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Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 货号22811-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 货号22811 货号 22811 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 503 Em (nm) 527
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量凋亡染色质浓缩来监测细胞凋亡。与健康细胞相比，凋亡细胞的染色质紧密结合更多数量的核染料。我们的Cell Meter 核细胞凋亡测定试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可用于检测核浓缩细胞的凋亡。这种荧光测定法是基于使用我们专有的非荧光染料对细胞中DNA含量的检测，该染料在与DNA结合后会发出强烈的荧光。在正常细胞中，Nuclear Green 不具有细胞渗透性，但是在凋亡细胞中，质膜受损或细胞代谢受损/没有细胞代谢的细胞无法阻止染料进入细胞。染料一旦进入细胞，便会与细胞内DNA结合，产生高度荧光的复合物，从而将细胞鉴定为无活力的细胞。核绿色染色；可以使用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜（FITC滤波片组）测量DCS1。该试剂盒可与我们的其他凋亡试剂一起使用，例如我们的Cell Meter NIR线粒体膜电位检测试剂盒（Cat＃22802），用于细胞存活率和凋亡的多参数研究。该试剂盒经过优化，可筛选凋亡激活剂和抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒。

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适用仪器

流式细胞仪  
激发： 480nm激光
发射： 530/30nm滤波片
通道： FITC通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 将5µL 200X Nuclear Green DCS1加入1 mL细胞溶液中
  3. 将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30至60分钟
  4. 沉淀细胞并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
  5. 使用带有FL1通道的流式细胞仪分析荧光强度

 

实验步骤

1.对于每个样品，在1 mL温暖的培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞以诱导凋亡。

3.向处理过的细胞中加入5 µL 200X Nuclear Green DCS1（组分A）。

4.将细胞溶液在37°C，5％CO2培养箱中孵育30至60分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞贴壁，并在用Nuclear Green DCS1染料上样溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.可选：以1000 rpm离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于1 mL的测定缓冲液（组分B）或自备缓冲液中。

6.使用带有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490/525 nm）检测荧光强度。

 

参考文献

Curcumin induces cell cycle arrest and apoptosis in human osteosarcoma (HOS) cells
Authors: Lee DS, Lee MK, Kim JH.
Journal: Anticancer Res (2009): 5039

Real-time in vivo imaging of retinal cell apoptosis after laser exposure
Authors: Schmitz-Valckenberg S, Guo L, Maass A, Cheung W, Vugler A, Moss SE, Munro PM, Fitzke FW, Cordeiro MF.
Journal: Invest Ophthalmol Vis Sci (2008): 2773

Effects of Chinese herbal recipe Weichang’an in inducing apoptosis and related gene expression in human gastric cancer grafted onto nude mice
Authors: Zhao AG, Yang JK, You SF, Li T, Zhao HL, Gu Y, Tang LD, Qiu JX.
Journal: Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao (2007): 287

Effects of neuraminidase on apoptosis of blood lymphocytes in rats with implanted Morris tumor
Authors: Grata-Borkowska U, Steciwko A, Pokorski M, Drobnik J, Gasiorowski K, Pirogowicz I, Cieslar-Marczak E.
Journal: J Physiol Pharmacol (2007): 253

Growth arrest and apoptosis induced by quercetin is not linked to adipogenic conversion of human preadipocytes
Authors: Morikawa K, Ikeda C, Nonaka M, Suzuki I.
Journal: Metabolism (2007): 1656

Morphological study on apoptosis Hela cells induced by soyasaponins
Authors: Xiao JX, Huang GQ, Zhu CP, Ren DD, Zhang SH.
Journal: Toxicol In Vitro (2007): 820

Apoptosis induction and mitochondria alteration in human HeLa tumour cells by photoproducts of Rose Bengal acetate
Authors: Panzarini E, Tenuzzo B, Palazzo F, Chionna A, Dini L.
Journal: J Photochem Photobiol B (2006): 39

Cell-free plasma DNA: a marker for apoptosis during hemodialysis
Authors: Atamaniuk J, Ruzicka K, Stuhlmeier KM, Karimi A, Eigner M, Mueller MM.
Journal: Clin Chem (2006): 523

Cytoplasmic Ca2+ signals and cellular death by apoptosis in myocardiac H9c2 cells
Authors: Lax A, Soler F, Fern and ez-Belda F.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 937

Growth inhibition and apoptosis inducing mechanisms of curcumin on human ovarian cancer cell line A2780
Authors: Zheng LD, Tong QS, Wu CH.
Journal: Chin J Integr Med (2006): 126

