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Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒 增强灵敏度
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货号 | 11308 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 440 | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒，超氧化物歧化酶（SOD）是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病，缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化和衰老相关。 SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。事实上，缺乏SOD1的小鼠会发展出多种病理，包括肝细胞癌，加速年龄相关的肌肉质量减少，早期白内障发病率和寿命缩短。 SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒为测量SOD活性提供了一种快速而灵敏的方法。众所周知，NADH和SOD酶系统产生超氧自由基，将WST-1还原成蓝色甲dye染料，其在440nm附近具有最大吸收。 SOD通过催化超氧阴离子歧化成过氧化氢和分子氧来抑制WST-1的还原，从而降低了甲product产物的440nm吸收。 440nm吸收的减少与SOD活性成比例。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 440nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备并添加SOD标准品或测试样品（50μL）
2.添加SOD工作溶液1（25μL）
3.添加SOD工作溶液2（25μL）
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度
溶液配制
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1SOD标准溶液（10 kU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。
2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分E）中，得到100 U / mL SOD标准溶液（SD1）。 取100 U / mL SOD标准溶液（SD1），在分析缓冲液（组分E）中进行1:10，得到10U / mL SOD标准溶液（SD2）。 取10 U / mL标准溶液（SD2）并进行1：3连续稀释，以获得使用分析缓冲液（组分E）的连续稀释的SOD标准品（SD3-SD7）。
3.工作溶液配制
3.1 SOD工作溶液方案1：
将2.5mL测定缓冲液（组分E）加入WST-1瓶（组分A）中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液（组分B）加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意：该SOD工作溶液1应在实验前制备，并避光。 SOD工作溶液1不稳定，应丢弃未使用的部分。
3.2 SOD工作溶液方案2：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到NADH小瓶（组分C）中并充分混合。 然后，将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD工作溶液2。
操作步骤
表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。
SD = SOD标准品（SD1 – SD7,100至0.041 U / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | … | … |
| SD2 | SD2 | … | … |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释（100至0.041 U / mL） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分E） |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1，使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1，总体积为37.5μL/孔。
3.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2，总体积为50μL/孔。
4.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。
5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。
数据分析
将从空白标准孔获得的读数（抑制％）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算SOD样本。
图1.使用Amplite 比色超氧化物歧化酶测定试剂盒在96孔白壁/透明底板中用Spectrum Max酶标仪（Molecular Devices）测量OD剂量响应。
参考文献
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Superoxide dismutase: a review and a modified protocol for activities measurements in rat livers
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| 产品名称 | 货号 |
| Amplite 比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒 | Cat#11305 |