CytoFix 溶酶体红色探针 货号23210-AAT Bioquest荧光染料

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CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针    货号23210 货号 23210 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) Em (nm)
分子量 863.75 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

溶酶体是含有酸性水解酶的细胞器,它通过自噬来分解废物和细胞碎片。 AAT Bioquest提供CytoFix 溶酶体红色探针,可选择性地对溶酶体染色。 即使固定后,CytoFix 溶酶体红色探针也可以很好地保留在溶酶体中。 该探针会渗透完整的活细胞,并保留在溶酶体内。 这种染料在溶酶体中产生的荧光至少可以保留1周,使其成为极好的溶酶体示踪染料。 该探针的主要特征是其高染色效率,固定后可长时间保留并减少了人工操作时间。 CytoFix 溶酶体红色探针可与GFP表达的细胞或其他细胞器染色剂一起使用,进行多色分析。 它既可用于悬浮细胞,也可用于贴壁细胞,并易于适应各种荧光平台。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的CytoFix 溶酶体红色探针。

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: Cy3/TRITC滤波片
发射: Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 将细胞与CytoFix LysoRed工作溶液在37°C下孵育20-30分钟
  4. 去除CytoFix LysoRed工作溶液
  5. 使用Cy3 / TRITC滤光片组在荧光显微镜下分析

 

溶液配制 

工作溶液配制

CytoFix LysoRed工作溶液:将20 µL储备溶液添加到10 mLHanks缓冲液和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或自备缓冲液中,并充分混合。

注意:20 µL储备液足以进行一次96孔板分析。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

注意 未使用的CytoFix LysoRed储备溶液可以分装,并在≤-20°C下以较小的等分试样存储。 避光并避免重复的冻融循环。

 

实验步骤

 

1.在生长培养基中准备细胞。

2.去除细胞培养基并洗涤两次(可选)

3.在细胞培养板中加入100 µL /孔(96孔板)或50 µL /孔(384孔板)的CytoFix LysoRed工作溶液

(注意细胞膜探针的最佳浓度因具体应用而异。)

4.避光保存,在37°C下孵育细胞20-30分钟。

5.除去每个孔中的工作溶液。 用HHBS或您自备缓冲液洗涤细胞一次(可选)。

6.可选:在室温下用4%甲醛将细胞固定20分钟。 洗涤细胞两次以除去任何固定液。

7.使用带有Cy3 / TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

 图示

 

CytoFix 溶酶体红色探针    货号23210

图1.在黑色96孔板上用CytoFix LysoRed染色的HeLa细胞的荧光图像。 在室温下用4%甲醛溶液定影(左)和(右)定影20分钟后获取图像。 使用带有Cy3 / TRITC滤光片的荧光显微镜对细胞成像。

 

说明书
CytoFix 溶酶体红色探针.pdf

LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针 货号22642-AAT Bioquest荧光染料

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LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针

LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针

LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针    货号22642 货号 22642 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1944
Ex (nm) 434 Em (nm) 480
分子量 331.42 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针,用于标记活细胞的溶酶体。专有的溶解性染料可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。 溶质指示剂是疏水性化合物,易于渗透完整的活细胞,并在进入细胞后被捕获在溶酶体中。 进入溶酶体后,LysoBrite 试剂的荧光明显增强。 可以使用荧光成像,高含量成像,酶标仪荧光测定法或流式细胞术检测荧光。 LysoBrite 橙色,红色,深红色和NIR试剂具有极高的光稳定性和优异的细胞保留性,可用于各种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞活力,细胞凋亡和细胞毒性。 它们适用于增殖和非增殖细胞,可用于悬浮细胞和贴壁细胞。溶酶体是细胞器,其含有酸水解酶以分解废物和细胞碎片。 溶酶体消化多余的或破旧的细胞器,食物颗粒和吞噬的病毒或细菌。 溶酶体周围的膜允许消化酶在pH4.5下工作。 与微碱性胞质溶胶(pH 7.2)相比,溶酶体的内部是酸性的(pH 4.5-4.8)。 溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵送质子穿过膜来维持这种pH差异。LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟

洗涤细胞

在荧光显微镜下分析

注:该方案仅提供指南,应根据您的具体需求进行修改。

 

操作方法

1.制备溶酶体染色溶液:

1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。

1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液(HBSS)中,制备染料工作溶液。

注1:对于一个96孔板,20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照,避免反复冻融循环。

注2:荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞:

