PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光* 货号21611-AAT Bioquest荧光染料

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PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光*

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光*

货号 21611 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 316 Em (nm) 456
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测焦磷酸的试剂盒,焦磷酸盐(PPi)通过许多生化反应产生,例如ATP水解,DNA和RNA聚合,腺苷酸环化酶形成的环AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它们的辅酶A酯。 我们的PhosphoWroks 焦磷酸盐检测试剂盒提供了最强大的分光光度法测量焦磷酸盐。 该试剂盒使用我们专有的荧光焦磷酸盐,其荧光强度成比例地取决于焦磷酸盐的浓度。 我们的测定法比酶偶联焦磷酸盐方法更容易和更稳健,这些方法需要至少两种酶用于焦磷酸盐检测。 该试剂盒提供了测定焦磷酸盐的所有必需成分。 该试剂盒已成功用于高通量筛选(HTS)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 316nm
发射: 456nm
cutoff: 420nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备焦磷酸盐标准品和/或测试样品(50μL)
加入焦磷酸盐工作溶液(50μL)
在室温下孵育10至30分钟
监测Ex / Em = 316/456 nm处的荧光强度(截止= 420 nm)

 

溶液制备

1.制备储存溶液

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 PPi探针储备溶液(200X):
将50μLDMSO(组分D)加入到PPi探针(组分B)的小瓶中以制备200X PPi探针储备溶液。 避光。 注意:对于一个96孔板,25μLPPi探针储备溶液就足够了。

1.2焦磷酸盐标准溶液(1 mM):
将10μL50mM焦磷酸盐标准品(组分C)加入490μLddH2 O或50mM Hepes缓冲液(pH 7)中,制成1mM焦磷酸盐标准溶液。

 

2.制备标准溶液

焦磷酸盐标准溶液制备
将50μL的1mM焦磷酸盐标准溶液加入到450μLDdH2O或50mM Hepes缓冲液中,得到100μM焦磷酸盐标准溶液(PS7)。 取100μM焦磷酸盐标准溶液,在ddH2O或50mM Hepes缓冲液中进行1:3连续稀释,得到连续稀释的焦磷酸盐标准品(PS6-PS1)。

 

3.制备工作溶液

将25μL的200X PPi Sensor储备溶液加入到5 mL的分析缓冲液(组分A)中并充分混合以制备PPi工作溶液。 注意:由于该检测方法对PPi具有高灵敏度,因此使用不含PPi的实验室器具和试剂非常重要。 DTT≥1mM会增加背景,MgCl2≥2mM会降低反应。

 

样品试验方案

表1.固体黑色96孔微孔板中焦磷酸盐标准品和测试样品的布局

PS =焦磷酸盐标准品(PS1-PS7,0.3至100μM),BL =空白对照,TS =测试样品

BL BL TS TS
PS1 PS1
PS2 PS2
PS3 PS3    
PS4 PS4    
PS5 PS5    
PS6 PS6    
PS7 PS7    

 

表2.每个孔的试剂组成

规格 试剂
PS1-PS7 50ul 连续稀释液(0.3至100μM)
BL 50ul 分析缓冲液
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备焦磷酸盐标准品(PS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向焦磷酸盐标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLPPi工作溶液,使焦磷酸盐总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLPPi工作溶液,总体积为50μL/孔。 彻底混合试剂。

3.在室温下孵育10至30分钟。

4.用Ex / Em = 316 / 456nm(截止= 420nm)的荧光板读数器监测荧光增加。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(对照%)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算PPi,ATP,Pi样本。 我们建议使用在线四参数物流计算器,可在以下位置找到:

 

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光*   货号21611

图1.使用PhosphoWorks Fluoremetric焦磷酸盐测定试剂盒在固体黑色96孔板中使用荧光酶标仪测量焦磷酸盐,ATP和磷酸盐剂量响应。

 

参考文献

RANKL Expression Is Increased in Circulating Mononuclear Cells of Patients with Calcific Aortic Stenosis
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Biomarkers identified by urinary metabonomics for noninvasive diagnosis of nutritional rickets
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Host-Pathogen Interaction and Signaling Molecule Secretion Are Modified in the dpp3 Knockout Mutant of Candida lusitaniae
Authors: Ayman Sabra, Jean-Jacques Bessoule, Vessela Atanasova-Penichon, Thierry Noel, Karine Dementhon
Journal: Infection and immunity (2014): 413–422

 

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说明书
PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光*.pdf

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