Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 红色荧光 货号11954-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 红色荧光

货号 11954 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 2604
Ex (nm) 592 Em (nm) 609
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒,碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端,并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶,而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化,Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析(特别是免疫分析)和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶分析试剂盒 *红色荧光* 利用磷酸酶SunRed红色荧光底物的特性,来定量检测溶液中、细胞抽提液,固相物质表面(例如PVDF膜)的碱性磷酸酶活性。这种磷酸酶荧光底物在磷酸酶催化下产生的荧光产物具有强烈的红色荧光。本试剂盒提供所有必需组分,包括我们最佳的产品组合和分析方法,并且与可用于HTS(高通量筛选)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 620nm
发射: 660nm
cutoff: 630nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液(50μL)
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度(截止= 630 nm)

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 底物储备液(250X):
将100μL双无菌H2O加入到SunRed 底物(组分A)的小瓶中,制备250X SunRed 底物储备溶液。 应立即使用原液。

1.2碱性磷酸酶标准溶液(100 U / mL):
添加100μL含0.1%BSA(H2O-0.1%BSA)的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品(组分C,10单位),以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。 注意:碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

 

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1%BSA中,生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液,进行1:3连续稀释,得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品(AS7-AS1)和H2O-0.1%BSA。

 

3.工作溶液

对于一个96孔板,将20μL250XSunRed 底物储备溶液加入到5 mL分析缓冲液(组分B)中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 注意:避免光照并为每个实验准备新鲜的反应混合物。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品(AS1-AS7,0.3至300 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.3至300 mU / mL)
BL 50ul H2O – 0.1% BSA
TS 50ul 测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定:

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液,使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液,总体积为50μL/孔。

1.3在所需温度下将反应温育30至120分钟,避光。

1.4用Ex / Em = 620 / 660nm(截止值= 630nm)的荧光板读数器监测荧光增加。

 

2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定:

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意:由于生长培养基与SunRed™底物的干扰,重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4向每个细胞孔中加入100μL(96孔板)或50μL(384孔板)的1:1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。

2.5在所需温度下孵育反应30至60分钟,避光。

2.6用Ex / Em = 620 / 660nm(截止值= 630nm)的荧光板读数器监测荧光增加。

 

参考文献

The impact of various scaffold components on vascularized bone constructs
Authors: Ahmad Eweida, Matthias Schulte, Oliver Frisch, Ulrich Kneser, Leila Harhaus
Journal: Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery (2017)

A Mineralized High Strength and Tough Hydrogel for Skull Bone Regeneration
Authors: Bing Xu, Pengbin Zheng, Fei Gao, Wei Wang, Hongtao Zhang, Xuran Zhang, Xuequan Feng, Wenguang Liu
Journal: Advanced Functional Materials (2016)

DRG axon elongation and growth cone collapse rate induced by Sema3A are differently dependent on NGF concentration
Authors: Andrius Kaselis, Rimantas Treinys, Ruta Vosyliute, Saulius Satkauskas
Journal: Cellular and molecular neurobiology (2014): 289–296

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

Effect of Some Antihypertensive Drugs on Alkaline Phosphatase and DNA of Mice
Authors: OY El-Khawaga, A El-Waseef, YO Ellazec, MM El-Naggar, Abd M Alla
Journal: International Journal of Genomics and Proteomics (2013): 60

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

Cytotoxicity and alkaline phosphatase activity evaluation of endosequence root repair material
Authors: Mahmoud Reza Modareszadeh, Peter M Di Fiore, David A Tipton, Narges Salamat
Journal: Journal of endodontics (2012): 1101–1105

Alginate-loaded liposomes can protect encapsulated alkaline phosphatase functionality when exposed to gastric pH
Authors: Alan M Smith, Monica R Jaime-Fonseca, Liam M Grover, Serafim Bakalis
Journal: Journal of agricultural and food chemistry (2010): 4719–4724

Regulation of the osteoblast-specific transcription factor Osterix by NO66, a Jumonji family histone demethylase
Authors: Krishna M Sinha, Hideyo Yasuda, Madelene M Coombes, Sharon YR Dent, Benoit De Crombrugghe
Journal: The EMBO journal (2010): 68–79

 

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说明书
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Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 红色荧光 货号13501-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 红色荧光     货号13501 货号 13501 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 2604
Ex (nm) 552 Em (nm) 578
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

