活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光 货号22903-AAT Bioquest荧光染料

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活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光     货号22903 货号 22903 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 658 Em (nm) 675
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂盒,活性氧(ROS)是氧正常代谢的天然副产物,在细胞信号传导中起重要作用。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病,糖尿病,骨质疏松症,中风,炎性疾病,许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到公认。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 670探针来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后,可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 670表现出很强的荧光信号。ROS Brite 670探针位于细胞质中。ROS Brite 670探针的荧光信号可以通过荧光显微镜,高含量成像,荧光酶标仪或流式细胞仪进行测量。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法,可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS(尤其是超氧化物和羟基自由基)。可以使用荧光酶标仪或带有Cy5滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。 

活性氧(ROS)篇:包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 640nm激光
发射: 660/20nm滤波片
通道: APC通道
荧光显微镜  
激发: Cy5滤波片
发射: Cy5滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 650nm
发射: 675nm
cutoff: 665nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式

产品说明书

样品实验方案

简要概述

适用于荧光酶标仪、荧光显微镜

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)
4.将细胞在37℃下染色30-60分钟
5.在Ex / Em = 650/675 nm(截止= 665 nm)或使用TRITC滤光片组的荧光显微镜下检测荧光(底部读取模式)

 

适用于流式细胞仪

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用具有FL4通道的流式细胞仪监测荧光强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. ROS Brite 670原液(500X):
将40μLDMSO(组分C)加入到ROS Brite 670(组分A)的小瓶中并充分混合以制备500X ROS Brite 670储备溶液。 避光。 注意:20μL的500X ROS Brite 670原液足以容纳1个平板。对于流式细胞仪,为方便起见,可将5倍ROS Brite 670储备液稀释5倍至DMSO中。为了存放,请将管子紧紧密封。

 

2.工作溶液配制

        将20μL500XROS Brite 670储备溶液加入10 mL分析缓冲液(组分B)中,充分混合,制成ROS Brite 670工作溶液。 注意:此ROS Brite 670工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

(适用于荧光酶标仪、荧光显微镜)

1.用10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384孔板)在所需缓冲液(如PBS或HHBS)中处理细胞。对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导ROS,将细胞板在室温下或在5%CO2,37℃培养箱中孵育一段时间(例如:用100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)处理Hela细胞30分钟)。

3.向细胞板中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ROS Brite 670工作溶液。

4.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30分钟至60分钟。

5.使用荧光酶标仪(底部读取模式)在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)检测荧光增加,或使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

 

(适用于流式细胞仪)

1.以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。 注意:应根据个体评估每个细胞系,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.用所需缓冲液(如PBS或HHBS)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。

3.为诱导ROS,将细胞板在室温或5%CO2,37°C培养箱中孵育至少30分钟(用100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)处理的Hela细胞30分钟)。

4.将1μL/ mL细胞的500X ROS Brite 670储备溶液或5μL/ mL细胞的100X ROS Brite 670储备溶液加入细胞培养基中。

5.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用具有FL4通道的流式细胞仪检测荧光强度。

 

数据分析

活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光     货号22903

图1.使用Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒检测HeLa细胞中的ROS。 将HeLa细胞以15,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色孔板中过夜。 未处理细胞(对照)或用1mM H2O2或100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)在37℃处理30分钟。 加入ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔)并在5%CO2,37℃培养箱中温育1小时。 使用FlexStation(Molecular Devices)在底部读取模式下在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)下检测荧光信号。

 

参考文献

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Notoginsenoside R1 attenuates high glucose-induced endothelial damage in rat retinal capillary endothelial cells by modulating the intracellular redox state
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Xanthine oxidase inhibition by febuxostat attenuates experimental atherosclerosis in mice
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Measure intracellular reactive oxygen species using far-red fluorescence
Authors: Hoang Ha
Journal: Unknown

 

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说明书
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