Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光**无铜* 货号22315-AAT Bioquest荧光染料

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Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光**无铜*

Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光**无铜*

Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光**无铜*    货号22315 货号 22315 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 6564
Ex (nm) 557 Em (nm) 570
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞活力的试剂盒,监测细胞增殖是评估细胞活力,细胞周期和遗传毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中,在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒使用FOL-FdU(胸苷的类似物)。FOL-FdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后,通过我们的Bucculite 标记技术用MTA-iFluor 555标记掺入的FOL-FdU。在FITC通道中可视化细胞中形成的iFluor 555标记的DNA。Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒提供了基于抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的替代方法。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒。 

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适用仪器


荧光显微镜  
激发: 555nm
发射: 565nm
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)

2.对于96孔板,以100 µL /孔添加2X FOL-FdU工作溶液

3.在37ºC下孵育3小时

4.取出培养基,并在室温下用100µL冰冷的90%甲醇的PBS溶液固定细胞15分钟

5.除去固定液并用PBS洗涤3次

6.加入1X iFluor 555-MTA工作溶液(100 µL /孔)并在室温下染色30分钟。

7.除去每个孔中的工作溶液,并用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次。

8.加入100µL 1X洗涤缓冲液/孔,并用FITC滤光片组观察紫外荧光显微镜。

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1.1 FOL-FdU储备溶液(1000X):
将500 µL DMSO(组分E)添加到FOL-FdU(组分A)中,制成1000X储备溶液。注意:此1000X浓度是使用具有最佳FOL-FdU浓度的HeLa细胞开发的。生长培养基,细胞密度,细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。我们建议测试一系列FOL-FdU浓度,以确定适合您的细胞类型和实验条件的最佳浓度。

1.2 iFluor 488-MTA储备溶液(400X):
将50 µL DMSO(组分E)添加到iFluor 555-MTA(组分B)中,制成400 X iFluor 555-MTA储备溶液。

 

2.工作溶液

2.1 2X FOL-FdU工作溶液

在完全培养基中将1000X FOL-FdU储备溶液稀释500倍,以制备2X FOL-FdU工作溶液。

2.2 1X iFluor 555-MTA工作溶液

将2.5 µL 400X iFluor 555-MTA储备溶液添加到1mL染色缓冲液(组分C)中,以制备1X iFluor 555-MTA工作溶液。

2.3 X洗涤缓冲液

向9mL PBS中加入1mL 10X洗涤缓冲液(组分D),制成1X 洗涤缓冲液。 

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操作步骤

1.准备细胞

1.1对于贴壁细胞:将细胞在生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 100 µL(对于96孔板)过夜培养,以2,500至10,000个细胞/孔/ 20 µL(对于384孔板)过夜培养。

1.2对于非贴壁细胞:离心培养液中的细胞,并将细胞沉淀以1-2 X 106细胞/ ml(对于10个96孔板为10 mL)悬浮在培养液中。注意:应单独评估每个细胞系,以确定最佳细胞密度。

2.用FOL-FdU标记细胞

2.1将等体积的2X FOL-FdU工作溶液添加到含有要处理的细胞的培养基中,以在每个孔中获得1X FOL-FdU溶液。我们不建议更换所有培养基,因为这可能会影响细胞增殖速率。

2.2在最适合细胞类型的条件下孵育细胞3小时。FOL-FdU暴露于细胞的时间可以直接测量合成DNA的细胞。孵育时间取决于细胞生长速率。

3.细胞固定

3.1孵育后,移出培养基,并向每个孔中加入100µL冰冷的PBS中的90%甲醇(未提供,甲醇/ PBS,v / v为90/10),并在室温下孵育15分钟。

3.2除去固定缓冲液,并用PBS清洗每个孔中的细胞两次。

4.染色细胞

4.1在细胞板中加入100 µL /孔(96孔板)或50 µL /孔(384孔板)的1X iFluor 488-MTA工作溶液。在避光的条件下,将细胞与工作溶液在室温下孵育30分钟。

4.2除去每个孔中的工作溶液。

4.3用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次,洗涤后每孔加入100µL洗涤缓冲液。注意:如果需要Hoechst 33342染色剂,请在1X洗涤缓冲液中制成5-10 µg / ml Hoechst 33342溶液并染色30分钟。

4.4使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

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说明书
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光**无铜*.pdf

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