蛋白酶测定法广泛用于蛋白酶抑制剂的研究和蛋白酶活性的检测。监测各种蛋白酶活性已成为许多生物实验室的常规任务。 一些蛋白酶已被确定为良好的药物开发目标。

我们的Amplite 通用荧光蛋白酶活性检测试剂盒是进行常规检测分离蛋白酶或鉴定蛋白质样品中污染蛋白酶的理想选择。该试剂盒使用荧光酪蛋白偶联物,其被证明是广谱蛋白酶(例如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,蛋白酶K,蛋白酶XIV和弹性蛋白酶)的通用底物。在完整的底物中,酪蛋白用绿色荧光染料严重标记,导致显着的荧光猝灭。蛋白酶催化的水解减轻了其猝灭效应,产生明亮的荧光染料标记的短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化。使用FITC滤光片组,可以使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm下轻松读取其信号。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

方案一:一个96孔板的测定方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

概述

准备蛋白酶底物溶液(50μL)

加入底物对照,阳性对照或测试样品(50μL)

孵育0分钟(用于动力学读数)或30分钟-1小时(用于终点读数)

在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光强度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备工作解决方案:

1.1制备蛋白酶底物溶液:在2X测定缓冲液(组分C)中以1:100稀释蛋白酶底物(组分A)。在96孔板中每次测定使用50μL蛋白酶底物溶液。

注意:2X分析缓冲液(组分C)设计用于检测胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,蛋白酶K,蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶,请参阅附录I了解适当的分析缓冲液配方。

1.2胰蛋白酶稀释:在去离子水中以1:50稀释胰蛋白酶(5U /μL,组分B),得到浓度为0.1U /μL。

 

2.根据说明书中的表1和表2,将步骤1中制备的试剂加入96孔微量培养板中。

 

3.运行酶促反应:

3.1将50μL蛋白酶底物溶液(来自步骤1.1)加入到测定板中的所有孔中,充分混合试剂。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光增加。

对于动力学读数:立即开始连续测量荧光强度,每5分钟记录数据30分钟。

终点读数:将反应在所需温度下孵育30至60分钟,避光,测量荧光强度。

  

方案二:使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

概述

准备蛋白酶底物溶液(10μL)添加底物对照,阳性对照,载体对照或测试样品(90μL)

孵育0分钟(用于动力学读数)或30分钟-1小时(用于终点读数)

监测Ex的荧光强度 / Em = 490 / 525nm

 

操作方法

1.准备工作解决方案:

1.1制备1X测定缓冲液:将5mL去离子水加入5mL 2X测定缓冲液(组分C)中。

1.2制备蛋白酶底物溶液:在1X测定缓冲液(来自步骤1.1)中以1:20稀释蛋白酶底物(组分A)。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。

注意:2X测定缓冲液(组分C)设计用于检测胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,蛋白酶K,蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。 对于其他蛋白酶,请参阅附录I了解适当的分析缓冲液配方。

1.3蛋白酶稀释:将蛋白酶在1X测定缓冲液中稀释至浓度为500-1000nM。每个孔需要10μL蛋白酶稀释液。为所有测试样品准备适当的量,并为阳性对照和载体对照孔准备额外的量。

 

2.根据说明书中的表1和表2,将步骤1中制备的试剂加入96孔微量培养板中。

 

3.运行酶促反应:

3.1将10μL蛋白酶底物溶液(来自步骤1.2)加入阳性对照(PC),载体对照(VC)和测试样品(TS)的孔中。 充分混合试剂。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光强度。

对于动力学读数:立即开始连续测量荧光强度,每5分钟记录数据30分钟。

终点读数:将反应在所需温度下孵育30至60分钟,避光。 然后测量荧光强度。

 

参考文献

IL-33, IL-25 and TSLP contribute to development of fungal-associated protease-induced innate-type airway inflammation
Authors: Yoshihisa Hiraishi, Sachiko Yamaguchi, Takamichi Yoshizaki, Aya Nambu, Eri Shimura, Ayako Takamori, Seiko Narushima, Wakako Nakanishi, Yosuke Asada, Takafumi Numata
Journal: Scientific reports (2018): 18052

Tranexamic acid blocks the thrombin-mediated delay of epidermal permeability barrier recovery induced by the cedar pollen allergen, Cry j1
Authors: S Nakanishi, J Kumamoto, M Denda
Journal: Scientific reports (2018): 15610

Eosinophil extracellular trap cell death–derived DNA traps: Their presence in secretions and functional attributes
Authors: Shigeharu Ueki, Yasunori Konno, Masahide Takeda, Yuki Moritoki, Makoto Hirokawa, Yoshinori Matsuwaki, Kohei Honda, Nobuo Ohta, Shiori Yamamoto, Yuri Takagi
Journal: Journal of Allergy and Clinical Immunology (2016): 258–267

