钙测试。

 

2.测量细胞内钙响应

钙离子荧光探针Cal-630 AM 货号20532

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑色壁/透明底板中。 将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基，加入50μL50μMATP，并使用FITC通道用荧光显微镜（Keyence）成像。

钙离子荧光探针Cal-630 AM 货号20532

图2.用Calbryte 520或Fluo-4 AM测量的CHO-M1细胞中外源M1受体的卡巴胆碱刺激的钙响应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μLFluo-4AM或不含丙磺舒的Calbryte 520AM加入细胞中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 通过FlexStation 3（Molecular Devices）添加Carbachol（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

钙离子荧光探针Cal-630 AM 货号20532

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μL具有2mM丙磺舒的HbBS中的Calbryte 590AM或Calbryte  630 AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育1小时。 将染料加载培养基替换为200μLHHBS，用50μL50μMATP处理，并使用TRITC通道（Calbryte  590）和Texas Red Channel（Calbryte 630）用荧光显微镜（Keyence）成像。

 

结论

        由于Ca 2+在生物学中的重要性，已经建立了许多用于分析细胞和/或亚细胞Ca 2+活性机制的技术/方法。 尽管用于分析Ca 2+活性的每种方法都具有优于其他方法的某些优点，但每种方法也存在缺点。 凭借上述出色的性能，我们相信Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630钙检测试剂为各种生物系统中的细胞内钙分析和监测提供了新的强大工具。

        正如可能预测的那样，Ca2 +分析中许多研究人员的兴趣从细胞水平转移到亚细胞水平。 已经发现Ca2 +在整个细胞中均匀分布，并且在多种细胞（例如，卵母细胞，心肌细胞，肝细胞和外分泌细胞）中观察到Ca2 +的细胞内异质性（例如Ca2+ waves and Ca2+ sparks）。 随着20世纪80年代共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和2000年代先进的酶标仪（如FLIPR，FDSS和NOVOStar专用于细胞内Ca2 +检测）的出现，细胞内Ca2 +的测量显着加速。 共聚焦激光扫描显微镜和最近的多光子显微镜除了测量其浓度外，还允许在亚细胞水平上对细胞内Ca 2+信号传导进行精确的空间和时间分析。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

说明书
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Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光**无铜* 货号22320-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光**无铜*

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Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光**无铜* 货号22320 货号 22320 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 6564
Ex (nm) 656 Em (nm) 670
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞活力的试剂盒，监测细胞增殖是评估细胞活力，细胞周期和遗传毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒使用FOL-FdU（胸苷的类似物）。FOL-FdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后，通过我们的Bucculite 标记技术用MTA-iFluor 647标记掺入的FOL-dU。在FITC通道中可视化细胞中形成的iFluor 647标记的DNA。Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒提供了基于抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的替代方法。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： 650nm
发射： 665nm
推荐孔板： 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

2.对于96孔板，以100 µL /孔添加2X FOL-FdU工作溶液

3.在37ºC下孵育3小时

4.取出培养基，并在室温下用100µL冰冷的90％甲醇的PBS溶液固定细胞15分钟

5.除去固定液并用PBS洗涤3次

6.加入1X iFluor 647-MTA工作溶液（100 µL /孔）并在室温下染色30分钟。

7.除去每个孔中的工作溶液，并用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次。

8.加入100µL 1X洗涤缓冲液/孔，并用FITC滤光片组观察紫外荧光显微镜。

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1.1 FOL-FdU储备溶液（1000X）：
将500 µL DMSO（组分E）添加到FOL-FdU（组分A）中，制成1000X储备溶液。注意：此1000X浓度是使用具有最佳FOL-FdU浓度的HeLa细胞开发的。生长培养基，细胞密度，细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。我们建议测试一系列FOL-FdU浓度，以确定适合您的细胞类型和实验条件的最佳浓度。

1.2 iFluor 647-MTA储备溶液（400X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到iFluor 647-MTA（组分B）中，制成400 X iFluor 647-MTA储备溶液。

 

2.工作溶液

2.1 2X FOL-FdU工作溶液

在完全培养基中将1000X FOL-FdU储备溶液稀释500倍，以制备2X FOL-FdU工作溶液。

2.2 1X iFluor 647-MTA工作溶液

将2.5 µL 400X iFluor 647-MTA储备溶液添加到1mL染色缓冲液（组分C）中，以制备1X iFluor 647-MTA工作溶液。

2.3 X洗涤缓冲液

向9mL PBS中加入1mL 10X洗涤缓冲液（组分D），制成1X 洗涤缓冲液。 

点击查看细胞样品制备

 

操作步骤

1.准备细胞

1.1对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 100 µL（对于96孔板）过夜培养，以2,500至10,000个细胞/孔/ 20 µL（对于384孔板）过夜培养。

1.2对于非贴壁细胞：离心培养液中的细胞，并将细胞沉淀以1-2 X 106细胞/ ml（对于10个96孔板为10 mL）悬浮在培养液中。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。

2.用FOL-FdU标记细胞

2.1将等体积的2X FOL-FdU工作溶液添加到含有要处理的细胞的培养基中，以在每个孔中获得1X FOL-FdU溶液。我们不建议更换所有培养基，因为这可能会影响细胞增殖速率。

