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品牌：Enzo
CAS No.：52645-53-1 储存条件：室温 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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BML-PR103-0050 |
– | 50 mg | – | 2,590.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。
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货号 | 17403 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 20 Reactions | 价格 | 3612 | |
| Ex (nm) | 557 | Em (nm) | 570 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
ReadiLink iFluor 555 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 iFluor 555 染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，iFluor 555 染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 iFluor 555-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括细菌人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 iFluor 555 标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiLink iFluor 555 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。
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适用仪器
| 热循环仪 | |
| 仪器规格： | N/A |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。
实验步骤
表 1. 各反应每管试剂组成
| 成分 | 规格 |
| DNA样本 | 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL |
| Nick Translation 缓冲液 | 5 µL |
| dNTP 混合物 | 5 µL |
| dTTP | 2 µL |
| iFluor 555-dUTP 工作溶液 | 2 µL |
| DNA聚合酶I | 1 µL |
| DNA酶I | 1 µL |
| 总容积 | 50 µL |
可以优化 iFluor 555-dUTP（组分 A）：dTTP（组分 E）的比例以获得最佳标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短最终产品的尺寸。
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。
Engineering nicking enzymes that preferentially nick 5-methylcytosine-modified DNA.
Authors: Gutjahr, Alice and Xu, Shuang-yong
Journal: Nucleic acids research (2014): e77
Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures.
Authors: Arany, Szilvia and Xu, Qingfu and Hernady, Eric and Benoit, Danielle S W and Dewhurst, Steve and Ovitt, Catherine E
Journal: Journal of cellular biochemistry (2012): 1955-65
Identification of bacterial cells by chromosomal painting.
Authors: Lanoil, B D and Giovannoni, S J
Journal: Applied and environmental microbiology (1997): 1118-23
An evaluation of a new series of fluorescent dUTPs for fluorescence in situ hybridization.
Authors: Wiegant, J and Verwoerd, N and Mascheretti, S and Bolk, M and Tanke, H J and Raap, A K
Journal: The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society (1996): 525-9
Cyanine dye dUTP analogs for enzymatic labeling of DNA probes.
Authors: Yu, H and Chao, J and Patek, D and Mujumdar, R and Mujumdar, S and Waggoner, A S
Journal: Nucleic acids research (1994): 3226-32
Directly labeled DNA probes using fluorescent nucleotides with different length linkers.
Authors: Zhu, Z and Chao, J and Yu, H and Waggoner, A S
Journal: Nucleic acids research (1994): 3418-22
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货号 | 22305 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 6564 | |
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞活力的试剂盒，检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和基因毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的 S 期期间在胸苷存在的情况下测量 DNA 合成。 Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒使用 FOL-FdU，一种胸苷类似物。 FOL-FdU 在 DNA 合成过程中被整合到细胞 DNA 中。固定细胞后，通过我们的 Buccutite 标记技术用 MTA-iFluor 488 标记掺入的 FOL-FdU。细胞中形成的 iFluor 488 标记 DNA 在 FITC 通道中可以被荧光仪器检测到。 Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒提供了一种替代抗 BrdU 抗体的检测和 EdU 点击化学检测的方法。它是一种环境友好的无铜检测方法，用于在单细胞水平上检测活性 DNA 合成。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒。
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适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
2.对于96孔板，以100 µL /孔添加2X FOL-FdU工作溶液
3.在37ºC下孵育3小时
4.取出培养基，并在室温下用100µL冰冷的90％甲醇的PBS溶液固定细胞15分钟
5.除去固定液并用PBS洗涤3次
6.加入1X iFluor 488-MTA工作溶液（100 µL /孔）并在室温下染色30分钟。
7.除去每个孔中的工作溶液，并用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次。
8.加入100µL 1X洗涤缓冲液/孔，并用FITC滤光片组观察紫外荧光显微镜。
溶液配制
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 FOL-FdU储备溶液（1000X）：
将500 µL DMSO（组分E）添加到FOL-FdU（组分A）中，制成1000X储备溶液。注意：此1000X浓度是使用具有最佳FOL-dU浓度的HeLa细胞开发的。生长培养基，细胞密度，细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。我们建议测试一系列FOL-FdU浓度，以确定适合您的细胞类型和实验条件的最佳浓度。
1.2 iFluor 488-MTA储备溶液（400X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到iFluor 488-MTA（组分B）中，制成400 X iFluor 488-MTA储备溶液。
2.工作溶液
2.1 X FOL-FdU工作溶液
在完全培养基中将1000X FOL-FdU储备溶液稀释500倍，以制备2X FOL-FdU工作溶液。
2.2 X iFluor 488-MTA工作溶液
将2.5 µL 400X iFluor 488-MTA储备溶液添加到1mL染色缓冲液（组分C）中，以制备1X iFluor 488-MTA工作溶液。
2.3 X洗涤缓冲液
向9mL PBS中加入1mL 10X洗涤缓冲液（组分D），制成1X Washing Buffer。
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操作步骤
1.准备细胞
1.1对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 100 µL（对于96孔板）过夜培养，以2,500至10,000个细胞/孔/ 20 µL（对于384孔板）过夜培养。
1.2对于非贴壁细胞：离心培养液中的细胞，并将细胞沉淀以1-2 X 106细胞/ ml（对于10个96孔板为10 mL）悬浮在培养液中。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。
2.用FOL-FdU标记细胞
2.1将等体积的2X FOL-FdU工作溶液添加到含有要处理的细胞的培养基中，以在每个孔中获得1X FOL-FdU溶液。我们不建议更换所有培养基，因为这可能会影响细胞增殖速率。
2.2在最适合细胞类型的条件下孵育细胞3小时。FOL-FdU暴露于细胞的时间可以直接测量合成DNA的细胞。孵育时间取决于细胞生长速率。
3.细胞固定
3.1孵育后，移出培养基，并向每个孔中加入100µL冰冷的PBS中的90％甲醇（未提供，甲醇/ PBS，v / v为90/10），并在室温下孵育15分钟。
3.2除去固定缓冲液，并用PBS清洗每个孔中的细胞两次。
4.染色细胞
4.1在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的1X iFluor™488-MTA工作溶液。在避光的条件下，将细胞与工作溶液在室温下孵育30分钟。
4.2除去每个孔中的工作溶液。
4.3用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次，洗涤后每孔加入100µL洗涤缓冲液。注意：如果需要Hoechst 33342染色剂，请在1X洗涤缓冲液中制成5-10 µg / ml Hoechst 33342溶液并染色30分钟。
4.4使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒 | Cat#22320 |
| Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光* | Cat#22315 |
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品牌：Enzo
CAS No.：137592-47-3 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ALX-270-055-M005 |
– | 5mg | – | 2,140.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。
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货号 | 71026 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 ug | 价格 | 960 | |
| Ex (nm) | 451 | Em (nm) | 502 | |
| 分子量 | 603.69 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
iFluor 450琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。
琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。特定标记反应可能需要升高或降低的温度。iFluor系列染料是AF系列染料的完美替代品。
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产品说明书
染色样本分析
操作步骤
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。
3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：
注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。
3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。
4.运行结合反应：
4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。
注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。
4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
5.纯化缀合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。
5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。
5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。
5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。
注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥
参考文献
Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769
Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018
Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436
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