Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 货号16350-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测     货号16350 货号 16350 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 552 Em (nm) 575
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒,一氧化氮(NO)是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫,心血管,神经变性和炎性疾病。 作为自由基,NO被快速氧化,并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用,作为DAF-2的优异替代品,用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比,Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange,可与NO反应生成亮橙色荧光产品,其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中,使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样本实验方案

概述

在生长培养基中制备细胞

用测试化合物孵育细胞和Nitrixyte™橙色工作溶液

添加测定缓冲液II

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞:

1.1对于贴壁细胞:在生长培养基中以30,000至80,000个细胞/孔/90μL对96孔板进行平板培养过夜,或对于384孔板以8,00至20,000个细胞/孔/20μL进行平板培养。

1.2对于非贴壁细胞:从培养基中离心细胞,将细胞沉淀悬浮于125,000-250,000细胞/孔/90μL的培养基中,96孔poly-D赖氨酸平板或30,000-60,000细胞/孔 /20μL,用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前,在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定最佳细胞密度。

 

2.准备工作解决方案:

2.1使用前将所有试剂盒组分置于室温下。

2.2为一个细胞板制备Nitrixyte™橙色工作溶液:将20μLNitrixyte™橙色储备溶液(组分A)加入10 mL分析缓冲液I(组分B)中,并充分混合。工作溶液在室温下稳定至少2小时。

注意:20μL的Nitrixyte™Orange原液足以用于一个平板。 在<-20℃下等分并储存未使用的Nitrixyte™Orange原液。 保护它免受光照,避免反复冻融循环。

 

3.运行NO测定:

3.1为刺激内源性NO,在细胞培养基或所需缓冲液(如PBS或HHBS)中用10μL10X试验化合物(96孔板)或5μL5X试验化合物(384孔板)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意:在添加化合物之前不必洗涤细胞。 然而,如果测试的化合物对血清敏感,则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。 在抽吸后加入90μL/孔(96孔板)和20μL/孔(384孔板)的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液。 或者,细胞可以在无血清培养基中生长。

3.2在细胞板中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Nitrixyte™Orange工作溶液(来自步骤2.2)。将细胞与测试化合物和Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下共孵育一段所需的时间,避光。

注意1:不要去除测试化合物。

注意2:对于NONOate阳性对照处理:将细胞与Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下孵育30分钟。除去工作溶液,将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。详细信息请参见说明书的图1。

注意3:我们使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte™Orange,20μg/ mL脂多糖(LPS)和1 mM L-精氨酸(L-Arg)在37℃的细胞培养基中孵育16小时。

3.3在每口井中取出溶液。添加测定缓冲液II(组分C)100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

注意:在添加Assay Buffer II之前,请勿清洗细胞。

3.4使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm(截止= 570nm)的酶标仪观察荧光增加,或者使用具有TRITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

 

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

 

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说明书
Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 .pdf