2.1贴壁细胞:a.在96孔黑色壁/透明底板(100μL/孔/ 96孔板)中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时,加入等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)。 b.将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 c.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞:a.将等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)加入细胞中。将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 b.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 c.使用配备有所需过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2:悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)处理过的盖玻片上,并作为粘附细胞染色(见步骤2.1)。

 

参考文献

Anti-tumour activity of low molecular weight heparin doxorubicin nanoparticles for histone H1 high-expressive prostate cancer PC-3M cells
Authors: Shuang Zhang, Zhan-Tao Li, Man Liu, Jing-Ru Wang, Mei-Qi Xu, Zhuo-Yue Li, Xiao-Chuan Duan, Yan-Li Hao, Xiu-Chai Zheng, Hui Li
Journal: Journal of Controlled Release (2018)

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
Authors: Marija Cemma, Sergio Grinstein, John H Brumell
Journal: Autophagy (2016): 1440–1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
Authors: Ja Hye Myung, Khyati A Gajjar, Jihua Chen, Robert E Molokie, Seungpyo Hong
Journal: Analytical chemistry (2014): 6088–6094

Versatile fabrication of nanoscale sol–gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
Authors: Bo Lei, Xiaofeng Chen, Xue Han, Jiaan Zhou
Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906–16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
Authors: K Nonaka, Y Kajiura, M Bando, E Sakamoto, Y Inagaki, JH Lew, K Naruishi, T Ikuta, K Yoshida, T Kobayashi
Journal: Journal of Periodontal Research

 

相关产品

产品名称 货号
LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针 Cat#22641
LysoBrite 溶酶体红色荧光探针 Cat#22645
LysoBrite 溶酶体绿色荧光探针 Cat#22643

说明书
LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针.pdf

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光 货号22655-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒    蓝色荧光    货号22655 货号 22655 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1944
Ex (nm) 433 Em (nm) 480
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光 是一套荧光成像工具,用于标记亚细胞细胞器,如膜,溶酶体,线粒体,细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =350/440nm处以大斯托克斯位移的蓝色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料,可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。溶致指示剂,一种疏水性化合物,很容易渗透完整的活细胞,并被困在溶酶体内。进入溶酶体后,其荧光显着增强。这一关键特征显着降低了其染色背景,使其可用于多种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞活力,细胞凋亡和细胞毒性。该套件提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: 360nm
发射: 445nm
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: DAPI滤波片

产品说明书

分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

在荧光显微镜下Ex / Em = 360 / 445nm(DAPI滤光片组)处进行分析

 

操作方法

1.准备溶酶体染色溶液:

1.1解冻LysoBrite Blue(组分A)至室温。

1.2通过将20μLLysoBrite Blue(组分A)稀释到10mL活细胞染色缓冲液(组分B)中制备染料工作溶液。

注1:对于一个96孔板,20μLLysoBrite NIR(组分A)就足够了。 将未使用的LysoBrite Blue(组分A)等分并储存在<-20℃。 避光,避免反复冻融循环。

注2:荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

 

2.准备和染色细胞:

2.1对于粘附细胞:在96孔黑色壁/透明底板(100μL/孔/ 96孔板)中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时,加入等体积(如100μL/孔/ 96孔板)的染料加工溶液(来自步骤1.2)。将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Dapi过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注意:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞:以1,000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀,然后加入等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)。将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Dapi过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2:悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)处理过的盖玻片上,并作为贴壁细胞染色(见步骤2.1)。

 Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒    蓝色荧光    货号22655

图1.使用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像* Costar黑色96孔板中的蓝色荧光*

 

参考文献

A Triple-Fluorophore Labeled Nucleic Acid pH Nanosensor to Investigate Non-Viral Gene Delivery
Authors: David R Wilson, Denis Routkevitch, Yuan Rui, Arman Mosenia, Karl J Wahlin, Alfredo Quinones-Hinojosa, Donald J Zack, Jordan J Green
Journal: Molecular Therapy (2017)

Silica-based nanoparticles as bi-functional and bi-modal imaging contrast agents
Authors: Séverine Lechevallier, Robert Mauricot, Hélène Gros-Dagnac, Sylviane Chevreux, Gilles Lemercier, Erick Phonesouk, Muriel Golzio, Marc Verelst
Journal: ChemPlusChem (2017)

Decidua-derived mesenchymal stem cells as carriers of mesoporous silica nanoparticles. In vitro and in vivo evaluation on mammary tumors
Authors: Juan L Paris, Paz de la Torre, Miguel Manzano, M Victoria Cabanas, Ana I Flores, María Vallet-Regí
Journal: Acta biomaterialia (2016): 275–282

