Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度 货号11308-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度

Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度

Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度     货号11308 货号 11308 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 440 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒,超氧化物歧化酶(SOD)是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病,缺血再灌注损伤,动脉粥样硬化和衰老相关。 SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。事实上,缺乏SOD1的小鼠会发展出多种病理,包括肝细胞癌,加速年龄相关的肌肉质量减少,早期白内障发病率和寿命缩短。 SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒为测量SOD活性提供了一种快速而灵敏的方法。众所周知,NADH和SOD酶系统产生超氧自由基,将WST-1还原成蓝色甲dye染料,其在440nm附近具有最大吸收。 SOD通过催化超氧阴离子歧化成过氧化氢和分子氧来抑制WST-1的还原,从而降低了甲product产物的440nm吸收。 440nm吸收的减少与SOD活性成比例。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 440nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加SOD标准品或测试样品(50μL)
2.添加SOD工作溶液1(25μL)
3.添加SOD工作溶液2(25μL)
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1SOD标准溶液(10 kU / mL):
将50μL测定缓冲液(组分E)加入到SOD标准品(组分D)的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。

 

2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液(组分E)中,得到100 U / mL SOD标准溶液(SD1)。 取100 U / mL SOD标准溶液(SD1),在分析缓冲液(组分E)中进行1:10,得到10U / mL SOD标准溶液(SD2)。 取10 U / mL标准溶液(SD2)并进行1:3连续稀释,以获得使用分析缓冲液(组分E)的连续稀释的SOD标准品(SD3-SD7)。

 

3.工作溶液配制

3.1 SOD工作溶液方案1:
将2.5mL测定缓冲液(组分E)加入WST-1瓶(组分A)中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液(组分B)加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意:该SOD工作溶液1应在实验前制备,并避光。 SOD工作溶液1不稳定,应丢弃未使用的部分。

3.2 SOD工作溶液方案2:
将50μL测定缓冲液(组分E)加入到NADH小瓶(组分C)中并充分混合。 然后,将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液(组分E)中以制备SOD工作溶液2。

 

操作步骤

表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。

SD = SOD标准品(SD1  –  SD7,100至0.041 U / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
SD1 SD1
SD2 SD2
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

 

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释(100至0.041 U / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分E)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向SOD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1,使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1,总体积为37.5μL/孔。

3.向SOD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2,使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2,总体积为50μL/孔。

4.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。

5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。

 

数据分析

        将从空白标准孔获得的读数(抑制%)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算SOD样本。 

Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度     货号11308

图1.使用Amplite 比色超氧化物歧化酶测定试剂盒在96孔白壁/透明底板中用Spectrum Max酶标仪(Molecular Devices)测量OD剂量响应。

 

参考文献

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Superoxide dismutase: a review and a modified protocol for activities measurements in rat livers
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产品名称 货号
Amplite 比色法超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 Cat#11305

说明书
Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度 .pdf

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