MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒货号22407-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年3月27日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒

货号	22407	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	3924
Ex (nm)	498	Em (nm)	526
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒，MycoLight流式细胞术活菌分析试剂盒提供了一种简便的方法，可根据细胞内酯酶活性评估细菌活力。 MycoLight™520是一种非荧光酯酶底物，可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。通过细菌细胞内非特异性酯酶水解后，会产生绿色荧光产物，并在细菌内积累。与常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比，该试剂盒可提供更明亮，更稳定的信号，具有更低的背景和更容易的染色方案。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒。

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适用仪器

流式细胞仪
激发：	488 nm 激光
发射：	530/30 nm 滤波片
通道：	FITC通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液。
2.准备细菌样品。
3.将细菌样品与MycoLight 520在黑暗中于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟。
4.通过带有FITC通道的流式细胞仪分析样品。

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1MycoLight 520储备液（100X）：
将100 µL DMSO（组分C）加入一小瓶MycoLight 520（组分A）中，制成100X储备液。

样品示例及操作

1.准备细菌样品，浓度范围为106到108个细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液，然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液（组分B）中，以使处理后样品中的细菌浓度与活菌浓度相同。注意：开始治疗之前，请确定细菌培养物的浓度。注意：死细菌可以作为阴性对照，建议使用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.活/死细菌混合物制备示例：混合7种不同比例的细菌悬液，如表1所示，每个样品的总体积为200 µL。

4.将2 µL 100X MycoLight 520储备液加到200 µL Assay Buffer中的细菌样品中。

5.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分钟，或在室温孵育60分钟，以获得最佳染色效果。

6.在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分C）以增加体积。

7.用流式细胞仪通过FITC通道（488/530 nm）监测细菌的荧光。注意：要排除杂物，建议将流式细胞仪的阈值设置为以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。注意：MycoLight 520的效率高度依赖菌株，因此应相应优化染色条件。

表1.混合以达到各种活/死比的活样本和死样本的示例体积

活细胞比例	样品死亡µL	活样品µL
0:100	0	200
10:90	20	180
30:70	60	140
50:50	100	100
90:10	180	20
100:0	200	0

参考文献

Seminal plasma affects the survival rate and motility pattern of raw llama spermatozoa
Authors: F. G. Fumuso
Journal: Anim Reprod Sci (2018): 99-106

New fluorescein precursors for live bacteria detection
Authors: C. Guilini
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Protective effects of antithrombin on free groin flaps after secondary venous stasis in the rat model
Authors: J. Wallmichrath
Journal: J Plast Reconstr Aesthet Surg (2014): 707-11

Comparison of different live/dead stainings for detection and quantification of adherent microorganisms in the initial oral biofilm
Authors: P. N. Tawakoli
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A multiplexed immunofluorescence method identifies Phakopsora pachyrhizi Urediniospores and determines their viability
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Rapid flow cytometric method for viability determination of solventogenic clostridia
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Expansion of chondrocytes in a three-dimensional matrix for tracheal tissue engineering
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Functional changes and motility characteristics of Japanese Black bull spermatozoa separated by Percoll
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Validation of flow cytometry for assessment of viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa and for evaluation of different methods of cryopreservation
Authors: A. I. Pena
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Kinetic and temporal factors influence chilling injury to germinal vesicle and mature bovine oocytes
Authors: Y. Zeron
Journal: Cryobiology (1999): 35-42

说明书

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MycoLight Green JJ98核酸染料货号24000-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年3月2日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

MycoLight Green JJ98核酸染料

货号	24000	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 uL	价格	2604
Ex (nm)	482	Em (nm)	512
分子量	N/A	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

MycoLight Green JJ98核酸染料是美国AAT Bioquest生产的核酸染料，MycoLight 绿色JJ98染色是一种优秀的绿色荧光核和染色体复染剂，对原核细胞和真核细胞膜均具有渗透性。MycoLight Green JJ98染料对DNA具有高亲和力，并且在与最接近488 nm氩激光线的激发最大值和~500 nm处的荧光发射最大值结合时显示出增强的荧光。MycoLight Green JJ98染色剂特别适用于细菌检测的核复染剂，因为它可以染色活的和死的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。它是STYO®9（STYO®是Invitrogen的商标）的绝佳替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MycoLight Green JJ98核酸染料。

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适用仪器

流式细胞仪
激发：	488nm激光
发射：	530/30nm滤波片
通道：	FITC通道

荧光显微镜
激发：	FITC滤波片
发射：	FITC滤波片
推荐孔板：	黑色透明

产品说明书

样品实验方案

操作步骤

以下协议适用于大多数细胞类型。这些条件需要调整每种细胞类型和实验系统。生长培养基，细胞密度，其他细胞类型和因子的存在可能影响染色。玻璃器皿上的残留洗涤剂也可能影响许多生物的染色，并导致在有或没有细胞存在的溶液中出现明亮染色的物质。

稀释MycoLight Green JJ98和JJ99时使用塑料管，因为稀释的污渍粘附在玻璃上。通常，在不含磷酸盐的缓冲液中获得最佳结果。

1.培养物中的贴壁细胞可以在盖玻片上原位染色。通过离心和悬浮液沉淀细胞重悬于缓冲盐溶液或水中。

2.用非磷酸盐缓冲液（如Hepes缓冲液或您选择的缓冲液）稀释MycoLight Green JJ98或JJ99。添加MycoLight Green JJ98。使用下表1中列出的浓度作为指导。在最初的实验中，最好在整个建议范围内尝试几种染料浓度，以确定产生最佳染色的浓度。

表格1 用MycoLight Green JJ98染色细胞的建议条件

适用	溶度	染色条件
细菌细胞	50 nM – 20μM	涡旋混合，然后孵育1-30分钟。
真核细胞	10 nM – 5μM	孵育10-120分钟。
微孔板	TE缓冲液中50nM	孵育5分钟，冲洗干净。

3.染色的真核细胞通常显示弥漫性细胞质染色以及核染色。特别是经常观察到MycoLight Green JJ98和JJ99对核内体的强烈荧光染色。

参考文献

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Authors: Watts MR, James G, Sultana Y, Ginn AN, Outhred AC, Kong F, Verweij JJ, Iredell JR, Chen SC, Lee R.
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A new triplex real time PCR which distinguishes between MRSA, MSSA, and mecA coagulase negative strains by means of melting point analysis using SYTO 9
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Compatibility of SYTO 13 and Hoechst 33342 for longitudinal imaging of neuron viability and cell death
Authors: Hubbard KS, Gut IM, Scheeler SM, Lyman ME, McNutt PM.
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Evaluation of Pseudomonas aeruginosa (PAO1) adhesion to human alveolar epithelial cells A549 using SYTO 9 dye
Authors: Larrosa M, Truchado P, Espin JC, Tomas-Barberan FA, Allende A, Garcia-Conesa MT.
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Rapid quantification of cell viability and apoptosis in B-cell lymphoma cultures using cyanine SYTO probes
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Journal: Methods Mol Biol (2011): 81

SYTO dyes and EvaGreen outperform SYBR Green in real-time PCR
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Journal: BMC Res Notes (2011): 263

Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus using double duplex real-time PCR and dye Syto 9
Authors: Seputiene V, Vilkoicaite A, Armalyte J, Pavilonis A, Suziedeliene E.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2010): 502

Use of SYTO 13, a fluorescent dye binding nucleic acids, for the detection of microparticles in in vitro systems
Authors: Ullal AJ, Pisetsky DS, Reich CF, 3rd.
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Assessment of acridine orange and SYTO 16 for in vivo imaging of the peritoneal tissues in mice
Authors: Udovich JA, Besselsen DG, Gmitro AF.
Journal: J Microsc (2009): 124

Dynamic analysis of apoptosis using cyanine SYTO probes: from classical to microfluidic cytometry
Authors: Wlodkowic D, Skommer J, Faley S, Darzynkiewicz Z, Cooper JM.
Journal: Exp Cell Res (2009): 1706

说明书

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MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒货号22411-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年2月28日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒

货号	22411	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	5244
Ex (nm)	488/540	Em (nm)	530/620
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒，AAT Bioquest的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒提供双色荧光检测，通过荧光显微镜观察活细菌和死细菌。MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物，可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后，产生绿色荧光产物并在细菌内积累。相比之下，碘化丙锭是一种红色荧光核酸染色剂，只能穿透受损膜的细菌。因此，使用MycoLight 520和碘化丙锭染料的适当混合物，具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光，而具有受损膜的死细菌产生红色荧光。MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是一种用于对活/死细菌进行成像的强大工具。可以在Ex / Em = 488 / 525nm（FITC滤光器组）和540 / 620nm（TRITC滤光器组）下荧光测量染色细胞，分别用于活细菌和死细菌。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒。

适用仪器

荧光显微镜
激发：	488nm / 540nm
发射：	530nm / 620nm
推荐孔板：	黑色透明
滤波片：	FITC / TRITC滤波片组

产品说明书

染色样品示例

概述

1.准备100X MycoLight 520原液
2.准备细菌样本
3.加入MycoLight 520和碘化丙锭
4.将细菌样品与MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜分析样品
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分

操作步骤

在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。

1.MycoLight 520原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入MycoLight 520（组分A）的小瓶中。
注意：将储备溶液储存在-20°C，避免光照，反复冻融。

