Cell Meter 细胞活性检测试剂盒（活细胞/死细胞） *绿色/红色双重荧光*

	货号	22789	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	492	Em (nm)	515
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞活性检测试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双重荧光* 使用两种非荧光性指示剂：Calcein AM，用于活细胞；一种非细胞渗透性的DNA结合染料，用于细胞膜不完整的死细胞。Calcein AM是一种疏水性复合物，可以轻易地渗透进入完整的活细胞，通过酯酶的水解作用，产生强烈的荧光。通过细胞内酯酶水解非荧光性Calcein AM，形成具有强烈荧光的亲水性Calcein，并且保留在细胞质中。这种酯酶的活性与活细胞数量成比例关系。DNA结合染料极性非常大，不能渗透进入具有完整细胞膜的活细胞，它只有在与死细胞的DNA结合的情况下才发出荧光。生长在培养板中的细胞可以被染料，且在不到两小时内就可以完成定量分析。本检测法比其它活细胞检测法更加强大、稳定。它可以用于许多荧光实验平台的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞，也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中，每孔用试剂100ul，本试剂盒提供的试剂足以进行100次检测；384微孔板中，每孔加试剂25ul，本试剂盒提供的试剂足以进行400次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞活性检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.加入相同体积的CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温或37°C孵育1小时
4.在强度下监测荧光（底部读取模式）Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）和540 / 620nm（截止= 590nm），带有FITC滤光片（细胞存活）的荧光显微镜和TRITC滤光片 （细胞死亡），或FL1和FL2通道的流式细胞仪。

溶液配制

1.储存溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
CytoCalcein 绿色原液：
将20μLDMSO（组分C）加入到CytoCalcein Green（组分A）的小瓶中并充分混合以制备CytoCalcein Green原液。 避光。 注意：20μL的CytoCalcein Green原液足以用于一个平板。 存放时，密封管。

2.工作溶液配制

将全部内容物（20μL）的CytoCalcein Green储备溶液和20μL碘化丙啶（组分B）加入10mL测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备CytoCalcein Green /碘化丙锭染料 – 工作溶液。 CytoCalcein Green / Propidium Iodide染料加工溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：如果CHO细胞等细胞含有导致荧光染料随时间泄漏的有机阴离子转运蛋白，应制备丙磺舒储备溶液，并加入到加样缓冲液中，最终孔内工作浓度范围为1到2.5 mM。 未使用的丙磺舒储备溶液可以在≤-20℃下储存。 由于最佳染色条件可能因细胞类型的不同而异，因此建议单独确定组分A和B的适当浓度。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.用酶标仪或荧光显微镜进行细胞活力测定：

1.1根据需要用测试化合物处理细胞。注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后加入100μL/孔/ 96孔板和25μL/孔/ 384孔板的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

1.2加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的CytoCalcein TM Green / Propidium Iodide染料加工溶液。

1.3将板在室温或37°C孵育30分钟至1小时，避光。 （孵育时间可以从15分钟到过夜。我们得到了最佳结果，孵育时间少于4小时）。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。装载后请勿清洗细胞。对于非粘附细胞，建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟，然后关闭制动器。

1.4使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）和Ex / Em = 540 / 620nm（截止= 590nm，细胞死亡）或荧光下监测荧光强度用于活细胞的FITC过滤器或用于死细胞的TRITC过滤器的显微镜。

2.使用流式细胞仪进行细胞活力测定：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

2.1离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

2.3将细胞重悬于500μL的CytoCalcein™Green / Propidium Iodide染料加工溶液中。

2.4在室温或37°C孵育10至30分钟，避光。

可选：用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中，每管加入1-5×10⁵个细胞。

2.5用流式细胞仪在Ex / Em = 490 / 525nm和Ex / Em = 490 / 620nm（FL1和FL2通道）下监测荧光强度。

数据分析

参考文献

Effect of copper nanoparticles on physico-chemical properties of chitosan and gelatin-based scaffold developed for skin tissue engineering application
Authors: Shikha Kumari, Bhisham Narayan Singh, Pradeep Srivastava
Journal: 3 Biotech (2019): 102

Functional imaging of neuronal activity of auditory cortex by using Cal-520 in anesthetized and awake mice
Authors: Jingcheng Li, Jianxiong Zhang, Meng Wang, Junxia Pan, Xiaowei Chen, Xiang Liao
Journal: Biomedical Optics Express (2017): 2599–2610

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Authors: Jingjing Wang, Jingjing Fa, Pengyun Wang, Xinzhen Jia, Huixin Peng, Jing Chen, Yifan Wang, Chenhui Wang, Qiuyun Chen, Xin Tu
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Journal: MEDICINE (2016): 1–8

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Journal: Scientific reports (2016)

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Authors: Hattan A Alharbi, David MV Saunders, Ahmed Al-Mousa, Jane Alcorn, Alberto S Pereira, Jonathan W Martin, John P Giesy, Steve B Wiseman
Journal: Aquatic Toxicology (2016): 81–88

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Authors: Marie-Elena Brett, Alexandra L Crampton, David K Wood
Journal: Technology (2016): 1–8

