ThiolTrace Violet 500谷胱甘肽检测试剂货号22280-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年2月25日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

ThiolTrace Violet 500*谷胱甘肽检测试剂*

ThiolTrace Violet 500谷胱甘肽检测试剂

货号	22280	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	500 Tests	价格	2604
Ex (nm)	415	Em (nm)	499
分子量	557.01	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

ThiolTrace Violet 500*谷胱甘肽检测试剂*是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，GSH的亚细胞检测和定位对于了解氧化还原状态的调节，药物的作用以及排毒的机制非常重要。ThiolTrace Violet 500是一种比通常使用的mBBr，mBCl或Thiotracker Violet更亮，更坚固的细胞内硫醇探针，可用于监测细胞内GSH。由于还原型谷胱甘肽代表细胞中细胞内大多数游离巯基，因此ThiolTrace 紫罗兰500可用于估算还原型谷胱甘肽的细胞水平。它比mBCL和其他细胞内常见的硫醇检测探针（例如Thiotracker紫罗兰色）至少亮10倍，并且可以通过紫外线或405 nm的大斯托克斯位移进行激发。它可以用醛固定，并通过Triton®X-100（0.5％）渗透。它可以用于包括细胞毒性研究在内的多重分析中。ThiolTrace Violet 500提供了一种简单，灵敏且可重现的工具来检测生物样品中降低的GSH含量。ThiolTrace Violet 500与硫醇反应，在普通的405 nm紫激光下激发出520-530 nm的强荧光。与ThiolTracker紫罗兰（Thermo Fisher Scientific）相比，ThiolTrace紫罗兰500在含有生长因子的细胞培养基中的强度高10-100倍。ThiolTrace Violet 500与多种稀释剂兼容，包括含血清的细胞培养基。ThiolTrace Violet 500可用于流式细胞仪，HCS成像和落射荧光显微镜。

点击查看光谱

适用仪器

流式细胞仪
激发：	405nm激光
发射：	525/50nm滤波片
通道：	Pacific Orange通道

荧光显微镜
激发：	405nm
发射：	525nm
推荐孔板：	黑色透明
滤波片：	TRITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用5×10 ⁵到1×10 ⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

2.准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

3.在37 ^o C 孵育20至30分钟

4.在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度-Pacific Orange

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
ThiolTrace 紫罗兰色500储备液（500X）：
在小瓶ThiolTrace Violet 500中加入200 µL DMSO（未提供），并充分混合。注意：分装并在-20℃下存储未使用的ThiolTrace Violet 500储备液。避免重复冷冻/融化循环。

2.工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将1 µL ThiolTraceTM紫罗兰色500储备溶液加入您选择的0.5 mL缓冲液中，并充分混合。注意：可以在含有血清的细胞培养基中制备ThiolTrace Violet 500工作溶液。

点击查看细胞样品制备

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用ThiolTrace 紫罗兰色工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL所选缓冲液（可选）洗涤细胞。

3.将细胞重悬于0.5 mL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液中，并在37oC培养箱中孵育20至30分钟。注意：对于荧光显微镜，每孔添加200 µL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液。

4.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后在1 mL所选缓冲液（可选）中洗涤细胞。

5.重悬于缓冲液中，使用太平洋橙滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪监测荧光强度。

参考文献

A highly sensitive two-photon fluorescent probe for glutathione with near-infrared emission at 719nm and intracellular glutathione imaging
Authors: C. Huang
Journal: Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc (2019): 68-76

Glutathione-driven Cu(i)-O2 chemistry: a new light-up fluorescent assay for intracellular glutathione
Authors: P. F. Gao
Journal: Analyst (2018): 2486-2490

Nitrogen-doped carbon quantum dots as a fluorescent probe to detect copper ions, glutathione, and intracellular pH
Authors: S. Liao
Journal: Anal Bioanal Chem (2018): 7701-7710

Graphene Quantum Dot-MnO2 Nanosheet Based Optical Sensing Platform: A Sensitive Fluorescence “Turn Off-On” Nanosensor for Glutathione Detection and Intracellular Imaging
Authors: X. Yan
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2016): 21990-6

A sensitive turn-on fluorescent probe for intracellular imaging of glutathione using single-layer MnO2 nanosheet-quenched fluorescent carbon quantum dots
Authors: D. He
Journal: Chem Commun (Camb) (2015): 14764-7

A fluorescent probe for intracellular cysteine overcoming the interference by glutathione
Authors: M. Tian
Journal: Org Biomol Chem (2014): 6128-33

