PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色* 货号21665-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*

货号 21665 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 1000 Tests 价格 2604
Ex (nm) 650 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测磷酸盐的试剂盒,磷酸盐参与许多生物反应。例如,磷酸酶,ATP酶和几种其他酶催化无机磷酸盐(Pi)从底物释放的反应。 这种PhosphoWorks 磷酸盐检测试剂盒是为测量任何产生磷的酶的活性而开发的。 该试剂盒的配方可灵敏检测Pi,为危险的放射性方法和其他灵敏度较低的比色分析提供了替代方案。 Pi的测量基于在钼酸盐存在下孔雀石绿衍生物的吸光度变化。 与其他孔雀石染料配方不同,该试剂盒可提供完全稳定的终点信号,不易沉淀。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒。 

 

适用仪器


分光光度计  
吸收: 600-660nm
推荐孔板: 透明底板
光吸收酶标仪  
吸收: 600-660nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备测试样品或磷酸盐标准品(80μL)
添加MG Plus 试剂(组分B)(20μL)
在室温下孵育10-40分钟
监测600-660nm的吸光度或分光光度计

 

制备标准溶液

磷酸盐标准配制

在950μL去离子水或酶反应缓冲液中加入50μL1mM磷酸盐标准品(组分A),得到50μM磷酸盐标准溶液(PS7)。 取50μM磷酸盐标准溶液(PS7)并进行1:2连续稀释,用去离子水或酶反应缓冲液获得连续稀释的磷酸盐标准品(PS6-PS1)。

 

样品实验方案

 

表1.透明96孔微孔板中磷酸盐标准品和测试样品的布局。

PS =磷酸盐标准品(PS1-PS7,0.78至50μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
PS1 PS1
PS2 PS2
PS3 PS3    
PS4 PS4    
PS5 PS5    
PS6 PS6    
PS7 PS7    

 

表2.每个孔的试剂组成。

规格 试剂
PS1-PS7 80ul 连续稀释液(0.78至50μM)
BL 80ul 不含磷酸盐的水或缓冲液
TS 80ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备磷酸盐标准品(PS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用40μL试剂代替80μL。

2.使用前摇匀MG Plus 试剂(组分B)。

3.向磷酸盐标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入20μLMGPlus™试剂(组分B),使总磷酸盐测定体积为100μL/孔。彻底混合试剂。对于384孔板,在每个孔中加入10μLMGPlus™试剂(组分B),总体积为50μL/孔。

4.在含磷酸盐的孔中将在10至40分钟内产生蓝绿色。使用吸光度酶标仪在600 – 660 nm处监测吸光度或使用分光光度计。注意:在高磷酸盐浓度(>100μM)下,可能会形成沉淀。稀释样品并重新进行分析。注意:对于需要总体积大于100μL的比色皿测定,在测量吸收之前,将样品体积和MG Plus 试剂(组分B)按比例加倍或用1M H 2 SO 4或1M HCl稀释最终反应混合物。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(吸光度)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算磷酸盐样品。 我们建议使用在线线性回归计算器(点击查看)

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*   货号21665

图1.使用SpectraMax Plus酶标仪(Molecular Devices),在透明的96孔板上用PhosphoWorks 比色磷酸盐测定试剂盒测量磷酸盐剂量响应。

 

参考文献

Modulating bone regeneration in rabbit condyle defects with three surface-structured tricalcium phosphate ceramics
Authors: Rongquan Duan, Davide Barbieri, Florence de. groot, Joost de. bruijn, Huipin Yuan
Journal: ACS Biomaterials Science & Engineering (2018)

Variation of bone forming ability with the physicochemical properties of calcium phosphate bone substitutes
Authors: Rongquan Duan, Davide Barbieri, Xiaoman Luo, Jie Weng, Chongyun Bao, Joost De Bruijn, Huipin Yuan
Journal: Biomaterials Science (2017)

Influence of surface microstructure and chemistry on osteoinduction and osteoclastogenesis by biphasic calcium phosphate discs.
Authors: NL Davison, J Su, H Yuan, JJJP van den Beucken, JD de Bruijn
Journal: (2015)

Submicron-scale surface architecture of tricalcium phosphate directs osteogenesis in vitro and in vivo
Authors: NL Davison, X Luo, T Schoenmaker, V Everts, H Yuan, F Barrere-de Groot, JD de Bruijn
Journal: Eur Cell Mater (2014)

Zinc in calcium phosphate mediates bone induction: in vitro and in vivo model
Authors: Xiaoman Luo, Davide Barbieri, Noel Davison, Yonggang Yan, Joost D de Bruijn, Huipin Yuan
Journal: Acta biomaterialia (2014): 477–485

 