Rhodamine bound maghemite as a long-term dual imaging nanoprobe of adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells
Authors: Vratislav Cmiel, Josef Skopalik, Katerina Polakova, Jan Solar, Marketa Havrdova, David Milde, Ivan Justan, {cmiel2016rhodamine Magro
Journal: European Biophysics Journal (2016): 1–12

Endocytosed β2-microglobulin amyloid fibrils induce necrosis and apoptosis of rabbit synovial fibroblasts by disrupting endosomal/lysosomal membranes: a novel mechanism on the cytotoxicity of amyloid fibrils
Authors: Tadakazu Okoshi, Itaru Yamaguchi, Daisaku Ozawa, Kazuhiro Hasegawa, Hironobu Naiki
Journal: PloS one (2015): e0139330

Fluorescence Imaging of siRNA Delivery by Peptide Nucleic Acid-based Probe
Authors: Takaya Sato, Yusuke Sato, Kenta Iwai, Shusuke Kuge, Norio Teramae, Seiichi Nishizawa
Journal: Analytical Sciences (2015): 315–320

The consideration of indolicidin modification to balance its hemocompatibility and delivery efficiency
Authors: Ching-Wei Tsai, Wei-Wen Hu, Chih-I Liu, Ruoh-Chyu Ruaan, Bing-Chang Tsai, Shiow-Lian Catherine Jin, Yung Chang, Wen-Yih Chen
Journal: International journal of pharmaceutics (2015): 498–505

A monitoring method for Atg4 activation in living cells using peptide-conjugated polymeric nanoparticles
Authors: Kyung-mi Choi, Hae Yun Nam, Jin Hee Na, Seong Who Kim, Sang Yoon Kim, Kwangmeyung Kim, Ick Chan Kwon, Hyung Jun Ahn
Journal: Autophagy (2011): 1052–1062

 

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产品名称 货号
Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光 Cat#22658
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说明书
Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光.pdf

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针 货号22645-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针    货号22645 货号 22645 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1944
Ex (nm) 576 Em (nm) 596
分子量 698.94 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针,用于标记活细胞的溶酶体。专有的溶解性染料可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。 溶质指示剂是疏水性化合物,易于渗透完整的活细胞,并在进入细胞后被捕获在溶酶体中。 进入溶酶体后,LysoBrite 试剂的荧光明显增强。 可以使用荧光成像,高含量成像,酶标仪荧光测定法或流式细胞术检测荧光。 LysoBrite 橙色,红色,深红色和NIR试剂具有极高的光稳定性和优异的细胞保留性,可用于各种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞活力,细胞凋亡和细胞毒性。 它们适用于增殖和非增殖细胞,可用于悬浮细胞和贴壁细胞。溶酶体是细胞器,其含有酸水解酶以分解废物和细胞碎片。 溶酶体消化多余的或破旧的细胞器,食物颗粒和吞噬的病毒或细菌。 溶酶体周围的膜允许消化酶在pH4.5下工作。 与微碱性胞质溶胶(pH 7.2)相比,溶酶体的内部是酸性的(pH 4.5-4.8)。 溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵送质子穿过膜来维持这种pH差异。LysoBrite 溶酶体红色荧光探针是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟

洗涤细胞

在荧光显微镜下分析

注:该方案仅提供指南,应根据您的具体需求进行修改。

 

操作方法

1.制备溶酶体染色溶液:

1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。

1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液(HBSS)中,制备染料工作溶液。

注1:对于一个96孔板,20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照,避免反复冻融循环。

注2:荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

 

2.准备和染色细胞:

2.1贴壁细胞:a.在96孔黑色壁/透明底板(100μL/孔/ 96孔板)中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时,加入等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)。 b.将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 c.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞:a.将等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)加入细胞中。将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 b.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 c.使用配备有所需过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2:悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)处理过的盖玻片上,并作为粘附细胞染色(见步骤2.1)。

 

参考文献

Anti-tumour activity of low molecular weight heparin doxorubicin nanoparticles for histone H1 high-expressive prostate cancer PC-3M cells
Authors: Shuang Zhang, Zhan-Tao Li, Man Liu, Jing-Ru Wang, Mei-Qi Xu, Zhuo-Yue Li, Xiao-Chuan Duan, Yan-Li Hao, Xiu-Chai Zheng, Hui Li
Journal: Journal of Controlled Release (2018)

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
Authors: Marija Cemma, Sergio Grinstein, John H Brumell
Journal: Autophagy (2016): 1440–1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
Authors: Ja Hye Myung, Khyati A Gajjar, Jihua Chen, Robert E Molokie, Seungpyo Hong
Journal: Analytical chemistry (2014): 6088–6094