2.制备浓度为10⁶至10⁸个细胞/ mL的细菌样品。在适当的培养基中将细菌培养到对数晚期。

注意：测量波长= 600 nm（OD600）的细菌培养物的光密度以确定细胞数。对于大肠杆菌培养物，OD 600 = 1.0等于8×10⁸个细胞/ ml。

3.通过以10,000xg离心10分钟除去培养基，并将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分C）中。

4.通过用70％乙醇处理30分钟，然后煮沸60分钟，可以制备死细菌。

5.染色

以下是推荐的方案，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。如果观察到更高的背景，可以在成像之前添加任选的洗涤步骤。

5.1将1μL100XMycoLight 520原液和1μL100X碘化丙啶（组分B）加入到100μL测定缓冲液中的细菌样品中。
5.2充分混合并在37℃下在黑暗中孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟以获得最佳染色结果。
5.3通过FITC（Ex / Em = 488 / 530nm）和TRITC（Ex / Em = 540 / 620nm）通道用荧光显微镜监测细菌的荧光。

染色结果

图1.用MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒染色活的和死的枯草芽孢杆菌的混合群体。具有活性细胞内酯酶的活细菌显示绿色荧光，而具有受损膜的70％酒精杀死的死细菌显示红色荧光。

参考文献

Raman spectroscopic analysis of Lactobacillus rhamnosus GG in response to dehydration reveals DNA conformation changes
Authors: Myintzu Hlaing, M.; Wood, B.; McNaughton, D.; Ying, D.; Augustin, M. A.
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Antibacterial and antigelatinolytic effects of Satureja hortensis L. essential oil on epithelial cells exposed to Fusobacterium nucleatum
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Inactivation of Cronobacter sakazakii in reconstituted infant formula by combination of thymoquinone and mild heat
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Fourier transform infra-red spectroscopy and flow cytometric assessment of the antibacterial mechanism of action of aqueous extract of garlic (Allium sativum) against selected probiotic Bifidobacterium strains
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Deposition and survival of Escherichia coli O157:H7 on clay minerals in a parallel plate flow system
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Observation of injured E. coli population resulting from the application of high-pressure throttling treatments
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Journal: J Food Sci (2013): M582-6

Effect of air drying on bacterial viability: A multiparameter viability assessment
Authors: Nocker, A.; Fernandez, P. S.; Montijn, R.; Schuren, F.
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patients and environment
Authors: Lindback, T.; Rottenberg, M. E.; Roche, S. M.; Rorvik, L. M., The ability to enter into an avirulent viable but non-culturable (VBNC) form is widespread among Listeria monocytogenes isolates from salmon
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Behaviors of physiologically active bacteria in water environment and chlorine disinfection
Authors: Sawaya, K.; Kaneko, N.; Fukushi, K.; Yaguchi, J.
Journal: Water Sci Technol (2008): 1343-8

Long-term survival of Legionella pneumophila in the viable but nonculturable state after monochloramine treatment
Authors: Alleron, L.; Merlet, N.; Lacombe, C.; Frere, J.
Journal: Curr Microbiol (2008): 497-502

说明书

MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒.pdf

MycoLight Green JJ99核酸染料货号24001-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年2月22日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

MycoLight Green JJ99核酸染料

货号	24001	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 ul	价格	2604
Ex (nm)	482	Em (nm)	512
分子量	N/A	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：24001

产品名称：MycoLight Green JJ99核酸染料

规格：100ul

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：482

发射波长(nm)：512

适用仪器

流式细胞仪
激发：	488nm激光
发射：	530/30nm滤波片
通道：	FITC通道

荧光显微镜
激发：	FITC滤波片组
发射：	FITC滤波片组
cutoff:	黑色透明

产品介绍

MycoLight Green JJ99核酸染料是一种优良的绿色荧光核染色剂，可渗透到原核和真核细胞膜中。MycoLight 绿色荧光核酸染料对DNA有很高的亲和力，与488nm氩激光线结合后荧光增强，在500nm处荧光发射最大。MycoLight 绿色荧光核酸染料对活的和死的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有染色作用，因此是细菌检测的核复染剂。它是SYTO®9的绝佳替代品（SYTO®是Invitrogen的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MycoLight Green JJ99核酸染料。

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图示

图1.用5 uM MycoLight Green JJ99将大肠杆菌染色30分钟，并用FITC通道成像。

图2.用5 uM MycoLight Green JJ99染色大肠杆菌30分钟，并用FITC通道成像。

参考文献

SYTO dyes and EvaGreen outperform SYBR Green in real-time PCR
Authors: Eischeid AC.
Journal: BMC Res Notes (2011): 263

