Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光 货号22844-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光    货号22844 货号 22844 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 50 Tests 价格 3924
Ex (nm) 549 Em (nm) 648
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞凋亡的试剂盒,DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口,该缺口可通过TdT进行鉴定,TdT是一种酶,该酶催化添加标记物的dUTP的添加。现有的所有TUNEL分析均包含剧毒的椰油酸钠,这可能会诱导细胞凋亡并降低DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter™TUNEL细胞凋亡测定试剂盒使用了不含甲藻酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于将我们独特的专有荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化,可在不使用抗体的情况下直接检测分离的或附着的细胞中的细胞凋亡。该试剂盒可提供所有必需成分,并具有优化的测定方案。适用于荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 620/20nm滤波片
通道: PE-Cy5通道
荧光显微镜  
激发: TRITC滤波片
发射: TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 550nm滤波片
发射: 590-650nm滤波片
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物准备细胞。
  2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
  3. 洗涤细胞。
  4. 用4%甲醛(可选)固定细胞。
  5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm(截止= 515 nm)处的荧光强度。

 

溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green(组分A)添加到50μL的反应缓冲液(组分B)中,使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意:应单独评估每个细胞系,以确定最佳细胞密度。

 

实验步骤

1.根据您的特定协议,将细胞培养至最佳密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞,我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔,对于非贴壁细胞,建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时,在每种标记条件下,用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意:我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时,以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色:

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液,并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液(组分B)。
2.6使用Ex / Em = 550/590-650 nm(Cut off= 570 nm)的荧光酶标仪,带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选:从步骤5中移出反应缓冲液,并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次,并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 550/590-650nm(Cut off= 570 nm)的荧光酶标仪,带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选:用1X Hoechst(组分C)在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核,以进行图像分析

 

参考文献

Vaccarin alleviates hypertension and nephropathy in renovascular hypertensive rats
Authors: Cai, Weiwei and Zhang, Zhenpeng and Huang, Yiqi and Sun, Haijian and Qiu, Liying
Journal: Experimental and Therapeutic Medicine (2018): 924–932

CO-releasing molecules-2 attenuates ox-LDL-induced injury in HUVECs by ameliorating mitochondrial function and inhibiting Wnt/β-catenin pathway
Authors: Sun, Hai-Jian and Xu, Dong-Yan and Sun, Yi-Xin and Xue, Tong and Zhang, Chen-Xing and Zhang, Zhi-Xuan and Lin, Wei and Li, Ke-Xue
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2017)

Salusin-β mediates high glucose-induced endothelial injury via disruption of AMPK signaling pathway
Authors: Zhu, Xuexue and Zhou, Yuetao and Cai, Weiwei and Sun, Haijian and Qiu, Liying
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2017)

Vaccarin protects human microvascular endothelial cells from apoptosis via attenuation of HDAC1 and oxidative stress
Authors: Zhu, Xuexue and Lei, Yueyue and Tan, Fanggen and Gong, Leilei and Gong, Haifeng and Yang, Wei and Chen, Ting and Zhang, Zhixuan and Cai, Weiwei and Hou, Bao and others
Journal: European Journal of Pharmacology (2017)

Axl is required for TGF-β2-induced dormancy of prostate cancer cells in the bone marrow
Authors: Yumoto, Kenji and Eber, Matthew R and Wang, Jingcheng and Cackowski, Frank C and Decker, Ann M and Lee, Eunsohl and Nobre, Ana Rita and Aguirre-Ghiso, Julio A and Jung, Younghun and Taichman, Russell S
Journal: Scientific Reports (2016)

Growth Arrest-Specific 6 (GAS6) Promotes Prostate Cancer Survival by G1 Arrest/S Phase Delay and Inhibition of Apoptotic Pathway During Chemotherapy in Bone Marrow
Authors: Lee, Eunsohl and Decker, Ann M and Cackowski, Frank C and Kana, Lulia A and Yumoto, Kenji and Jung, Younghun and Wang, Jingcheng and Buttitta, Laura and Morgan, Todd M and Taichman, Russell S
Journal: Journal of cellular biochemistry (2016)

