Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光 货号11302-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光     货号11302 货号 11302 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒,谷氨酸氧化酶属于氧化还原酶的一类,特别能对带有CH-NH2基团供氧受体起反应。它是一种能特异催化水中或者氧气中的L-谷氨酸的酶,可以通过氧化脱氨形成酮戊二酸,氨和过氧化氢。Amplite谷氨酸氧化酶荧光检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法,来检测溶解状态下或者细胞裂解液中的谷氨酸氧化酶。在分析中,L-谷氨酸可以通过谷氨酸氧化酶被氧化成酮戊二酸、氨或者过氧化氢。L-丙氨酸和L-谷氨酸-丙酮酸也参与了这个转氨酶反应,导致多次循环反应,因此显著的增加双氧水的产出。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪(540/590nm)检测,或者使用酶标仪(576nm)检测。Amplite荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到40U/ml的谷氨酸氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析,并且无需任何分步骤,就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.谷氨酸氧化酶标准品或测试样品(50μL)
2.添加谷氨酸氧化酶工作液(50μL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540 / 590nm处读取荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液(250X):
将40μLDMSO(组分F)加入到Amplite Red(组分A)的小瓶中。应立即使用原液。注意:在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯基乙醇存在下,Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液,pH7.4。

1.2 HRP库存解决方案(400X):
将200μL测定缓冲液(组分B)加入到辣根过氧化物酶(组分C)的小瓶中。

1.3 谷氨酸储备溶液(400X):
将1.0mL ddH 2 O加入到谷氨酸小瓶(组分D)中以制备400X谷氨酸储备溶液。

1.4 谷氨酸氧化酶(GO)标准溶液(150 mU / mL):
将100μL测定缓冲液(组分B)加入到谷氨酸氧化酶标准品(冻干,组分E)的小瓶中以制备150mU / mL谷氨酸氧化酶(GO)标准溶液。

 

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液(组分B)中,得到10mU / mL GO标准溶液(GO7)。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1:3连续稀释,得到剩余的连续稀释的GO标准品(GO6-GO1)。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液(250X),12.5μLHRP储备溶液(400X)和12.5μL谷氨酸储备溶液(400X)加入5 mL分析缓冲液(组分B)中,使总体积为5.07 mL谷氨酸氧化酶工作溶液(GO工作溶液),避光。

 

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中GO标准品和测试样品的布局。 GO =谷氨酸氧化酶标准品(GO1-GO7,0.01至10mU / mL),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
GO1 GO1
GO2 GO2
GO3 GO3    
GO4 GO4    
GO5 GO5    
GO6 GO6    
GO7 GO7    

表2.每个孔的试剂组成。 较高浓度的GO可能由于Amplite Red(对非荧光产物)的过度氧化而导致荧光信号降低

容积 试剂
GO1-GO7 50ul 连续稀释(0.01至10 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分B)
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备GO标准品(GO),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向GO标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液,使总GO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLGO工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm,发射= 590-600nm(最佳Ex / Em = 540 / 590nm),截止= 570nm监测荧光强度。 注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。

 

参考文献

Extracellular polymeric substrates of Chlorella vulgaris F1068 weaken stress of cetyltrimethyl ammonium chloride on ammonium uptake
Authors: Feng Li, Yangduo Kuang, Na Liu, Fei Ge
Journal: Science of The Total Environment (2019)

 

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说明书
Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光 .pdf