Cell Meter 活细胞ATP检测试剂盒

	货号	23015	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4224
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量、代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”，以驱动活细胞中的许多生物过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子，在DNA和RNA合成中起着重要作用。它位于发生细胞呼吸的线粒体中。 ATP水平可用于测量细胞增殖和细胞周期动态。 Cell Meter 活细胞ATP检测试剂盒使研究人员可以使用检测细胞ATP的渗透型红色荧光成像探针ATP Red 来检测活细胞中的ATP水平。 ATP Red 旨在检测活细胞线粒体中的ATP浓度。该探针与AMP，ADP，CMP，CDP，CTP，UMP，UDP，UTP，GMP，GDP或GTP的交叉反应性最小。

产品说明书

实验方案

概述

在生长培养基中准备细胞
将细胞与ATP Red 工作溶液在37°C下孵育15-30分钟
去掉ATP Red 工作溶液
使用Cy3 / TRITC滤波片组的荧光显微镜进行检测

准备细胞

对于贴壁细胞
在96孔板的生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 90μL平板培养细胞过夜，而对于384孔板则以2,500至10,000个细胞/孔/ 20μL平板培养过夜。

对于悬浮细胞
离心培养液中的细胞，然后将细胞沉淀以50,000-100,000细胞/孔/ 90 µL的浓度悬浮于96孔聚D赖氨酸平板中，或10,000-25,000细胞/孔/ 20 / L以获得384孔中的悬浮液 聚-D赖氨酸板。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。
注意：应该对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。

ATP Red 储备溶液配制（500X）
将50 µL DMSO（组分C）添加到小瓶ATP Red （组分A）中，制成500X储备液。
注意：50 µL的500X ATP Red 储备溶液足以容纳一个96孔板。 可以将未使用的ATP Red 储备溶液分装，并在≤-20°C下以较小的等分试样存储。 避光，并避免重复的冻融循环。

ATP Red 工作溶液配制
将5 µL 500X储备溶液（组分A）添加到1 mL细胞培养基中，并充分混合。
注意：ATP Red 探针与我们检测的大多数细胞系的细胞培养基兼容。 可以根据特定的细胞类型修改染色条件。

操作步骤

1.在生长培养基中准备细胞。
2.在细胞板中加入等体积的[100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）]。
注意：ATP Red 的最佳浓度因具体应用而异。
3.在避光的条件下，将细胞在37°C下孵育15-30分钟。
4.从每个孔中除去工作溶液。 用测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次。
5.使用带有Cy3 / TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图示

图1. HeLa细胞与ATP Red 和MitoLite Green FM共染色的荧光图像在96孔黑色透明底板。 HeLa细胞用ATP Red 染色15分钟，然后与100 nM MitoLite Green FM（Cat＃22695）孵育30分钟。 成像前用测定缓冲液洗涤两次。 ATP Red 和MitoLite ATP Red 信号重叠良好。使用带有Cy3 / TRITC和FITC滤光片的荧光显微镜对细胞成像。

参考文献

Metabolic co-dependence of the oocyte and cumulus cells: essential role in determining oocyte developmental competence.
Authors: Richani, Dulama and Dunning, Kylie R and Thompson, Jeremy G and Gilchrist, Robert B
Journal: Human reproduction update (2021): 27-47

Mitochondrial C3a Receptor Activation in Oxidatively Stressed Epithelial Cells Reduces Mitochondrial Respiration and Metabolism.
Authors: Ishii, Masaaki and Beeson, Gyda and Beeson, Craig and Rohrer, Bärbel
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Cell-penetrating and mitochondrion-targeting molecules.
Authors: Appiah Kubi, George and Pei, Dehua
Journal: Methods in enzymology (2020): 311-328

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Journal: Journal of the Chinese Medical Association : JCMA (2020): 357-366

Dynamic regulation of subcellular mitochondrial position for localized metabolite levels.
Authors: Alshaabi, Haya and Heininger, Meara and Cunniff, Brian
Journal: Journal of biochemistry (2020): 109-117

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Authors: Ren, Tian-Bing and Wen, Si-Yu and Wang, Lu and Lu, Peng and Xiong, Bin and Yuan, Lin and Zhang, Xiao-Bing
Journal: Analytical chemistry (2020): 4681-4688

Heat stress induces apoptosis through disruption of dynamic mitochondrial networks in dairy cow mammary epithelial cells.
Authors: Chen, Kun-Lin and Wang, Hui-Li and Jiang, Lin-Zheng and Qian, Yong and Yang, Cai-Xia and Chang, Wei-Wei and Zhong, Ji-Feng and Xing, Guang-Dong
Journal: In vitro cellular & developmental biology. Animal (2020): 322-331

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Authors: Hiraoka, Haruka and Nakano, Tadashi and Kuwana, Satoshi and Fukuzawa, Masashi and Hirano, Yasuhiro and Ueda, Masahiro and Haraguchi, Tokuko and Hiraoka, Yasushi
Journal: Genes to cells : devoted to molecular & cellular mechanisms (2020): 312-326

Measurement of ATP concentrations in mitochondria of living cells using luminescence and fluorescence approaches.
Authors: Morciano, Giampaolo and Imamura, Hiromi and Patergnani, Simone and Pedriali, Gaia and Giorgi, Carlotta and Pinton, Paolo
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Authors: Guo, Yusi and Chi, Xiaopei and Wang, Yifan and Heng, Boon Chin and Wei, Yan and Zhang, Xuehui and Zhao, Han and Yin, Ying and Deng, Xuliang
Journal: Stem cell research & therapy (2020): 245