Assessment of acridine orange and SYTO 16 for in vivo imaging of the peritoneal tissues in mice
Authors: Udovich JA, Besselsen DG, Gmitro AF.
Journal: J Microsc (2009): 124

说明书

MycoLight Green JJ99核酸染料.pdf

MycoLight Red JJ94核酸染料货号24006-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年2月16日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

MycoLight Red JJ94核酸染料

货号	24006	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 uL	价格	3924
Ex (nm)	637	Em (nm)	651
分子量	738.75	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

MycoLight Red JJ94核酸染料是美国AAT Bioquest生产的核酸染料，绿色荧光蛋白（GFP）衍生物广泛用作荧光试剂，在细胞和分子水平上研究生物过程，包括标记细菌等。然而，基于绿色荧光蛋白的细菌标记是单一的，而且一些重要的生物体仍然难以被修饰并表达。SYTO-9被开发广泛用于以更方便的方式标记细菌，即通过简单的培养。但，据报道SYTO-9能抑制一些细菌的生长。AAT Bioquest开发了与SYTO-9性能相似的Myoclight JJ94 红色染料，而且它对细菌生长抑制非常低。另外，MycoLight JJ94 红色染料可用于细菌的多色检测，它的激发和发射波长分别为637和651nm。这与大多数荧光显微镜和流式细胞仪中常用的氦激光激发和Cy5滤光片完全匹配。MycoLight JJ94 红色染料是一种远红色荧光DNA结合染料，用于直接的活细菌细胞标记，它自身荧光较低，但与DNA结合后，其荧光强度急剧增加。MycoLight JJ94 红色染料在不影响微生物生长的情况下，很容易染上活细菌。在相同的条件下，SYTO-9抑制细菌生长，而MycoLight JJ94 红色染料与正常细菌在液体或固体培养基上生长完全一致。将细菌转移到无染料培养基中后，MycoLight Red JJ94进行的细菌荧光标记可在数小时内保持稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MycoLight Red JJ94核酸染料。

适用仪器

流式细胞仪
激发：	640nm激光
发射：	660/20nm滤波片
通道：	APC通道

荧光显微镜
激发：	630nm
发射：	660nm滤波片
推荐孔板：	黑色透明
滤波片：	Cy5滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

在不影响正常微生物生长的情况下染色活细菌
使用Cy5滤光片组和He激光激发，可在大多数流式细胞仪和荧光显微镜中广泛使用
可用于细菌中的多色检测
稳定标记数个小时

操作步骤

使用自备缓冲液稀释MycoLight Red JJ94。MycoLight Red JJ94可以直接添加到细菌培养基中，最终浓度为2.5 µM。
涡旋混合样品，然后孵育至少10分钟。
通过荧光显微镜或带有Cy5滤波器的流式细胞仪检测样品的荧光信号。

注意1： 以上方案可适用于大多数细菌菌株。这些条件需要针对每个菌株和实验系统进行调整。生长培养基，细胞密度，其他生物的存在和因素可能会影响染色。玻璃器皿上残留的洗涤剂也可能会影响许多生物的染色。注意2： 稀释MycoLight Red JJ94时请使用塑料管，因为稀释的污渍会粘附在玻璃上。通常，在不含磷酸盐的缓冲液中可获得最佳结果。 注意3： 可以使用不同的细菌菌株优化染料浓度以获得最佳结果。 注意4： MycoLight Red JJ94与细菌的生长完全兼容，可以将活细菌与MycoLight Red JJ94长时间孵育。

图示

图1. 随时间推移补充了1％DMSO（对照），MycoLight Red JJ94和Syto-9 的大肠杆菌 LB培养物的光密度（OD600 nm）对比。Syto-9 基本上抑制细菌生长，而MycoLight Red JJ94与正常细菌生长完全相容。

图2.用2.5μM MycoLight Red JJ94将庆笙红球菌染色20分钟。用具有Cy5滤光片组的Keyence荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

SYTO dyes and EvaGreen outperform SYBR Green in real-time PCR
Authors: Eischeid AC.
Journal: BMC Res Notes (2011): 263

Assessment of acridine orange and SYTO 16 for in vivo imaging of the peritoneal tissues in mice
Authors: Udovich JA, Besselsen DG, Gmitro AF.
Journal: J Microsc (2009): 124

说明书

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MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒货号22407-AAT Bioquest荧光染料

MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒

MycoLight Green JJ98核酸染料货号24000-AAT Bioquest荧光染料

MycoLight Green JJ98核酸染料

MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒货号22411-AAT Bioquest荧光染料

MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒

MycoLight Green JJ99核酸染料货号24001-AAT Bioquest荧光染料

MycoLight Green JJ99核酸染料

MycoLight Red JJ94核酸染料货号24006-AAT Bioquest荧光染料

MycoLight Red JJ94核酸染料

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