相关产品

产品名称 货号
PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒 Cat#21617
PhosphoWorks 荧光法磷酸盐检测试剂盒 *红色荧光* Cat#21660

说明书
PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*.pdf

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow * 货号21621-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow *

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow *

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow *    货号21621 货号 21621 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 12588
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,三磷酸腺苷(ATP)在细胞能量,代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”,以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子,在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒,可通过重组萤火虫荧光素酶(目录号21610和21609)确定ATP的纳摩尔(nM)范围。这些试剂盒需要酶标仪,通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 荧光ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应,产生过氧化氢,该过氧化氢用我们的Amplite Red底物通过分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约0.4 µM ATP,而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大,简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 荧光ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒。

 

适用仪器


发光酶标仪  
推荐孔板: 白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液(50 µL)
2.添加ATP标准液或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)的荧光增加

 

溶液配制

1.制备储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1Amplite 红色底物储备液(200X):
将30 µL DMSO(组分E)加入小瓶AmpliteTM Red Substrate(组分A)中,制成200X Amplite Red Substrate储备液。

1.2ATP标准溶液(10mM):
将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液(组分D)的小瓶中,制成10 mM ATP标准溶液。

 

2.制备标准溶液

ATP标准

将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中,以生成100 µM ATP标准溶液(AS7)。 取100 µM ATP标准溶液(AS7)并进行1:3连续稀释,以使用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液(AS6-AS1)。

 

3.制备工作溶液

3.1将5毫升测定缓冲液(组分C)添加到酶混合瓶(组分B)中,并充分混合。

3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 µL 200X AmpliteTM Red Substrate储备液,充分混合以制成APT工作溶液。

 

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品(AS1-AS7,0.14至100 µM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.14至100 µM)
BL 50ul 1 X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局,准备ATP标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。

2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液,空白对照和测试样品的每个孔中,以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)处监视荧光增加。

 

参考文献

ATP-based cell viability assay is superior to trypan blue exclusion and XTT assay in measuring cytotoxicity of anticancer drugs Taxol and Imatinib, and proteasome inhibitor MG-132 on human hepatoma cell line HepG2
Authors: E. Nowak
Journal: Clin Hemorheol Microcirc (2018): 327-336

High-content image analysis (HCIA) assay has the highest correlation with direct counting cell suspension compared to the ATP, WST-8 and Alamar blue assays for measurement of cytotoxicity
Authors: H. Tahara
Journal: J Pharmacol Toxicol Methods (2017): 92-99

High throughput cell-based assay for identification of glycolate oxidase inhibitors as a potential treatment for Primary Hyperoxaluria Type 1
Authors: Mengqiao Wang, Miao Xu, Yan Long, Sonia Fargue, Noel Southall, Xin Hu, John C McKew, Christopher J Danpure, Wei Zheng
Journal: Scientific Reports (2016)

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

The Different Effects of Atorvastatin and Pravastatin on Cell Death and PARP Activity in Pancreatic NIT-1 Cells
Authors: Ya-Hui Chen, Yi-Chun Chen, Chin-San Liu, Ming-Chia Hsieh
Journal: Journal of Diabetes Research (2016)

BPA-induced DNA hypermethylation of the master mitochondrial gene PGC-1α contributes to cardiomyopathy in male rats
Authors: Ying Jiang, Wei Xia, Jie Yang, Yingshuang Zhu, Huailong Chang, Juan Liu, Wenqian Huo, Bing Xu, Xi Chen, Yuanyuan Li
Journal: Toxicology (2015): 21–31

Combination of immunoprecipitation (IP)-ATP_Glo kinase assay and melanogenesis for the assessment of potent and safe PAK1-blockers in cell culture
Authors: B. C. Nguyen
Journal: Drug Discov Ther (2015): 289-95

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Endocrine-related cancer (2015): 577–591

JQ1 suppresses tumor growth through downregulating LDHA in ovarian cancer
Authors: Haifeng Qiu, Amanda L Jackson, Joshua E Kilgore, Yan Zhong, Leo Li-Ying Chan, Paola A Gehrig, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Oncotarget (2015): 6915

Loss of histone deacetylase Hdac1 disrupts metabolic processes in intestinal epithelial cells
Authors: Alexis Gonneaud, Naomie Turgeon, Frančois-Michel Boisvert, Frančois Boudreau, Claude Asselin
Journal: FEBS letters (2015): 2776–2783

 

参考文献

产品名称 货号
PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒 Cat#21617
PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *温和发光* Cat#21609
PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光* Cat#21610

说明书
PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow *.pdf

PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收* 货号21659-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*

PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*

货号 21659 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 360 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ADP的试剂盒,ADP参与许多生物反应,例如蛋白激酶。 我们的ADP分析试剂盒可通过监测ADP的形成来普遍用于分析蛋白激酶反应,而ADP的形成与酶磷酸转移酶的活性成正比,并通过荧光法进行测量。 该试剂盒提供了一种快速,简单且均一的测定ADP形成或消耗的测定方法。 该测定是连续的,并且可以容易地适于自动化。 该套件很方便,需要最少的动手时间。 由于蛋白激酶与诸如癌症和其他增生性疾病,炎性疾病,代谢紊乱和神经系统疾病等疾病的广泛相关性,因此参与药物开发的研究人员对蛋白激酶很感兴趣。 大多数商业化的蛋白激酶检测试剂盒都是基于对磷酸肽形成或ATP缺失的监测。 我们的ADP检测试剂盒比大多数商业激酶检测试剂盒对蛋白质激酶的检测更稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*。

 

适用仪器


分光光度计  
吸收: 360nm
推荐孔板: Clear UV-transparent
光吸收酶标仪  
吸收: 360nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.运行激酶反应(20 µL)
2.添加ADP传感器缓冲液(20 µL)
3.添加ADP传感器(10 µL)
4.在室温下孵育15分钟-1小时
5.监控荧光强度

 

溶液制备 

1.标准溶液

磷酸盐标准
向950μL去离子水或酶反应缓冲液中添加50μL1 mM KH2PO4(组分D),得到50μM磷酸盐标准溶液(PS7)。 取50μM磷酸盐标准溶液,并进行1:2连续稀释,以用去离子水或酶反应缓冲液连续稀释磷酸盐标准液(PS6-PS1)。

 

2.工作溶液

2.1将500 µL ddH2O加入小瓶MESG底物(组分B)。 涡旋混合均匀,得到MESG底物溶液。 注意:250 µl足够一块板。

2.2向小瓶嘌呤核苷磷酸化酶(PNP;组分C)中加入100 µL ddH2O。 涡旋混合均匀,得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液。

2.3将全部体积的MESG底物溶液和嘌呤核苷磷酸化酶溶液添加到分析缓冲液(组分A)的瓶子中,并充分混合以得到工作溶液。 将工作溶液放在冰上。 注意:此工作溶液在冰上至少可稳定4小时。 不建议将工作溶液冷冻进行其他测定。 为了获得理想的结果,需要紫外线透明的板或比色皿。 由于该测定法对Pi的敏感性很高,因此使用无Pi的实验室器具极为重要。

 

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ADP标准品和测试样品的布局。 SD = ADP标准(SD1-SD7,0.05至30 uM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
PS1 PS1
PS2 PS2
PS3 PS3    
PS4 PS4    
PS5 PS5    
PS6 PS6    
PS7 PS7    

表2.每个孔的试剂组成。

容积 试剂
PS1-PS7 50ul 连续稀释液(0.78至50 µM)
BL 50ul 不含磷酸盐的水或缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,准备磷酸盐标准品(PS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL工作溶液添加到磷酸盐标准液,空白对照和测试样品的每个孔中,以使总测定体积为100 µL /孔。 彻底混合试剂。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.在室温下孵育30分钟。

4.用酶标仪或分光光度计在360 nm处监测吸光度。 注意:对于需要总体积大于100 µL的比色杯分析,在测量吸收之前,应按比例将样品和分析试剂的体积相乘。

 

参考文献

Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: Richelle C Thomas, Paul E Chung, Shan P Modi, John G Hardy, Christine E Schmidt
Journal: European Polymer Journal (2016)

Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization
Authors: Marianne B Ariganello, Sidney Omelon, Fabio Variola, Rima M Wazen, Pierre Moffatt, Antonio Nanci
Journal: Journal of cellular biochemistry (2014): 2089–2102

说明书
PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*.pdf

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT – Free* 货号21612-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT – Free*

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT – Free*

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT - Free*    货号21612 货号 21612 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 Plate 价格 1944
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,腺苷三磷酸(ATP)在细胞能量学,代谢调节和细胞信号传导中起重要作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供快速,简单和均匀的发光检测,用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行测定。 该测定的高灵敏度允许在许多生物系统,环境样品和食物中检测ATP。 该PhosphoWorks ATP检测试剂盒不使用DTT,并且具有长达4小时的稳定发光信号。 它具有稳定的发光,不需要混合或分离,并配制成具有最小的手动操作时间。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒。 

 

适用仪器


发光酶标仪  
推荐孔板: 白色孔板

产品说明书

操作步骤

简要概述

1.用测试化合物(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)制备细胞(样品)
2.加入等体积的ATP工作溶液(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度

 