RFX1–dependent activation of SHP-1 induces autophagy by a novel obatoclax derivative in hepatocellular carcinoma cells
Authors: Su, Jung-Chen and Tseng, Ping-Hui and Hsu, Cheng-Yi and Tai, Wei-Tien and Huang, Jui-Wen and Ko, Ching-Huai and Lin, Mai-Wei and Liu, Chun-Yu and Chen, Kuen-Feng and Shiau, Chung-Wai
Journal: Oncotarget (2014): 4909

In situ detection of apoptosis by the TUNEL assay: an overview of techniques
Authors: Loo DT.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 3

Testicular apoptosis after dietary zinc deficiency: ultrastructural and TUNEL studies
Authors: Kumari D, Nair N, Bedwal RS.
Journal: Syst Biol Reprod Med (2011): 233

In situ localization of apoptosis using TUNEL
Authors: Hewitson TD, Darby IA.
Journal: Methods Mol Biol (2010): 161

 

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Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光 Cat#22849
Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 红色荧光,适合微孔板检测 Cat#22792
Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 绿色荧光,适合微孔板检测 Cat#22791

说明书
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Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光 货号22849-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光     货号22849 货号 22849 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 50 Tests 价格 3924
Ex (nm) 498 Em (nm) 522
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可以通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口,该缺口可通过TdT进行鉴定,TdT是一种酶,该酶催化添加标记物的dUTP。现有的所有TUNEL分析均包含剧毒的甲胂酸钠,这可能会诱导细胞凋亡并降低DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒使用了不含甲胂酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于将我们专有的荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化,可直接检测分离的或贴壁细胞中的细胞凋亡,而无需使用任何抗体。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。适用于荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪。在流行的FITC通道上可以轻松检测到其信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 530/30nm滤波片
通道: FITC滤波片
荧光显微镜  
激发: FITC滤波片
发射: FITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物准备细胞。
  2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
  3. 洗涤细胞。
  4. 用4%甲醛(可选)固定细胞。
  5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm(截止= 515 nm)处的荧光强度。

 

溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green(组分A)添加到50μL的反应缓冲液(组分B)中,使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意:应单独评估每个细胞系,以确定最佳细胞密度。

 

实验步骤

1.根据您的特定协议,将细胞培养至最佳密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞,我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔,对于非贴壁细胞,建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时,在每种标记条件下,用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意:我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时,以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色:

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液,并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液(组分B)。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选:从步骤5中移出反应缓冲液,并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次,并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选:用1X Hoechst(组分C)在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核,以进行图像分析

 

参考文献

Vaccarin alleviates hypertension and nephropathy in renovascular hypertensive rats
Authors: Cai, Weiwei and Zhang, Zhenpeng and Huang, Yiqi and Sun, Haijian and Qiu, Liying
Journal: Experimental and Therapeutic Medicine (2018): 924–932

CO-releasing molecules-2 attenuates ox-LDL-induced injury in HUVECs by ameliorating mitochondrial function and inhibiting Wnt/β-catenin pathway
Authors: Sun, Hai-Jian and Xu, Dong-Yan and Sun, Yi-Xin and Xue, Tong and Zhang, Chen-Xing and Zhang, Zhi-Xuan and Lin, Wei and Li, Ke-Xue
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2017)

Salusin-β mediates high glucose-induced endothelial injury via disruption of AMPK signaling pathway
Authors: Zhu, Xuexue and Zhou, Yuetao and Cai, Weiwei and Sun, Haijian and Qiu, Liying
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2017)