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒*稳定发光*

	货号	21608	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10 Plates	价格	12588
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒*稳定发光*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量生成，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供了一种快速，简单且均一的发光检测方法，用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 该测定可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行。 此测定法的高灵敏度允许在许多生物系统，环境样品和食品中检测ATP。 该PhosphoWorks ATP检测试剂盒具有长达4小时的稳定发光信号。 它具有稳定的发光，无需混合或分离，并且配方具有最小的动手时间。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒*稳定发光*。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）制备细胞（样品）
2.加入等体积的ATP工作溶液（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测发光强度

溶液配制

工作溶液配制

1.将整个小瓶10 mL反应缓冲液（组分C）转移到ATP传感器（组分B）中并充分混合。

2.将20 µL ATP监测酶（组分A）添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成ATP工作溶液。 注意：避免来自外源性生物来源的潜在ATP污染。

点击查看细胞制备方案

样品操作

1.运行ATP分析：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL的10X化合物（用于96孔板）或5 µL的5X化合物（用于384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育所需的时间，例如24、48或96小时。

1.3向每个孔中添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5使用标准发光计监控发光强度。

2.生成标准ATP校准曲线：

如果需要计算样品中ATP的绝对量，则应与上述测定法一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）来测量背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中稀释一系列ATP。注意：通常，ATP浓度从1 nM到10 µM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液添加到一个空板中（对于96孔板是100 µL，对于384孔板是25 µL）。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5使用标准发光计监控发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

参考文献

High throughput cell-based assay for identification of glycolate oxidase inhibitors as a potential treatment for Primary Hyperoxaluria Type 1
Authors: Mengqiao Wang, Miao Xu, Yan Long, Sonia Fargue, Noel Southall, Xin Hu, John C McKew, Christopher J Danpure, Wei Zheng
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Journal: Toxicology (2015): 21–31

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Endocrine-related cancer (2015): 577–591

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Journal: Oncotarget (2015): 6915

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Journal: PLoS pathogens (2011): e1002108

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	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量生成，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供了一种快速，简单且均一的发光检测方法，用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 该测定可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行。 此测定法的高灵敏度允许在许多生物系统，环境样品和食品中检测ATP。 该PhosphoWorks ATP分析试剂盒每孔可检测低至10个细胞。 它具有稳定的发光，无需混合或分离，并且配方具有最小的动手时间。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光*。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）制备细胞（样品）
2.加入等体积的ATP工作溶液（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监控发光强度

溶液配制

工作溶液配制

1.将全部反应缓冲液（组分C，10 mL）转移到ATP传感器（组分B）中，并充分混合。

2.将20 µL ATP监测酶（组分A）添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成ATP工作溶液。 注意：避免来自外源性生物来源的潜在ATP污染。

点击查看细胞制备方案

样品操作

1.运行ATP分析：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL的10X化合物（用于96孔板）或5 µL的5X化合物（用于384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育所需的时间，例如24、48或96小时。

1.3向每个孔中添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5使用标准发光计监控发光强度。

2.生成标准ATP校准曲线：

如果需要计算样品中ATP的绝对量，则应与上述测定法一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）来测量背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中稀释一系列ATP。注意：通常，ATP浓度从1 nM到10 µM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液添加到一个空板中（对于96孔板是100 µL，对于384孔板是25 µL）。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5使用标准发光计监控发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

参考文献

Hepatitis B Surface Antigen Activates Unfolded Protein Response in Forming Ground Glass Hepatocytes of Chronic Hepatitis B
Authors: Yao Li, Yuchen Xia, Xiaoming Cheng, David E Kleiner, Stephen M Hewitt, Julia Sproch, Tong Li, Hui Zhuang, T Jake Liang
Journal: Viruses (2019): 386

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PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”，以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子，在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒，可通过重组萤火虫荧光素酶（目录号21610和21609）确定ATP的纳摩尔（nM）范围。这些试剂盒需要酶标仪，通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 荧光ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应，产生过氧化氢，该过氧化氢用我们的Amplite Red底物通过分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约0.4 µM ATP，而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大，简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 荧光ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液（50 µL）
2.添加ATP标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

溶液配制

1.制备储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1Amplite 红色底物储备液（200X）：
将30 µL DMSO（组分E）加入小瓶Amplite Red Substrate（组分A）中，制成200X Amplite Red Substrate储备液。

1.2ATP标准溶液（10mM）：
将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液（组分D）的小瓶中，制成10 mM ATP标准溶液。

2.制备标准溶液

ATP标准

将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM ATP标准溶液（AS7）。 取100 µM ATP标准溶液（AS7）并进行1：3连续稀释，以使用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液（AS6-AS1）。

3.制备工作溶液

3.1将5毫升测定缓冲液（组分C）添加到酶混合瓶（组分B）中，并充分混合。

3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 µL 200X AmpliteTM Red Substrate储备液，充分混合以制成APT工作溶液。

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品（AS1-AS7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备ATP标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光增加。

参考文献

ATP-based cell viability assay is superior to trypan blue exclusion and XTT assay in measuring cytotoxicity of anticancer drugs Taxol and Imatinib, and proteasome inhibitor MG-132 on human hepatoma cell line HepG2
Authors: E. Nowak
Journal: Clin Hemorheol Microcirc (2018): 327-336

High-content image analysis (HCIA) assay has the highest correlation with direct counting cell suspension compared to the ATP, WST-8 and Alamar blue assays for measurement of cytotoxicity
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Journal: Toxicology (2015): 21–31

Combination of immunoprecipitation (IP)-ATP_Glo kinase assay and melanogenesis for the assessment of potent and safe PAK1-blockers in cell culture
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Journal: Drug Discov Ther (2015): 289-95

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