Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒 货号13837-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒

Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒

Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒    货号13837 货号 13837 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒,甘油3-磷酸(G3P)是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物,真菌和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite 甘油3磷酸盐检测试剂盒提供了量化G3P最灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P浓度,其与G3P氧化酶介导的酶偶联反应中过氧化氢的产生成正比。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示,它在100μL溶液(0.41μM)内检测到低至41皮摩尔的G3P。该测定可以在没有分离步骤的方便的96孔或384孔微量滴定板格式中进行。 在Ex / Em =〜540/590 nm处使用荧光酶标仪可轻松读取其信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备G3P工作溶液(50 µL)
2.添加G3P标准品或测试样品(50 µL)
3.室温孵育10-30分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液(200X):
将50 µL DMSO(组分E)添加到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中,制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 3-磷酸甘油(G3P)标准溶液(10 mM):
将250 µL ddH2O加到G3P标准品(组分D)的小瓶中,制成10 mM G3P标准品溶液。

 

2.标准溶液配制

G3P标准
将10 µL的10 mM G3P标准储备溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中,以生成100 µM的标准溶液(CS7)。 然后执行1:3的系列稀释,以得到系列稀释的G3P标准品(CS6-CS1)。 注意:稀释的G3P标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液(组分C)添加到瓶酶混合液(组分B)中,并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液(200X)加入组分B和C的瓶子中,制成G3P工作溶液(组分A,B和C)。注意:请立即使用并远离光线。 注意:可以将组分B和组分C的未使用混合物分成单份使用,并保存在-20°C下。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准(CS1-CS7,0.1至100 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
CS1 CS1
CS2 CS2
CS3 CS3    
CS4 CS4    
CS5 CS5    
CS6 CS6    
CS7 CS7    

表2.每个单元的试剂组成

容积 试剂
CS1-CS7 50ul 连续稀释(0.1至100 µM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 样品

1.根据表1和表2提供的布局,将G3P标准品(CS),空白对照(BL)和测试样品(TS)准备到96孔黑色微孔板中。对于384孔板,请使用25 µL试剂 每孔而不是50 µL。

2.在G3P标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液,以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下,于室温下孵育反应10至30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm(在570 nm截止)处监测荧光的增加。

 

参考文献

CCAAT/enhancer binding protein-beta negatively regulates the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1 in pig PK-15 cells
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Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 1323

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Journal: J Bacteriol (2010): 4281

Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
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Authors: Chen H, Jiang JG, Wu GH.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 6178

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Journal: Arch Biochem Biophys (2008): 35

Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
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Stimulation of rat liver mitochondrial sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase by polymyxin B via enhanced extraction of lysophosphatidic acid
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Authors: Berrada W, Naya A, Iddar A, Bourhim N.
Journal: Mol Cell Biochem (2002): 117

 

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说明书
Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒.pdf

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