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Authors: Hattan A Alharbi, Jane Alcorn, Ahmed Al-Mousa, John P Giesy, Steve B Wiseman
Journal: Journal of Applied Toxicology (2016)

Spraying respiratory epithelial cells to coat tissue-engineered constructs
Authors: Anja Lena Thiebes, Stefanie Albers, Christian Klopsch, Stefan Jockenhoevel, Christian G Cornelissen
Journal: BioResearch open access (2015): 278–287

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简要概述

Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞毒性检测的试剂盒，Cell Navigator荧光成像试剂盒是一类荧光成像工具，用来标记亚细胞，细胞器；例如细胞膜、溶酶体、线粒体和细胞核等。Cell Navigator系列细胞器或亚细胞结构标记试剂盒提供最全的细胞及相关细胞器荧光标记方案，每种检测方案均能提供蓝色/绿色/红色/橙色等不同荧光检测方法。这种高效的细胞标签为从空间上和时间上研究发生的细胞活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter比色法细胞毒性检测试剂盒 使用可溶于水的四唑染料。在电子载体（PMS）存在的细胞还原性条件下，该染料能产生水溶性的甲瓒。四唑盐经细胞脱氢酶变成橙色的甲瓒产物，它在培养基是可溶的。一定数目甲瓒产物与一定数目活细胞成比例。我们的试剂盒比其他基于四唑细胞毒性检测试剂盒（如MTT、XTT）提供更强有力操作方案。不需要预混合，我们试剂盒四唑盐染料直接加入细胞。此外，我们的试剂盒比其他四唑细胞毒性检测试剂盒（如MTT、XTT）具有更高的灵敏度。能广泛的使用多种设备平台。适应于多种的研究，例如细胞粘附、细胞趋化、多耐药性、细胞生存能力、凋亡和细胞毒性等。该试剂盒具备最佳的组分和实验操作流程，适合于增殖或者不增殖的细胞，并能用于悬浮细胞或者贴壁细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.添加1/5体积的分析溶液（组分A）
3.将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1-24小时
4.监测A570nm / A605nm的吸光度比

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中，并在37℃，5％CO 2培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。 对于96孔板，建议的总体积为100μL，对于384孔板，建议的总体积为50μL。

2.对照设置
2.1阳性对照：含有细胞和已知的增殖或细胞毒性诱导剂。

2.2阴性对照：含有细胞但不含有测试化合物。

2.3载体对照：含有细胞和用于递送测试化合物的载体。

2.4非细胞对照：含有不含细胞的生长培养基。

2.5测试化合物对照：含有用于递送测试化合物[Hank’s平衡盐溶液（HBSS）或磷酸盐缓冲盐水（PBS）]和测试化合物的载体对照。 一些测试化合物具有强自发荧光并且可能产生假阳性结果。 注意：对于96孔板，将所有对照的总体积与100μL匹配，对于具有生长培养基的384孔板，将所有对照的总体积与50μL相匹配。

3.将测定溶液（组分A）预热至37°C。 在开始实验之前彻底混合。

4.向每个孔中加入20μL（96孔板）或10μL（384孔板）的测定溶液（组分A）。 轻轻摇动平板30秒，混合试剂。

5.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育1-24小时，避光。 注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型的代谢率和使用的细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 不推荐极长的孵育时间，因为指示剂可以转化为无色化合物。

6.用吸光度读板仪在OD比率A570nm / A605nm下监测吸光度的增加。 OD₅₇₀与OD₆₀₅的比率用于确定每个孔中的细胞活力。 注意：细胞存活率与OD₅₇₀增加和OD₆₀₅减少成正比。

数据分析

        从含有细胞的那些孔的值中减去从非细胞对照孔读取的背景吸光度。注意：空白孔的背景吸光度可以根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

        每个孔中的吸光度读数表示孔中的细胞数。

根据以下公式计算样品和对照的细胞活力百分比：
％细胞活力= 100×（Rsample – Ro）/（Rctrl – Ro）
Rsample是在测试化合物存在下OD570 / OD605的吸光度比。
Rctrl是不存在测试化合物（载体对照）时OD570 / OD605的吸光度比。
Ro是OD570 / OD605的平均背景（非细胞对照）吸光度比。

        从空白标准孔获得的读数（Abs）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算细胞数/孔样品。

图1.用Cell Meter 比色细胞细胞毒性测定试剂盒测量CHO-K1细胞数量反应。 将1至10个细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在Costar黑壁/透明底96孔板中接种过夜。 将细胞与20μL/孔的测定溶液（组分A）在37℃下孵育3小时。用SpectraMax plus（Molecular Devices）在570nm和605nm下测量吸光度强度。 OD570 / OD605的比例与所示的细胞数成比例。

参考文献

Detection of thalidomide embryotoxicity by in vitro embryotoxicity testing based on human iPS cells
Authors: Nobuo Aikawa, Atsushi Kunisato, Kenji Nagao, Hideaki Kusaka, Katsumi Takaba, Kinya Ohgami
Journal: Journal of pharmacological sciences (2014): 201–207

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