Versatile fabrication of nanoscale sol–gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
Authors: Bo Lei, Xiaofeng Chen, Xue Han, Jiaan Zhou
Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906–16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
Authors: K Nonaka, Y Kajiura, M Bando, E Sakamoto, Y Inagaki, JH Lew, K Naruishi, T Ikuta, K Yoshida, T Kobayashi
Journal: Journal of Periodontal Research

 

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产品名称 货号
LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针 Cat#22641
LysoBrite 溶酶体绿色荧光探针 Cat#22643
LysoBrite 溶酶体蓝色荧光探针 Cat#22642

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LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针 货号22641-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针    货号22641 货号 22641 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1944
Ex (nm) 636 Em (nm) 651
分子量 730.89 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针,用于标记活细胞的溶酶体。专有的溶解性染料可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。 溶质指示剂是疏水性化合物,易于渗透完整的活细胞,并在进入细胞后被捕获在溶酶体中。 进入溶酶体后,LysoBrite 试剂的荧光明显增强。 可以使用荧光成像,高含量成像,酶标仪荧光测定法或流式细胞术检测荧光。 LysoBrite 橙色,红色,深红色和NIR试剂具有极高的光稳定性和优异的细胞保留性,可用于各种研究,包括细胞粘附,趋化性,多药耐药性,细胞活力,细胞凋亡和细胞毒性。 它们适用于增殖和非增殖细胞,可用于悬浮细胞和贴壁细胞。溶酶体是细胞器,其含有酸水解酶以分解废物和细胞碎片。 溶酶体消化多余的或破旧的细胞器,食物颗粒和吞噬的病毒或细菌。 溶酶体周围的膜允许消化酶在pH4.5下工作。 与微碱性胞质溶胶(pH 7.2)相比,溶酶体的内部是酸性的(pH 4.5-4.8)。 溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵送质子穿过膜来维持这种pH差异。LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针是美国AAT Bioquest研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟

洗涤细胞

在荧光显微镜下分析

注:该方案仅提供指南,应根据您的具体需求进行修改。

 

操作方法

1.制备溶酶体染色溶液:

1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。

1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液(HBSS)中,制备染料工作溶液。

注1:对于一个96孔板,20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照,避免反复冻融循环。

注2:荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞:

2.1贴壁细胞:a.在96孔黑色壁/透明底板(100μL/孔/ 96孔板)中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时,加入等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)。 b.将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 c.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞:a.将等体积的染料加工溶液(来自步骤1.2)加入细胞中。将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟。 b.用预热(37℃)Hanks和20mM Hepes缓冲液(HBSS)或您选择的缓冲液洗涤细胞两次,用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 c.使用配备有所需过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2:悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)处理过的盖玻片上,并作为粘附细胞染色(见步骤2.1)。

 

A: LysoBrite™ Orange

(from AAT Bioquest)

B: LysoTracker™ Red

(from Invitrogen)

0 second

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针    货号22641

 LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针    货号22641

120 seconds

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针    货号22641

 LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针    货号22641

图1.在Costar黑色96孔板中用A:LysoBrite Orange或B:LysoTracker®RedDND-99(来自Invitrogen)染色的Hela细胞的图像。 通过使用Olympus荧光显微镜在0和120秒曝光时间比较TRTIC信号。

 

参考文献

Anti-tumour activity of low molecular weight heparin doxorubicin nanoparticles for histone H1 high-expressive prostate cancer PC-3M cells
Authors: Shuang Zhang, Zhan-Tao Li, Man Liu, Jing-Ru Wang, Mei-Qi Xu, Zhuo-Yue Li, Xiao-Chuan Duan, Yan-Li Hao, Xiu-Chai Zheng, Hui Li
Journal: Journal of Controlled Release (2018)

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
Authors: Marija Cemma, Sergio Grinstein, John H Brumell
Journal: Autophagy (2016): 1440–1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
Authors: Ja Hye Myung, Khyati A Gajjar, Jihua Chen, Robert E Molokie, Seungpyo Hong
Journal: Analytical chemistry (2014): 6088–6094

Versatile fabrication of nanoscale sol–gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
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Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906–16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
Authors: K Nonaka, Y Kajiura, M Bando, E Sakamoto, Y Inagaki, JH Lew, K Naruishi, T Ikuta, K Yoshida, T Kobayashi
Journal: Journal of Periodontal Research

 

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LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针.pdf