制备工作溶液

1.将10 mL反应缓冲液(组分C)转移到ATP传感器(组分B)中并充分混合。

2.将20μLATP监测酶(组分A)加入到组分B + C的瓶中并充分混合以制备ATP工作溶液。 注意:避免来自外源生物来源的潜在ATP污染。

有关细胞样品制备的指南(点击查看)

 

样品实验方案

1.运行ATP测定:

1.1用测试化合物处理细胞(或样品),在96孔板中加入10μL10X化合物,或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37℃,5%CO 2培养箱中孵育所需的一段时间,例如24,48或96小时。

1.3向每个孔中加入100μL(96孔板)或25μL(384孔板)的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5用标准发光计监测发光强度。

 

2.生成标准ATP校准曲线:

        如果需要计算样品中ATP的绝对量,则应与上述分析一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品(作为对照)在含有0.1%BSA的PBS缓冲液中制备ATP系列稀释液以测量背景发光。注意:通常ATP浓度范围为0.1 nM至1μM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液加入空板中(对于96孔板为100μL或对于384孔板为25μL)。

2.3加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5用标准发光计记录发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RLU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 我们建议使用在线线性回归计算器,该计算器可在以下位置找到:

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT - Free*    货号21612

图1.使用NOVOstar板读数器(BMG Labtech)在96孔白板上用PhosphoWorks TM发光ATP测定试剂盒* DTT-Free *测量ATP剂量响应。 该试剂盒可在20分钟内检测到(3 pmole /孔)0.03 nM ATP。 积分时间为1秒。 半衰期超过2小时。

 

参考文献

High throughput cell-based assay for identification of glycolate oxidase inhibitors as a potential treatment for Primary Hyperoxaluria Type 1
Authors: Mengqiao Wang, Miao Xu, Yan Long, Sonia Fargue, Noel Southall, Xin Hu, John C McKew, Christopher J Danpure, Wei Zheng
Journal: Scientific Reports (2016)

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
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Journal: Toxicology (2015): 21–31

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
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Loss of histone deacetylase Hdac1 disrupts metabolic processes in intestinal epithelial cells
Authors: Alexis Gonneaud, Naomie Turgeon, Frančois-Michel Boisvert, Frančois Boudreau, Claude Asselin
Journal: FEBS letters (2015): 2776–2783

A neutrophil intrinsic impairment affecting Rab27a and degranulation in cystic fibrosis is corrected by CFTR potentiator therapy
Authors: Kerstin Pohl, Elaine Hayes, Joanne Keenan, Michael Henry, Paula Meleady, Kevin Molloy, Bakr Jundi, David A Bergin, Cormac McCarthy, Oliver J McElvaney
Journal: Blood (2014): 999–1009

Fluorescence lifetime imaging unravels C. trachomatis metabolism and its crosstalk with the host cell
Authors: Márta Szaszák, Philipp Steven, Kensuke Shima, Regina Orzekowsky-Schroder, Gereon Huttmann, Inke R Konig, Werner Solbach, Jan Rupp
Journal: PLoS pathogens (2011): e1002108

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Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2011): 769–776

 

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产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,三磷酸腺苷(ATP)在细胞能量,代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”,以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子,在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒,可通过重组萤火虫荧光素酶(目录号21610和21609)确定ATP的纳摩尔(nM)范围。这些试剂盒需要酶标仪,通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 荧光ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应,产生过氧化氢,该过氧化氢用我们的Amplite Red底物通过分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约0.4 µM ATP,而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大,简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 荧光ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒。

 

适用仪器


发光酶标仪  
推荐孔板: 白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液(50 µL)
2.添加ATP标准液或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)的荧光增加

 

溶液配制

1.制备储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1Amplite 红色底物储备液(200X):
将30 µL DMSO(组分E)加入小瓶AmpliteTM Red Substrate(组分A)中,制成200X Amplite Red Substrate储备液。

1.2ATP标准溶液(10mM):
将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液(组分D)的小瓶中,制成10 mM ATP标准溶液。

 

2.制备标准溶液

ATP标准

将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中,以生成100 µM ATP标准溶液(AS7)。 取100 µM ATP标准溶液(AS7)并进行1:3连续稀释,以使用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液(AS6-AS1)。

 

3.制备工作溶液

3.1将5毫升测定缓冲液(组分C)添加到酶混合瓶(组分B)中,并充分混合。

3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 µL 200X AmpliteTM Red Substrate储备液,充分混合以制成APT工作溶液。

 

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品(AS1-AS7,0.14至100 µM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.14至100 µM)
BL 50ul 1 X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局,准备ATP标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。

2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液,空白对照和测试样品的每个孔中,以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)处监视荧光增加。

 

参考文献

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参考文献

产品名称 货号
PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒 Cat#21617
PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *温和发光* Cat#21609
PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光* Cat#21610

说明书
PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bright Glow *.pdf