Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光 货号11950-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光    货号11950 货号 11950 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1944
Ex (nm) 405 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,碱性磷酸酶是用于ELISA,免疫组织化学,Northern,Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。 它广泛用于各种生物测定(特别是免疫测定)和基于ELISA的诊断。 这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP(一种生色磷酸酶底物)来定量溶液,细胞提取物以及固体表面(如PVDF膜)上的碱性磷酸酶活性。 该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分,该方案与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 400nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)
2.添加ALP工作溶液(50μL)
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液(100X):
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶(组分A)中。 好好混合。 应立即使用pNPP储备溶液。 注意:如果妥善保存,解决方案应该有效期为3-4周。

1.2 碱性磷酸盐标准溶液:
添加100μL含0.1%BSA(H2O-0.1%BSA)的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品(组分C,10单位),以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

 

2.标准溶液

碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1%BSA中,生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释,得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液(AS7)。 然后进行1:3连续稀释以获得剩余标准品(AS6-AS1)。 注意:应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。

 

3.工作溶液

将50μLpNPP储备溶液(100X)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品(AS1-AS7,0.1至100 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.1至100 mU / mL)
BL 50ul H2O-0.1%BSA
TS 50ul 测试样品

1.在上清液中:

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品(AS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸盐标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液,使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液,总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟,避光。

1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

2.在细胞中:

2.1根据需要处理细胞。

2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔(例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板)中。 注意:或者,从细胞板中取出生长培养基,用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL(对于96孔板)或50μL(对于384孔板)1:1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟,避光。

2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

参考文献

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说明书
Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光.pdf