2.2在最适合细胞类型的条件下孵育细胞3小时。FOL-FdU暴露于细胞的时间可以直接测量合成DNA的细胞。孵育时间取决于细胞生长速率。

3.细胞固定

3.1孵育后，移出培养基，并向每个孔中加入100µL冰冷的PBS中的90％甲醇（未提供，甲醇/ PBS，v / v为90/10），并在室温下孵育15分钟。

3.2除去固定缓冲液，并用PBS清洗每个孔中的细胞两次。

4.染色细胞

4.1在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的1X iFluor 488-MTA工作溶液。在避光的条件下，将细胞与工作溶液在室温下孵育30分钟。

4.2除去每个孔中的工作溶液。

4.3用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次，洗涤后每孔加入100µL洗涤缓冲液。注意：如果需要Hoechst 33342染色剂，请在1X洗涤缓冲液中制成5-10 µg / ml Hoechst 33342溶液并染色30分钟。

4.4使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

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产品名称 货号
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*绿色荧光* Cat#22305
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光* Cat#22315

说明书
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光**无铜*.pdf

细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物 货号22039-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物

细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物

细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物 货号22039 货号 22039 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 mg 价格 1008
Ex (nm) 483 Em (nm) 501
分子量 488.36 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物是美国AAT Bioquest生产的用于细胞膜检测的荧光探针，DiA，DiI，DiO，DiD和DiR染料是用于标记细胞膜和其他疏水结构的亲脂性荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时，这些对环境敏感的染料的荧光大大增强，尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞，这些染料在细胞质膜内横向扩散，导致整个细胞以其最佳浓度均匀染色。 DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD受633 nm He-Ne激光器的激发，并且具有比DiI更长的激发和发射波长，为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。 DiR可能对体内成像或追踪有用，因为红外光通过细胞和组织的有效传播和低水平的红外线范围内的自发荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物。 

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料（绿色） 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色；
DiA染料（绿色） 一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料（橙色） 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料（橘色） 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料（红色） 染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。
DiS染料（红色） 一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料（深红色） 常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

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产品说明书

操作方法

1.准备DiO，DiI，DiD，DiS或DiR膜染色溶液：

1.1制备DMSO或EtOH储备溶液：储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。

注意：储备溶液的未使用部分应储存在-20 ℃。 避免反复冻/融循环。

1.2准备工作溶液：将储备溶液（步骤1.1）稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基，HBSS或PBS制备1至5μM的工作溶液。

注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定工作溶液的最终浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

 

2.将细胞染成悬浮液：

2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL（来自步骤1.2）。

2.2在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。

2.4取出上清液，轻轻地将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中。

2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

 

3.染色贴壁细胞：

3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

3.2从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.3将100μL染料工作溶液（来自步骤1.2）吸移到盖玻片的角落，轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。

3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

3.5排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片2-3次。每个洗涤循环用预热的生长培养基覆盖细胞，孵育5-10分钟后排出培养基。

 

4.显微镜检测：

4.1说明书中的表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。

4.2为了同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：

a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

 

5.流式细胞仪检测：

用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects
Authors: Zhiwang Song, Yun Lin, Chan Feng Xia Zhang, Yonglin Lu, Yong Gao, Chunyan Dong
Journal: International Journal of Nanomedicine (2017): 1941

In vivo imaging system for explants analysis—A new approach for assessment of cell transplantation effects in large animal models
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzinska, Radoslaw Zagozdzon, Bartosz Dybowski, Marta Butrym, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
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Mesenchymal stem cells increase skin graft survival time and up-regulate PD-L1 expression in splenocytes of mice
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Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model
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Journal: Scientific Reports (2017)

On-Demand Drug Releasing from Dual Targeting Small Nanoparticles Triggered by High Intensity Focused Ultrasound Enhanced Glioblastoma Targeting Therapy
Authors: Zimiao Luo, Kai Jin, Qiang Pang, shun shen, Zhiqiang Yan, Ting Jiang, Xiaoyan Zhu, Lei Yu, Zhiqing Pang, Xinguo Jiang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Overexpression of c-Met in bone marrow mesenchymal stem cells improves their effectiveness in homing and repair of acute liver failure
Authors: Kun Wang, Yuwen Li, Tiantian Zhu, Yongting Zhang, Wenting Li, Wenyu Lin, Jun Li, Chuanlong Zhu
Journal: Stem Cell Research & Therapy (2017): 162

The accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanoemulsion upon cross administration with nanoemulsions modified with polyglycerin
Authors: Yuqing Su, Lirong Wang, Kaifan Liang, Mengyang Liu, Xinrong Liu, Yanzhi Song, Yihui Deng
Journal: Asian Journal of Pharmaceutical Sciences (2017)

A dual brain-targeting curcumin-loaded polymersomes ameliorated cognitive dysfunction in intrahippocampal amyloid-β1–42-injected mice
Authors: Tingting Jia, Zhiguo Sun, Ying Lu, Jie Gao, Hao Zou, Fangyuan Xie, Guoqing Zhang, Hao Xu, Duxin Sun, Yuan Yu
Journal: International Journal of Nanomedicine (2016): 3765

Annonaceous acetogenins nanosuspensions stabilized by PCL-PEG block polymer: significantly improved antitumor efficacy
Authors: Jingyi Hong, Yanhong Li, Yijing Li, Yao Xiao, Haixue Kuang, Xiangtao Wang
Journal: International Journal of Nanomedicine (2016): 3239

说明书
细胞膜荧光探针DiOC3(3),碘化物.pdf