胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 Z-DEVD-AFC 绿

	货号	13420	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	1944
	Ex (nm)	376	Em (nm)	482
	分子量	821.71	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 Z-DEVD-AFC 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，Z-DEVD-AFC是胱天蛋白酶3的荧光底物，胱天蛋白酶3是一种蛋白酶，当细胞暴露于凋亡条件下时会迅速活化，并裂解聚ADP-核糖聚合酶。该底物被胱天蛋白酶3水解以产生高荧光的7-酰胺基-4-三氟甲基香豆素（AFC）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 Z-DEVD-AFC 绿。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

Palmitoylation is required for TNF-R1 signaling
Authors: Philipp Zingler, Vinzenz Särchen, Timo Glatter, Lotta Caning, Carina Saggau, Rahul S Kathayat, Bryan C Dickinson, Dieter Adam, Wulf Schneider-Brachert, Stefan Schütze
Journal: Cell Communication and Signaling (2019): 1–16

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
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	产品详细介绍

简要概述

蛋白酶测定法广泛用于蛋白酶抑制剂的研究和蛋白酶活性的检测。监测各种蛋白酶活性已成为许多生物实验室的常规任务。 一些蛋白酶已被确定为良好的药物开发目标。

我们的Amplite 通用荧光蛋白酶活性检测试剂盒是进行常规检测分离蛋白酶或鉴定蛋白质样品中污染蛋白酶的理想选择。该试剂盒使用荧光酪蛋白偶联物，其被证明是广谱蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和弹性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用绿色荧光染料严重标记，导致显着的荧光猝灭。蛋白酶催化的水解减轻了其猝灭效应，产生明亮的荧光染料标记的短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。使用FITC滤光片组，可以使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm下轻松读取其信号。

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产品说明书

一个96孔板的测定方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

概述（方案A）

检测样品中的蛋白酶活性

准备蛋白酶底物溶液 (50 µL)

添加底物对照、阳性对照或测试样品 (50 µL)

跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数

在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度

概述（方案B）

使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

准备蛋白酶底物溶液 (10 µL)

添加底物对照、阳性对照、载体对照或测试样品 (90 µL)

跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数

在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度 

工作溶液配制

在 2X 检测缓冲液（组分 C）中以 1:100 的比例稀释蛋白酶底物（组分 A）。在 96 孔板中，每次测定使用 50 μL 的蛋白酶底物溶液。 
注意：2X 检测缓冲液（组分 C）设计用于检测糜蛋白酶、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。 

在去离子水中以 1:50 的比例稀释胰蛋白酶（5 U/µL，组分 B），以获得 0.1 U/µL 的浓度。

将 5 mL 去离子水加入 5 mL 的 2X 检测缓冲液（组分 C）中。

在 1X 检测缓冲液中以 1:20 稀释蛋白酶底物（组分 A）。对 96 孔板使用 10 μL/孔的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 测定缓冲液（组分 C）设计用于检测糜蛋白酶、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。

将 1X 检测缓冲液中的蛋白酶稀释至 500-1000 nM 的浓度（对于胰蛋白酶 50-100 U/mL）。每孔需要 10 μL 的蛋白酶稀释液。为所有测试样品准备适当的量，为阳性对照和载体对照孔准备额外的量。

表1.蛋白酶的检测缓冲液配方。对于方案 A，需要 2X 检测缓冲液。对于方案 B，需要 1X 检测缓冲液。

方案二：使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

概述

准备蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物对照，阳性对照，载体对照或测试样品（90μL）

孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟-1小时（用于终点读数）

监测Ex的荧光强度 / Em = 490 / 525nm

操作方法

方案 A：检测样品中的蛋白酶活性

表2. 96 孔板中底物对照、阳性对照和测试样品的布局。SC=底物对照，PC=阳性对照，TS=测试样品。

表3.每孔的试剂组成。如果使用少于 50 µL 的蛋白酶生物样品，添加 ddH₂O 使总体积为 50 µL。

1.在测定板的所有孔中加入 50 μL 的蛋白酶底物溶液（方案A）。充分混合试剂。

2.在Ex/Em = 490/525 nm 处使用荧光酶标仪检测荧光。 对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度并每 5 分钟记录一次数据，持续 30 分钟。 对于终点读数：在所需温度下孵育反应 30 至 60 分钟，避光。然后测量荧光强度。 

方案 B：使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

表4. 96 孔微孔板中样品的布局。SC=底物对照，PC=阳性对照，VC=载体对照，TS=测试样品。建议测试每种测试化合物的至少三种不同浓度。所有测试样品应一式两份或一式三份进行。