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Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 货号36315-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 货号36315 货号 36315 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 4584
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒，Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的感兴趣的GPCR的细胞预加载有可以穿过细胞膜的Fluo-8 NW。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被酯酶裂解，导致带电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体发出细胞内钙的释放信号，这显着增加了Fluo-8 NW的荧光。 Fluo-8 NW具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，是测量细胞钙的理想指标。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒为监测G蛋白偶联受体和钙通道提供了一种优化的检测方法。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙检测试剂盒。

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适用仪器

荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 510nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他可用仪器：
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞过夜，对于96孔板，具有0.5-1％FBS，40,000至80,000个细胞/孔/100μL，或者对于384孔板，为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中（参见下面的步骤2.4），125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

 

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液：
2.1在使用前，在室温下1小瓶Fluo-8 NW（组分A），1瓶10XPluronic®F127Plus（组分B）和HHBS（组分C）。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL（Cat＃36314）或200μL（Cat＃36315和＃36316）DMSO到Fluo-8 NW（A组分）小瓶中，混匀。
注意：20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封，未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光，避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液：
一个）。对于Cat＃36314（1个试剂盒）和＃36315（10个试剂盒试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中制备1X测定缓冲液，并充分混合。

B）。对于Cat＃36316（100个试剂盒试剂盒），将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中，制成1X试剂缓冲液，并充分混合。
注意：对于一个平板，10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光，避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液：将20μLFluo-8 NW储备溶液（来自步骤2.2）加入10 mL 1X分析缓冲液（来自步骤2.3），并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行钙测定：
3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8 NW染料加载溶液（来自步骤2.4）加入到细胞板中。
注意：或者，在含有5-10％FBS的生长培养基中培养细胞以改善细胞生长。在这种情况下，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以最小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒（Cat＃36308和36309）]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：如果测定需要37℃，立即进行实验，无需进一步室温孵育。
注2：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1-2小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

参考文献

A Long-Acting PYY3–36 Analog Mediates Robust Anorectic Efficacy with Minimal Emesis in Nonhuman Primates
Authors: Shamina M Rangwala, Katharine D’Aquino, Yue-Mei Zhang, Lindsay Bader, Wilson Edwards, Songmao Zheng, Annette Eckardt, Ann Lacombe, Rebecca Pick, Veronica Moreno
Journal: Cell Metabolism (2019)

Oxidative Insults and Mitochondrial DNA Mutation Promote Enhanced Autophagy and Mitophagy Compromising Cell Viability in Pluripotent Cell Model of Mitochondrial Disease
Authors: Dar-Shong Lin, Yu-Wen Huang, Che-Sheng Ho, Pi-Lien Hung, Mei-Hsin Hsu, Tuan-Jen Wang, Tsu-Yen Wu, Tsung-Han Lee, Zo-Darr Huang, Po-Chun Chang
Journal: Cells (2019): 65

Prosocial effects of an oxytocin metabolite, but not synthetic oxytocin receptor agonists, in a mouse model of autism
Authors: Sheryl S Moy, Brian L Teng, Viktoriya D Nikolova, Natallia V Riddick, Catherine D Simpson, Amy Van Deusen, William P Janzen, Maria F Sassano, Cort A Pedersen, Michael B Jarstfer
Journal: Neuropharmacology (2019): 301–311

Human iPS cell-derived cardiac tissue sheets for functional restoration of infarcted porcine hearts
Authors: Masanosuke Ishigami, Hidetoshi Masumoto, Takeshi Ikuno, Takayuki Aoki, Masahide Kawatou, Kenji Minakata, Tadashi Ikeda, Ryuzo Sakata, Jun K Yamashita, Kenji Minatoya
Journal: PloS one (2018): e0201650

Structural characterization of agonist binding to protease-activated receptor 2 through mutagenesis and computational modeling
Authors: Amanda J Kennedy, Flavio Ballante, Johan R Johansson, Graeme Milligan, Linda Sundström, Anneli Nordqvist, Jens Carlsson
Journal: ACS Pharmacology & Translational Science (2018): 119–133

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

 

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Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒 货号13842-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒

Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒

Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒 货号13842 货号 13842 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 575 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测黄嘌呤的试剂盒，黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋剂来源于黄嘌呤，包括咖啡因，氨茶碱，IBMX，旁黄嘌呤，己酮可可碱，可可碱和茶碱，它们可以刺激心率，收缩力，高浓度的心律失常。 因此，检测生物样品中的黄嘌呤变化对于疾病诊断和治疗监测是重要的。 Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒为测量黄嘌呤提供了一种快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸释放过氧化氢，用吸光度酶标仪在576nm处用Amplite Red进行特异性测定。 使用Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至1.2μM的黄嘌呤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒。 

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收： 570/610nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备黄嘌呤标准品和测试样品（50 µL）
2.添加黄嘌呤工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.OD比为570/610 nm时读取吸光度增加

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 Amplite 红色底物储备液（250X）：
在Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（组分F）。注意：Amplite 红色底物在硫醇（如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇）的存在下不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10 µM。由于Amplite Red的pH不稳定> 8.5，因此应在pH 7 – 8（建议pH 7.4）下进行测定。

1.2 HRP储备溶液（500X）：
将100 µL测定缓冲液（组分B）加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）储备溶液（100X）：
向小瓶黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）中添加100 µL测定缓冲液（组分B），制成黄嘌呤氧化酶（XO）储备液（100X）。

1.4 黄嘌呤标准溶液（100 µM）：
将5 µL黄嘌呤标准品（组分D）添加到995 µL测定缓冲液（组分B）中，得到100 µM黄嘌呤标准溶液。

 

2.标准溶液配制

黄嘌呤标准品
用100 µM黄嘌呤标准溶液（X7）进行1：3系列稀释，以获得黄嘌呤标准液（X6-X1）。

 

3.工作溶液配制

将20μL的Amplite Red底物储备液（250X），10μL的HRP储备液（500X）和50μL的黄嘌呤氧化酶储备液（100X）加入5 mL的测定缓冲液中，使总体积为5.08 mL，避光。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板（50 µL /孔）中的黄嘌呤标准品和测试样品的布局。 X =黄嘌呤标准品（X1-X7，0.1至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL BL TS TS
X1 X1 … …
X2 X2 … …
X3 X3    
X4 X4    
X5 X5    
X6 X6    
X7 X7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
X1-X7 50ul 连续稀释液（0.1至100 µM）
BL 50ul 分析缓冲液（组分B）
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备黄嘌呤标准品（X），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向黄嘌呤标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL工作溶液，以使黄嘌呤测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应30至60分钟。

4.使用吸光度板读数器以570/610 nm的OD比监视信号强度。

 

参考文献

Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation
Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.
Journal: J Endod (2014): 51

Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides
Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.
Journal: J Toxicol Sci (2014): 71

A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water
Authors: Zhang J, Yang X.
Journal: Analyst (2013): 434

Analysis of the germination kinetics of individual Bacillus subtilis spores treated with hydrogen peroxide or sodium hypochlorite
Authors: Setlow B, Yu J, Li YQ, Setlow P.
Journal: Lett Appl Microbiol (2013): 259

Comparative antimicrobial activities of aerosolized sodium hypochlorite, chlorine dioxide, and electrochemically activated solutions evaluated using a novel standardized assay
Authors: Thorn RM, Robinson GM, Reynolds DM.
Journal: Antimicrob Agents Chemother (2013): 2216

Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water
Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.
Journal: Exp Anim (2013): 237

Green synthesis of carbon dots with down- and up-conversion fluorescent properties for sensitive detection of hypochlorite with a dual-readout assay
Authors: Yin B, Deng J, Peng X, Long Q, Zhao J, Lu Q, Chen Q, Li H, Tang H, Zhang Y, Yao S.
Journal: Analyst (2013): 6551

Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite
Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.
Journal: Molecules (2013): 1638

A novel flow-injection analysis system for evaluation of antioxidants by using sodium dichloroisocyanurate as a source of hypochlorite anion
Authors: Ichiba H, Hanami K, Yagasaki K, Tanaka M, Ito H, Fukushima T.
Journal: Drug Discov Ther (2012): 44

Colorimetric determination of hypochlorite with unmodified gold nanoparticles through the oxidation of a stabilizer thiol compound
Authors: Zhang J, Wang X, Yang X.
Journal: Analyst (2012): 2806

 

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产品名称 货号
Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒 Cat#13843
Amplite NADPH检测试剂盒(比色法) Cat#15272
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Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒 货号23001-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒

Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒

Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒 货号23001 货号 23001 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 333 Em (nm) 518
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