Japanese Cedar (Cryptomeria japonica) pollen allergen induces elevation of intracellular calcium in human keratinocytes and impairs epidermal barrier function of human skin ex vivo
Authors: Junichi Kumamoto, Moe Tsutsumi, Makiko Goto, Masaharu Nagayama, Mitsuhiro Denda
Journal: Archives of dermatological research (2016): 49–54

Impact of silk biomaterial structure on proteolysis
Authors: Joseph Brown, Chia-Li Lu, Jeannine Coburn, David L Kaplan
Journal: Acta biomaterialia (2015): 212–221

Incorporation of proteinase inhibitors into silk-based delivery devices for enhanced control of degradation and drug release
Authors: Eleanor M Pritchard, Thomas Valentin, Detlev Boison, David L Kaplan
Journal: Biomaterials (2011): 909–918

 

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说明书
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Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光 货号22623-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光

Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光

Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光     货号22623 货号 22623 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 575 Em (nm) 600
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于标记活细胞的试剂盒,我们的Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒使用专有的橙色荧光染料,当进入活细胞时,该荧光染料会增强荧光。该染料是疏水性化合物,易于渗透完整的活细胞。细胞内酯酶对弱荧光底物的水解产生了强烈荧光的亲水性产物,该产物被很好地保留在细胞质中。跟踪染料具有良好的光稳定性和强大的成像性能。该试剂盒特别适用于细胞的多色流式细胞分析。它也可以与配备TRITC滤光片试剂盒的荧光显微镜一起使用。该试剂盒为细胞功能的流式细胞术和荧光显微镜研究提供了标记细胞的有效工具。细胞的有效标记为研究时空背景下的细胞事件提供了一种有力的方法。该试剂盒可用于多种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞生存力,细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有基本组件提供了优化的细胞标记方案。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Explorer 活细胞标记试剂盒。

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm or 561nm激光
发射: 610/20nm滤波片
通道: PE-Texas Red通道
荧光显微镜  
激发: 570nm
发射: 600nm
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: Texas Red滤波片

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备样品
2.从培养箱中取出细胞板
3.添加10X Track It Red工作溶液(10 µL /孔)
4.将细胞在室温下染色15至60分钟
5.清洗细胞
6.在Ex / Em = 570/600 nm的荧光显微镜下检查标本或使用带Texas Red滤光片的流式细胞仪

 

溶液配制

1.工作溶液配制

将500X Track It Red DMSO储备溶液(组分A)稀释到测定缓冲液(组分B)中,制成10至25X Track It Red工作溶液。 对于所有孔,应以适当的浓度以10μL/孔制备足够的工作溶液。 例如,要使一块96孔微孔板的TrackIt Red终浓度达到10X,可将20μL500X Track It Red DMSO储备溶液稀释到1 mL的测定缓冲液(组分B)中,制成1 mL的10X Track It Red工作解决方案。 注意:对于不同的细胞类型和/或实验条件,应凭经验确定Track It Red工作溶液的最终浓度。 建议以至少十倍以上的浓度进行测试。

点击查看细胞制备方案

 

样品示例及操作

1.将10X Track It Red工作溶液添加到细胞孔中,该溶液应等于细胞培养基体积的1/10。 例如,对于96孔板,将10μL/孔的10X Track It Blue工作溶液添加到细胞中。

2.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育15至60分钟。

3.用Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或适当的缓冲液洗涤细胞。

4.用生长培养基填充细胞孔。

5.使用Ex / Em = 570/600 nm的荧光显微镜或带有Texas Red滤光片组的流式细胞仪分析细胞。

Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光     货号22623

图1. Costar黑壁/透明底部96孔板中用Cell Explorer 活细胞跟踪试剂盒*红色荧光*染色的Hela细胞图像

参考文献

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
Authors: Marija Cemma, Sergio Grinstein, John H Brumell
Journal: Autophagy (2016): 1440–1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
Authors: Ja Hye Myung, Khyati A Gajjar, Jihua Chen, Robert E Molokie, Seungpyo Hong
Journal: Analytical chemistry (2014): 6088–6094

Versatile fabrication of nanoscale sol–gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
Authors: Bo Lei, Xiaofeng Chen, Xue Han, Jiaan Zhou
Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906–16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
Authors: K Nonaka, Y Kajiura, M Bando, E Sakamoto, Y Inagaki, JH Lew, K Naruishi, T Ikuta, K Yoshida, T Kobayashi
Journal: Journal of Periodontal Research

 

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说明书
Cell Explorer 活细胞示踪试剂盒 红色荧光 .pdf