表5.每孔的试剂组成。对于添加到孔中的每一体积的测试化合物，需要检查用于递送测试化合物的相同体积的溶剂以了解载体对蛋白酶活性的影响。

1.在阳性对照 (PC)、对照 (VC) 和测试样品 (TS) 的孔中加入 10 μL 的蛋白酶底物溶液（方案B）。充分混合试剂。

2.在 Ex/Em = 490 /525 nm 处使用荧光酶标仪检测荧光强度。 对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度并每 5 分钟记录一次数据，持续 30 分钟。 对于终点读数：在所需温度下孵育反应 30 至 60 分钟，避光。然后测量荧光强度。 

参考文献

IL-33, IL-25 and TSLP contribute to development of fungal-associated protease-induced innate-type airway inflammation
Authors: Yoshihisa Hiraishi, Sachiko Yamaguchi, Takamichi Yoshizaki, Aya Nambu, Eri Shimura, Ayako Takamori, Seiko Narushima, Wakako Nakanishi, Yosuke Asada, Takafumi Numata
Journal: Scientific reports (2018): 18052

Tranexamic acid blocks the thrombin-mediated delay of epidermal permeability barrier recovery induced by the cedar pollen allergen, Cry j1
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Eosinophil extracellular trap cell death–derived DNA traps: Their presence in secretions and functional attributes
Authors: Shigeharu Ueki, Yasunori Konno, Masahide Takeda, Yuki Moritoki, Makoto Hirokawa, Yoshinori Matsuwaki, Kohei Honda, Nobuo Ohta, Shiori Yamamoto, Yuri Takagi
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简要概述

胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物Ac-DEVD-AFC 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡或程序性细胞死亡中是必需的，在发育和成年生活的大多数其他阶段，并且因其在细胞中的作用而被称为“刽子手”蛋白质。免疫系统中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴细胞的成熟。细胞凋亡失败是肿瘤发展和自身免疫疾病的主要原因之一。半胱天冬酶也参与缺血和阿尔茨海默病。凋亡caspase有两种类型：引发剂和效应剂。 启动子半胱天冬酶（例如，CASP2，CASP8，CASP9和CASP10）切割效应半胱天冬酶的无活性前体形式，从而激活它们。效应子半胱天冬酶（例如，CASP3，CASP6，CASP7）依次切割细胞内的其他蛋白质底物，以触发细胞凋亡过程。该级联反应的起始受半胱天冬酶抑制剂的调节。

AAT Bioquest提供一组蓝色，绿色和红色荧光底物，用于监测caspase活性。AMC-，AFC-，R110-和ProRed – 衍生的蛋白酶底物是无色和非荧光的。通过半胱天冬酶切割阻断蛋白酶可切割的肽残基分别产生强烈的蓝色，绿色或红色荧光，其可以通过荧光仪器监测。我们专有的ProRed 衍生的半胱氨酸蛋白酶底物是用于荧光检测各种半胱天冬酶活性的最敏感的红色指示剂。通常，R110和ProRed 底物比基于AMC-，AFC-或4-硝基苯胺的底物灵敏得多。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物Ac-DEVD-AFC 绿。 

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产品说明书

操作方法

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

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Cell Meter 活细胞免洗胱天蛋白酶3/7成像试剂盒使用我们最近开发的可渗透细胞的荧光胱天蛋白酶底物ApoSight Green Caspase 3/7（第一个荧光探针）直接检测活细胞中的胱天蛋白酶活性。 ApoSight Green Caspase 3/7底物由三个部分组成，包括a）荧光团，b）半胱天冬酶选择性肽片段（DEVD），以及c）细胞穿透部分。细胞穿透部分将探针带入活细胞。进入活细胞后，半胱天冬酶选择性肽片段被半胱天冬酶裂解以释放荧光团。恢复的荧光强度与要测量的胱天蛋白酶的活性直接相关。与活细胞中现有的半胱天冬酶测定相比，ApoSight Green Caspase 3/7底物更加稳定，方便和准确。 ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物释放出Ex / Em〜490/520 nm的荧光团。如NucView试剂所报道的，它不需要DNA相互作用即可发荧光。如FMK肽探针所报道的，它不抑制胱天蛋白酶活性。尽管胱天蛋白酶的荧光FMK肽抑制剂被广泛用于检测活细胞中的胱天蛋白酶活性，但是该技术有一些严重的局限性：a）FMK半胱天冬酶抑制剂具有很高的细胞毒性，因为FMK肽与活性胱天蛋白酶共价结合。 b）FMK肽与caspase的不可逆共价结合会抑制caspase活性，导致假阳性凋亡。 C）FMK分析具有极高的本底，并且需要大量洗涤，从而导致极低的通量。 d）FMK肽在水溶液中不稳定，必须立即使用。 Cell Meter 活细胞免洗Caspase 3/7成像试剂盒提供了优化的荧光成像测定法，用于检测caspase3 / 7活性。该检测可以使用96孔或384孔板进行实验，并易于适应自动化。

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