自噬是动物细胞内大分子降解的主要途径之一。 自噬过程涉及将细胞质和细胞内细胞器隔离在称为自噬体的膜结合液泡中，将自噬体与溶酶体融合，然后降解被隔离的物质。 Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒采用Autophagy Super Blue 作为特异性自噬标记物来分析自噬活性。 该测定法经过优化，可直接检测分离和粘附细胞中的自噬。 Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒针对荧光显微镜进行了优化。 它提供了比其他市售自噬探针更高的选择性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒。

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： DAPI滤波片
发射： DAPI滤波片
推荐孔板： 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用您的测试化合物以1-2×104个细胞/孔的密度制备细胞
2.添加自噬Super Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分钟
4.用洗涤缓冲液洗涤细胞
5.使用DAPI滤光片组检测在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）处的荧光

 

溶液配制

 工作溶液配制

将20μL500X自噬Super Blue （组分A）添加到10 mL染色缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Autophagy Super Blue 工作溶液，避光。 注意：20μL500X自噬Super Blue （组分A）足以容纳一个96孔板。

 

实验步骤

1.根据您的特定诱导方案将细胞培养至最适合自噬诱导的密度（约1-2×104细胞/孔/ 96孔板）。同时，在每种标记条件下，以与诱导种群相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞种群。

2.除去培养基。

3.在每孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的自噬Super Blue 工作溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15至60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。

5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中添加100 µL洗涤缓冲液（组分C）。注意：建议增加标记浓度或孵育时间，使染料在细胞未充分染色的情况下积累。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 330/520 nm（Cutoff = 475 nm）上检测荧光强度，或使用带有DAPI滤光片组的荧光显微镜。
 

图示

 

 

Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒 货号23001

图1.通过自噬在HeLa细胞中诱导自噬Super Blue 标记的囊泡。 将HeLa细胞在常规DMEM培养基（左：对照）中或在含5％血清的1X HBSS缓冲液中（右：自噬处理）孵育16小时。对照细胞和处理过的细胞均在37°C，5％CO2培养箱中与Autophagy Super Blue 工作溶液一起孵育20分钟，并用洗涤缓冲液洗涤3次。 立即在带有DAPI通道（蓝色）的荧光显微镜下对细胞成像。 细胞核用Nuclear Gree LCS1（绿色）染色。

 

 

参考文献

Methods for Measuring Autophagy Levels in Disease
Authors: Phadwal, Kanchan and Kurian, Dominic
Journal: (2017): 195–211

High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagy
Authors: Chang, Tzu-Ching and Hsu, Min-Fen and Wu, Kenneth K
Journal: PloS one (2015): e0126537

Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cells
Authors: Tsai, Jen-Pi and Lee, Chien-Hsing and Ying, Tsung-Ho and Lin, Chu-Liang and Lin, Chia-Liang and Hsueh, Jung-Tsung and Hsieh, Yi-Hsien
Journal: Oncotarget (2015): 28851

An autophagy inhibitor enhances the inhibition of cell proliferation
Authors: Yao F, Wang G, Wei W, Tu Y, Tong H, Sun S.
Journal: Mol Med Report (2012): 84

High-Throughput Screening for AntiInfluenza A Virus Drugs and Study of the Mechanism of Procyanidin on Influenza A VirusInduced Autophagy
Authors: Dai J, Wang G, Li W, Zhang L, Yang J, Zhao X, Chen X, Xu Y, Li K.
Journal: J Biomol Screen. (2012)

Tgf-beta1 induces autophagy and promotes apoptosis in renal tubular epithelial cells
Authors: Xu Y, Yang S, Huang J, Ruan S, Zheng Z, Lin J.
Journal: Int J Mol Med. (2012)

beta-Elemene induces apoptosis as well as protective autophagy in human non-small-cell lung cancer A549 cells
Authors: Liu J, Hu XJ, Jin B, Qu XJ, Hou KZ, Liu YP.
Journal: J Pharm Pharmacol (2012): 146

A new fluorescence-based assay for autophagy
Authors: Proikas-Cezanne T, Codogno P.
Journal: Chem Biol (2011): 940

Inhibition of induced autophagy increases apoptosis of Nara-H cells
Authors: Nakamura O, Hitora T, Akisue T, Kawamoto T, Yamagami Y, Yamamoto T.
Journal: Int J Oncol (2011): 1545

Reactive oxygen species contribute to oridonin-induced apoptosis and autophagy in human cervical carcinoma HeLa cells
Authors: Zhang YH, Wu YL, Tashiro S, Onodera S, Ikejima T.
Journal: Acta Pharmacol Sin (2011): 1266

