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品牌：Wako
CAS No.：9004-67-5 储存条件：室温 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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135-02142 |
Practical Grade | 25 g | – |
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– | – |
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PTFE GLS 80
原厂型号
品牌
单件重量
货期
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Schott 倾倒环，用于带DIN螺纹的DURAN®实验室玻璃瓶 |
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货号 | 71379 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 ug | 价格 | 960 | |
| Ex (nm) | 801 | Em (nm) | 820 | |
| 分子量 | 1541.91 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
iFluor 800 琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，iFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。
琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，特定标记反应可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 800 琥珀酰亚胺酯。
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产品说明书
染色样本分析
操作步骤
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。
3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：
注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。
3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。
4.运行结合反应：
4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。
注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。
4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
5.纯化缀合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。
5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。
5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。
5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。
注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥
参考文献
Nanovesicle delivery to the liver via retinol binding protein and platelet-derived growth factor receptors: how targeting ligands affect biodistribution
Authors: Ching-Yun Hsu, Chun-Han Chen, Ibrahim A Aljuffali, You-Shan Dai, Jia-You Fang
Journal: Nanomedicine (2017)
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| iFluor 800 酸 | Cat#1375 |
| iFluor 800 马来酰亚胺 | Cat#1378 |
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![Aminopropargyl ddTTP [5-Propargylamino-2',3'-dideoxyuridine-5'-triphosphate] CAS 114748-59-3 货号17072](http://www.gewhatman.cn/wp-content/uploads/2022/05/20220509_627907209bd66.svg) |
货号 | 17072 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10 umoles | 价格 | 11988 | |
| Ex (nm) | Em (nm) | |||
| 分子量 | 593.13 | 溶剂 | DMF | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：17072
产品名称：Aminopropargyl ddTTP [5-Propargylamino-2′,3′-dideoxyuridine-5′-triphosphate]
CAS：114748-59-3
规格：10 umoles
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：593.13
外观：液体
溶剂：DMF
激发波长(nm)：N/A
发射波长(nm)：N/A
产品介绍
Sanger法是DNA测序中最早最靠谱的方法之一，DNA由四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）合成。将每个新核苷酸添加到最后的dNTP的3′-OH基团中。可以将二脱氧胸苷三磷酸（ddTTPs）添加到正在生长的DNA链中，但是当它出现时，链延长会停止，因为下一个要连接的核苷酸没有3′-OH。待测序的DNA被制备成单链。该模板DNA带有大量dATP，dGTP，dCTP和dTTP的混合物。加入四种双脱氧核苷酸（ddATP，ddGTP，ddCTP和ddTTP）的混合物，每种混合物均以限量存在，并分别用发不同颜色的荧光的“标签”标记。因为所有四个正常核苷酸都存在，所以链延伸正常进行，直到偶然地DNA聚合酶插入ddNTP（而不是正常dNTP）。如果正常核苷酸与双脱氧形式的比率足够高，则在插入ddNTP之前，某些DNA链将成功添加数百个核苷酸，从而终止该过程。在孵育期结束时，片段的长度从最长到最短分离，一个核苷酸之间的差异足以使该链与下一较短和下一较长链分开。当被激光束照射时，四个DDNTP中的每一个都会发出不同的荧光，可以通过自动扫描仪打印输出序列。这些ddATP，ddGTP，ddCTP和ddTTP胺衍生物是开发Sanger测序试剂的重要组成部分。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Aminopropargyl ddTTP [5-Propargylamino-2′,3′-dideoxyuridine-5′-triphosphate]。
参考文献
Polyadenylated sequencing primers enable complete readability of PCR amplicons analyzed by dideoxynucleotide sequencing
Authors: Beranek, M., Drastikova, M., Petera, J.
Journal: Acta Medica (Hradec Kralove) (2012): 160-4
UV-induced bond modifications in thymine and thymine dideoxynucleotide: structural elucidation of isomers by differential mobility mass spectrometry
Authors: St-Jacques, A., Anichina, J., Schneider, B. B., Covey, T. R., Bohme, D. K.
Journal: Anal Chem (2010): 6163-7
Analysis of processivity of mungbean dideoxynucleotide-sensitive DNA polymerase and detection of the activity and expression of the enzyme in the meristematic and meiotic tissues and following DNA damaging agent
Authors: Roy, S., Choudhury, S. R., Sengupta, D. N.
Journal: Arch Biochem Biophys (2008): 55-65
A dideoxynucleotide-sensitive DNA polymerase activity characterized from endoreduplicating cells of mungbean (Vigna radiata L.) during ontogeny of cotyledons
Authors: Roy, S., Sarkar, S. N., Singh, S. K., Sengupta, D. N.
Journal: FEBS J (2007): 2005-23
Mechanism-based suppression of dideoxynucleotide resistance by K65R human immunodeficiency virus reverse transcriptase using an alpha-boranophosphate nucleoside analogue
Authors: Selmi, B., Boretto, J., Sarfati, S. R., Guerreiro, C., Canard, B.
Journal: J Biol Chem (2001): 48466-72
Synthesis of the first ferrocene-labeled dideoxynucleotide and its use for 3′-redox end-labeling of 5′-modified single-stranded oligonucleotides
Authors: Anne, A., Blanc, B., Moiroux, J.
Journal: Bioconjug Chem (2001): 396-405
Improving dideoxynucleotide-triphosphate utilisation by the hyper-thermophilic DNA polymerase from the archaeon Pyrococcus furiosus
Authors: Evans, S. J., Fogg, M. J., Mamone, A., Davis, M., Pearl, L. H., Connolly, B. A.
Journal: Nucleic Acids Res (2000): 1059-66
Structure-based design of Taq DNA polymerases with improved properties of dideoxynucleotide incorporation
Authors: Li, Y., Mitaxov, V., Waksman, G.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (1999): 9491-6
Characterization of the native and recombinant catalytic subunit of human DNA polymerase gamma: identification of residues critical for exonuclease activity and dideoxynucleotide sensitivity
Authors: Longley, M. J., Ropp, P. A., Lim, S. E., Copel and W. C.
Journal: Biochemistry (1998): 10529-39
Comparative performance of high-density oligonucleotide sequencing and dideoxynucleotide sequencing of HIV type 1 pol from clinical samples
Authors: Gunthard, H. F., Wong, J. K., Ignacio, C. C., Havlir, D. V., Richman, D. D.
Journal: AIDS Res Hum Retroviruses (1998): 869-76
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品牌：Chemodex
CAS No.：288399-07-5 储存条件：-20°C 纯度：>95% (NMR) |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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CDX-R0018-M025 |
– | 25 mg | – | 10,260.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
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