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光 货号13502-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光     货号13502 货号 13502 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) 341 Em (nm) 441
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光是AAT Bioquest研发的用于检测半胱天冬酶活性的试剂盒。半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用,而Caspase 3/7(CPP32 / apopain)的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3/7也被鉴定为药物筛选靶标。半胱天冬酶抑制剂具有抗癌和其他药理学潜力。已经证明Caspase 3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物选择性。

我们的Amplite™荧光Caspase 3/7检测试剂盒使用Ac-DEVD-AMC作为Caspase 3/7活性的荧光指示剂。AMC肽几乎不发荧光。 Caspase 3/7对AMC肽的切割产生强荧光AMC,其在440-460nm下荧光监测,激发340-350nm。 它可用于使用荧光酶标仪或荧光计连续测量细胞提取物和纯化酶制剂中Caspase 3/7的活性。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的Caspase 检测试剂/试剂盒。

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光     货号13502

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 350nm
发射: 450nm
cutoff: 420nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

 

概述

用测试化合物制备细胞(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)

加入等体积的Caspase 3/7测定溶液

在室温下孵育1小时

监测Ex的荧光强度 / Em = 350 / 450nm

 

操作方法

1.准备细胞:

1.1对于贴壁细胞:在生长培养基中将细胞在20,000至80,000个细胞/孔/ 90L过夜,96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/ 20L,用于384孔板。

1.2对于非粘附细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀悬浮于培养基中,培养基浓度为80,000至200,000细胞/孔/ 90L,用于96孔poly-D赖氨酸平板或20,000至50,000细胞/孔/ 20L用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前,在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备库存解决方案:

2.1在使用前,在室温下使用组分A,B,C(如果需要,组分D)。

2.2如果需要,制备1mM Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO储备液:将100μLDMSO(未提供)直接加入到Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO小瓶中(组分D) )。该抑制剂可用于确认荧光信号强度与Caspase 3/7样蛋白酶活性之间的相关性。

注意:应将未使用的抑制剂储备液等分并在-20°C下干燥储存。

3.准备Caspase 3/7检测溶液:

将50μL200XCaspase 3/7底物储备溶液(组分A)和100μL1MDTT溶液(组分C)加入10mL测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。

注意:50μL的200X Caspase 3/7底物储备液足以进行100次分析,每次分析的反应体积为100μL。未使用的200X Caspase 3/7底物储备溶液应等分并在-20°C下干燥储存。远离光明。

4.运行Caspase 3/7测定:

4.1通过在PBS或所需缓冲液中加入10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384-板)来处理细胞。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

4.2将细胞板在37℃,5%CO 2培养箱中培养所需的一段时间(用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

4.3加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Caspase 3/7测定溶液(来自步骤3)。

4.4在室温下孵育板至少1小时,避光。

注1:如果需要,在室温下加入测定溶液10分钟前,将1L Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO的1mM储备液(来自步骤2.2)加入所选样品,以确认caspase 3 / 7个类似的活动。

4.5在制动器关闭的情况下,以800rpm离心细胞板(特别是对于非贴壁细胞)2分钟。

4.6在Ex / Em = 350 / 450nm处观察荧光增加。

 

数据分析

        从具有细胞的那些孔的值中减去具有生长培养基的空白孔中的荧光。空白孔的背景荧光根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光     货号13502

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 Jurkat细胞在同一天以80,000个细胞/孔/ 90L在黑色壁/透明底96孔Costar平板中接种。 用或不用20M喜树碱处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液(100μL/孔)并在室温下温育1小时。 使用NOVOStar仪器(来自BMG Labtech)在Ex / Em = 350 / 450nm下测量荧光强度。

 

参考文献

The use of tail-anchored protein chimeras to enhance liposomal cargo delivery
Authors: Abbi Abdelrehim, Lior Shaltiel, Ling Zhang, Yechezkel Barenholz, Stephen High, Lynda K Harris
Journal: PloS one (2019): e0212701

High STMN1 level is associated with chemo-resistance and poor prognosis in gastric cancer patients
Authors: Tuya Bai, Takehiko Yokobori, Bolag Altan, Munenori Ide, Erito Mochiki, Mitsuhiro Yanai, Akiharu Kimura, Norimichi Kogure, Toru Yanoma, Masaki Suzuki
Journal: British Journal of Cancer (2017)

The trivalent cerium-induced cell death and alteration of ion flux in sweetpotato [Ipomoea batatas (L.) Lam]
Authors: Jiaojiao Jiang, Jianzhong Hu, Zeyi Xie, Qinghe Cao, Daifu Ma, Yonghua Han, Zongyun Li
Journal: Journal of Rare Earths (2017)