说明书
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Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 货号22817-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 货号22817 货号 22817 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 532 Em (nm) 619
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 *蓝色荧光* 是通过测量Caspase 9的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 9是CED-3亚家族中的一员。活化的Caspase 9能切割下游caspases,例如caspase-3,-6和-7，起始Caspase级联反应。在正常发育的中枢神经系统中，活化的Caspase 9是凋亡所必需的。Caspase 9具有底物的选择性，其识别底物基序为Leu-Glu-His-Asp (LEHD)。本试剂盒利用Ac-LEHD-ProRed 作为荧光指示器来检测caspas-9的活性。通过caspas-9的切割ProRed 产生强蓝色荧光，EX/Em = 350/450 nm。这种特性使得试剂盒能适合于DAPI滤光器。本试剂盒提供所有必需组分。该实验稳定、快速且适应高通量筛选的需求。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-9的活性还能筛选caspas-9的抑制剂。很多实验室利用本试剂盒进行高通量抑制剂的筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 620nm
cutoff： 610nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 顶或底读模式

产品说明书

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温下孵育1小时
4.在Ex / Em = 535/620 nm（截止= 610 nm）监测荧光强度（顶部或底部读取模式）

 

工作溶液配制

将5μL的200X Ac-LEHD-ProRed 储备溶液（组分A）加入1mL的分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 9工作溶液。 避光。 注意：Caspase 9工作液不稳定，请及时使用。 1 mL Caspase 9工作溶液足以进行10次分析。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384-板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO2，培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞3-4小时）以诱导细胞凋亡。

3.添加100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 9工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 9工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制剂，以确认抑制caspase 9样活性。

5.在Ex / Em = 540 / 620nm（cutoff= 610nm）下用荧光酶标仪（顶部或底部读取模式）监测荧光强度。注意：有时，底部读数会提供更好的信号背景比。如果使用底部读取模式，则以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟 。

 

数据分析

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 货号22817

图1.使用Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 9活性 红色荧光 。 将Jurkat细胞在同一天以300,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色壁/透明底96孔板中。 用或不用1μM星形孢菌素处理细胞4小时。 加入半胱天冬酶9工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540 / 620nm（截止值= 610nm）下测量荧光强度。

 

参考文献

Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Luis Mario Aguirre Palma, Hanna Flamme, Iris Gerke, Karl-Anton Kreuzer
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13–26

Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Gertrud Knoll, Sebastian Bittner, Maria Kurz, Jonathan Jantsch, Martin Ehrenschwender
Journal: Oncotarget (2016)

microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: Wei He, Jianfang Feng, Yan Zhang, Yuanyuan Wang, Wenqiao Zang, Guoqiang Zhao
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317–324

Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Lin Wang, Xiaofan Hu, Xiangyu Ma, Zhensheng Ma, Yang Zhang, Yizhao Lu, Xiang Li, Wei Lei, Yafei Feng
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452

Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Q Wang, Y Shi, HJ Butler, J Xue, G Wang, P Duan, H Zheng
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006

Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Jianjun Han, Lu Zhang, Hui Guo, Weiya Z Wysham, Dario R Roque, Adam K Willson, Xiugui Sheng, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668–675

IL-7 abrogates the immunosuppressive function of human double-negative T cells by activating Akt/mTOR signaling
Authors: Andrea Allgäuer, Elisabeth Schreiner, Fulvia Ferrazzi, Arif B Ekici, Armin Gerbitz, Andreas Mackensen, Simon Völkl
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139–3148

Insulin improves osteogenesis of titanium implants under diabetic conditions by inhibiting reactive oxygen species overproduction via the PI3K-Akt pathway
Authors: Lin Wang, Xiong Zhao, Bo-yuan Wei, Yi Liu, Xiang-yu Ma, Jian Wang, Peng-chong Cao, Yang Zhang, Ya-bo Yan, Wei Lei
Journal: Biochimie (2015): 85–93

LGL1 modulates proliferation, apoptosis, and migration of human fetal lung fibroblasts
Authors: Hui Zhang, Neil B Sweezey, Feige Kaplan
Journal: American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology (2015): L391–L402

t-BHQ Provides Protection against Lead Neurotoxicity via Nrf2/HO-1 Pathway
Authors: Fang Ye, Xiaoyi Li, Lili Li, Jing Yuan, Jun Chen
Journal: Oxidative medicine and cellular longevity (2015)

 

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