A mitochondria-targetable fluorescent probe for dual-channel NO imaging assisted by intracellular cysteine and glutathione
Authors: Y. Q. Sun
Journal: J Am Chem Soc (2014): 12520-3

Designing an intracellular fluorescent probe for glutathione: two modulation sites for selective signal transduction
Authors: M. Isik
Journal: Org Lett (2014): 3260-3

Turn-on fluorescence sensor for intracellular imaging of glutathione using g-C(3)N(4) nanosheet-MnO(2) sandwich nanocomposite
Authors: X. L. Zhang
Journal: Anal Chem (2014): 3426-34

Detection of intracellular glutathione using ThiolTracker violet stain and fluorescence microscopy
Authors: B. S. Mandavilli
Journal: Curr Protoc Cytom (2010): Unit 9 35

说明书

ThiolTrace Violet 500*谷胱甘肽检测试剂*.pdf

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光货号10060-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年2月9日由英国沃特曼whatman

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Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光

货号	10060	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	200 Tests	价格	3924
Ex (nm)	510	Em (nm)	524
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中最小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和解毒状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite?荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 520nm处轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒。

适用仪器

荧光酶标仪
激发：	490nm
发射：	525nm
cutoff：	515nm
推荐孔板	黑色底板

产品说明书

96孔板测定示例（100个测试）

概述

1.准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

2.添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite™Green原液。

注意：未使用的Thiolite™Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite™Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite™Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过向组分E的瓶中加入200μL的ddH2O制备25X GSSG探针，然后通过按比例混合储备溶液与GAM（来自步骤4）来制备TGAM测定混合物。将未使用的25X GSSG探针储备液等分并保存在-20℃，避免冻融循环。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

6.3如说明书中表1和表2所示，将GSH标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微量培养板中。当仅需要GSH测定时，根据表1仅填充左侧两列（A组）中的孔。跳过第7步，直接进入第8步。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。在4小时内使用。

7.2取200μL10μMGSSG标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSSG标准品。总GSH标准溶液的浓度应为GSSG标准溶液浓度的两倍，分别为10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563和0μM。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

8.2如果需要总GSH（在还原和氧化状态下）测定，将50μL总GSH测定混合物（来自步骤5的TGAM）加入到GSSG标准，空白对照和测试样品的B组（右）的孔中（来自步骤6.3）使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

ROS production and glutathione response in keratinocytes after application of β-carotene and VIS/NIR irradiation
Authors: Silke B Lohan, Kristina Vitt, Patrik Scholz, Cornelia M Keck, Martina C Meinke
Journal: Chemico-biological interactions (2017)

Osmotic stress is accompanied by protein glycation in Arabidopsis thaliana
Authors: Gagan Paudel, Tatiana Bilova, Rico Schmidt, Uta Greifenhagen, Robert Berger, Elena Tarakhovskaya, Stefanie Stöckhardt, Gerd Ulrich Balcke, Klaus Humbeck, Wolfgang Brandt
Journal: Journal of Experimental Botany (2016): 6283–6295

Systemic Induction of NO-, Redox-, and cGMP Signaling in the Pumpkin Extrafascicular Phloem upon Local Leaf Wounding
Authors: Frank Gaupels, Alexandra CU Furch, Matthias R Zimmermann, Faxing Chen, Volkhard Kaever, Anja Buhtz, Julia Kehr, Hakan Sarioglu, Karl-Heinz Kogel, Jörg Durner
Journal: Frontiers in plant science (2016)

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Maike K Aurich, Giuseppe Paglia, Ottar Rolfsson, Sigrún Hrafnsdóttir, Manuela Magnúsdóttir, Magdalena M Stefaniak, Bernhard O Palsson, Ronan MT Fleming, Ines Thiele
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

Molecular mechanisms of hyperthermia-induced apoptosis enhanced by withaferin A
Authors: Zheng-Guo Cui, Jin-Lan Piao, Mati UR Rehman, Ryohei Ogawa, Peng Li, Qing-Li Zhao, Takashi Kondo, Hidekuni Inadera
Journal: European journal of pharmacology (2014): 99–107

Cancer & Metabolism
Authors: Gregory LaMonte, Xiaohu Tang, Julia Ling-Yu Chen, Jianli Wu, Chien-Kuang Cornelia Ding, Melissa M Keenan, Carolyn Sangokoya, Hsiu-Ni Kung, Olga Ilkayeva, László G Boros
Journal: (2013)

说明书

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光 .pdf

Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒(适用于流式细胞仪，激发光：405nm) 货号22809-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年1月13日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒(适用于流式细胞仪，激发光：405nm)

货号	22809	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	2604
Ex (nm)	415	Em (nm)	499
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒是一种具有多种参数可监测细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒通过测量还原型谷胱甘肽（GSH）的减少来检测细胞凋亡。GSH对于维持细胞的氧化还原水平很重要，它参与许多细胞过程，包括清除自由基，药物解毒，细胞信号传导和细胞增殖等。细胞中GSH浓度的降低是许多细胞死亡的早期标志。我们的Cell Meter 细胞内GSH检测试剂盒使用我们专有的ThiolTrace Violet500，当与硫醇（包括细胞中的GSH）反应时，它会发出强烈的荧光。在正常细胞中，该探针是高度荧光的，而在凋亡细胞中，染色强度会大幅度降低。用ThiolTrace Violet染色的细胞可以用流式细胞仪（Pacific Orange 滤光片组）观察。该试剂盒可与其他试剂（例如7-AAD（＃17501）一起使用，用于细胞活力和凋亡的多参数研究。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡激活剂和抑制剂。

点击查看光谱

点击查看细胞样品制备指南

适用仪器

流式细胞仪
激发：	405nm激发
发射：	525/50nm滤波片
通道：	Pacific Orange通道

产品说明书

实验方案

简要概述

用5×10⁵到1×10⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

在37℃孵育20至30分钟

在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度（Pacific Orange滤光片组）

溶液配制

储备溶液配制

ThiolTrace Violet 500储备液（500X）：
在ThiolTrace Violet 500 的小瓶中加入200 µL DMSO（组分C）。注意：分装并在-20℃储存未使用的ThiolTrace Violet 500，避免反复冷冻/解冻循环。

工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将2 µL ThiolTrace Violet 500储备溶液添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）或您自备的缓冲液中，并充分混合。注意：ThiolTrace Violet 500 工作溶液可以在含有血清的细胞培养基中制备。

操作步骤

对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，在使用ThiolTrace Violet 500工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。注意：最佳孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。
将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL缓冲液（可选）洗涤细胞。
将细胞重悬于1 mL ThiolTrace Violet 500工作溶液中，并在37℃的培养箱中孵育20至30分钟。
使用Pacific Orange滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪检测荧光强度。

图示

Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒(适用于流式细胞仪，激发光：405nm) 货号22809

图1.在HL-60细胞中加入喜树碱后，ThiolTrace Violet 500的荧光强度降低。将HL-60细胞在37℃，5％CO₂培养箱中在无（红线）或20μM喜树碱（绿线）下处理6小时，然后用ThiolTrace Violet 500染色20分钟。使用带有Pacific Orange通道的ACEA NovoCyte 3000流式细胞仪测量荧光强度。

参考文献

Cell-based assay using glutathione-depleted HepaRG and HepG2 human liver cells for predicting drug-induced liver injury
Authors: Xu, J., Oda, S., Yokoi, T.
Journal: Toxicol In Vitro (2018): 286-301

相关产品

产品名称	货号	规格
Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒（适用于流式细胞仪）	22809	499
Cell Meter 细胞内谷胱甘肽GSH检测试剂盒（适用于流式细胞仪）	22810	525

说明书

Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒(适用于流式细胞仪，激发光：405nm).pdf

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光货号10060-AAT Bioquest荧光染料

发表于2023年12月21日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光

货号	10060	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	200 Tests	价格	3924
Ex (nm)	510	Em (nm)	524
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

适用仪器

荧光酶标仪
激发：	490nm
发射：	525nm
cutoff：	515nm
推荐孔板	黑色底板

产品说明书

96孔板测定示例（100个测试）

概述

1.准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

2.添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite™Green原液。

注意：未使用的Thiolite™Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite™Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite™Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。在4小时内使用。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

说明书

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒绿色荧光 .pdf

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒绿色荧光货号10056-AAT Bioquest荧光染料

发表于2023年11月3日由英国沃特曼whatman

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒绿色荧光

货号	10056	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	200 Tests	价格	3924
Ex (nm)	510	Em (nm)	524
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测GSH/GSSG比率的试剂盒，谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中最小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和解毒状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 520nm处轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADP/NADPH检测试剂盒。

适用仪器

荧光酶标仪
激发：	590nm
发射：	520nm
Cutoff:	510nm
推荐孔板：	黑色底板

产品说明书

96孔板测定示例（100个测试）

概述

准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite Green原液。

注意：未使用的Thiolite Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。在4小时内使用。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

说明书

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒绿色荧光 .pdf

英国沃特曼whatman官网

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标签归档：谷胱甘肽

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