Uncarboxylated Osteocalcin Induces Antitumor Immunity against Mouse Melanoma Cell Growth
Authors: Yoshikazu Hayashi, Tomoyo Kawakubo-Yasukochi, Akiko Mizokami, Mai Hazekawa, Tomiko Yakura, Munekazu Naito, Hiroshi Takeuchi, Seiji Nakamura, Masato Hirata
Journal: Journal of Cancer (2017): 2478–2486

Docetaxel induces Bcl-2-and pro-apoptotic caspase-independent death of human prostate cancer DU145 cells
Authors: Takeharu Ogura, Yoshiyuki Tanaka, Hiroki Tamaki, Mamoru Harada
Journal: International journal of oncology (2016): 2330–2338

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

Identification of an allosteric small-molecule inhibitor selective for the inducible form of heat shock protein 70
Authors: Matthew K Howe, Khaldon Bodoor, David A Carlson, Philip F Hughes, Yazan Alwarawrah, David R Loiselle, Alex M Jaeger, David B Darr, Jamie L Jordan, Lucas M Hunter
Journal: Chemistry & biology (2014): 1648–1659

说明书
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光 .pdf

Cell Explorer 活细胞标记试剂盒 绿色荧光,在405nm激发 货号22615-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Explorer 活细胞标记试剂盒 绿色荧光,在405nm激发

Cell Explorer 活细胞标记试剂盒 绿色荧光,在405nm激发

Cell Explorer 活细胞标记试剂盒 绿色荧光,在405nm激发     货号22615 货号 22615 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 420 Em (nm) 505
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Explorer 活细胞标记试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于标记活细胞的试剂盒,我们的Cell Explorer 荧光成像试剂盒是一套用于标记细胞的工具,用于细胞功能的荧光显微镜研究。细胞的有效标记为研究时空背景下的细胞事件提供了一种有力的方法。该特定试剂盒设计用于均匀标记活细胞,以便用紫激光(405 nm激发)对活细胞进行流式细胞分析。该试剂盒使用一种专有染料,当进入活细胞时,该染料会增强荧光。该染料是疏水性化合物,易于渗透完整的活细胞。细胞内酯酶对弱荧光底物的水解产生了强烈荧光的亲水性产物,该产物被很好地保留在细胞质中。它可以很容易地适应流式细胞仪的应用。试剂盒中使用的荧光染料已被紫激光(405 nm激发)充分激发到〜510 nm的荧光。该试剂盒为所有基本组件提供了优化的细胞标记方案。它可用于多种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞生存力,细胞凋亡和细胞毒性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Explorer 活细胞标记试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405 nm激光
发射: 525/40 nm滤波片
通道: AmCyan通道
荧光显微镜  
激发: 紫色滤波片
发射: 紫色滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.去除生长培养基
3.加入CytoCalcein Violet 450工作溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
4.将细胞在37°C下染色30分钟至1小时
5.清洗细胞
6.在紫色滤波片组的荧光显微镜下或在带有525/40 nm滤波片(AmCyan通道)的流式细胞仪上检测样品

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. CytoCalcein Violet 500储备溶液:
在CytoCalcein Violet 500(组分A)小瓶中加入20 µL DMSO,并充分混合以制成CytoCalcein Violet 500储备液,避光。 注意:20 µL CytoCalcein Violet 500储备液足以装满1个板。

 

2.工作溶液配制

将20 µL CytoCalcein Violet 500储备溶液添加到10 mL HHBS(组分B)中,并充分混合以制成CytoCalcein Violet 500工作溶液。

点击查看细胞制备方案

 

样品示例及操作

1.除去生长培养基。

2.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的CytoCalcein™Violet 500工作溶液加入细胞板。

3.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育30分钟至1小时。

4.从细胞中取出CytoCalcein™Violet 500工作溶液,用HHBS(组分B)洗涤细胞2至3次,然后更换为HHBS。

5.在紫色滤波片组的荧光显微镜下或在带有525/40 nm滤波片(AmCyan通道)的流式细胞仪上检测样品

 
参考文献

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
Authors: Marija Cemma, Sergio Grinstein, John H Brumell
Journal: Autophagy (2016): 1440–1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
Authors: Ja Hye Myung, Khyati A Gajjar, Jihua Chen, Robert E Molokie, Seungpyo Hong
Journal: Analytical chemistry (2014): 6088–6094

Versatile fabrication of nanoscale sol–gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
Authors: Bo Lei, Xiaofeng Chen, Xue Han, Jiaan Zhou
Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906–16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
Authors: K Nonaka, Y Kajiura, M Bando, E Sakamoto, Y Inagaki, JH Lew, K Naruishi, T Ikuta, K Yoshida, T Kobayashi
Journal: Journal of Periodontal Research

 

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