Vaccarin protects human microvascular endothelial cells from apoptosis via attenuation of HDAC1 and oxidative stress
Authors: Zhu, Xuexue and Lei, Yueyue and Tan, Fanggen and Gong, Leilei and Gong, Haifeng and Yang, Wei and Chen, Ting and Zhang, Zhixuan and Cai, Weiwei and Hou, Bao and others
Journal: European Journal of Pharmacology (2017)

Axl is required for TGF-β2-induced dormancy of prostate cancer cells in the bone marrow
Authors: Yumoto, Kenji and Eber, Matthew R and Wang, Jingcheng and Cackowski, Frank C and Decker, Ann M and Lee, Eunsohl and Nobre, Ana Rita and Aguirre-Ghiso, Julio A and Jung, Younghun and Taichman, Russell S
Journal: Scientific Reports (2016)

Growth Arrest-Specific 6 (GAS6) Promotes Prostate Cancer Survival by G1 Arrest/S Phase Delay and Inhibition of Apoptotic Pathway During Chemotherapy in Bone Marrow
Authors: Lee, Eunsohl and Decker, Ann M and Cackowski, Frank C and Kana, Lulia A and Yumoto, Kenji and Jung, Younghun and Wang, Jingcheng and Buttitta, Laura and Morgan, Todd M and Taichman, Russell S
Journal: Journal of cellular biochemistry (2016)

RFX1–dependent activation of SHP-1 induces autophagy by a novel obatoclax derivative in hepatocellular carcinoma cells
Authors: Su, Jung-Chen and Tseng, Ping-Hui and Hsu, Cheng-Yi and Tai, Wei-Tien and Huang, Jui-Wen and Ko, Ching-Huai and Lin, Mai-Wei and Liu, Chun-Yu and Chen, Kuen-Feng and Shiau, Chung-Wai
Journal: Oncotarget (2014): 4909

In situ detection of apoptosis by the TUNEL assay: an overview of techniques
Authors: Loo DT.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 3

Testicular apoptosis after dietary zinc deficiency: ultrastructural and TUNEL studies
Authors: Kumari D, Nair N, Bedwal RS.
Journal: Syst Biol Reprod Med (2011): 233

In situ localization of apoptosis using TUNEL
Authors: Hewitson TD, Darby IA.
Journal: Methods Mol Biol (2010): 161

说明书
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Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光* 货号22855-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*    货号22855 货号 22855 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 4992
Ex (nm) 649 Em (nm) 664
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒是一种强大的工具,可方便地检测由DNA片段化引起的细胞凋亡。该测定是非放射性且快速的。TUNEL分析使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)催化TF5-dUTP在片段DNA的游离3′-羟基末端的掺入。通过荧光显微镜(Cy5滤光片组)或用633或640 nm激光和660/20 nm滤光片(APC通道)进行流式细胞术分析所得的TF5标记的DNA。它的红色发射可以方便地与GFP标记的靶标多路复用。直接掺入荧光TF5标记的核苷酸可明显减少检测步骤。该试剂盒经过优化,可检测固定细胞和福尔马林固定,石蜡包埋的组织切片中的凋亡。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 633/640nm激光
发射: 660/20nm
通道: APC通道
荧光显微镜  
激发: Cy5滤波片组
发射: Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

 

产品说明书

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4%甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70%冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用带有Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

 

工作溶液配制

TdT染色液

对于一项测试,混合以下试剂以使总体积为51 µL;
45 µL TdT反应缓冲液(组分D)
5 µL CoCl2(组分C)
0.5 µL TF5-dUTP(组分B)
0.5 µL TdT酶(组分A)。
注意:TdT染色溶液应立即使用。

 

操作步骤

细胞染色方案

以下方案可用作参考,实际情况应根据需要进行调整。

  1. 根据需要处理样品。
  2. 用您选择的缓冲液(例如含Ca+2和Mg+2的PBS)洗涤样品。
  3. 通过在PBS中加入100 µL 4%多聚甲醛固定样品,并在冰上孵育30分钟。
  4. 除去固定液并用PBS洗涤样品。
  5. 向样品中加入100 µL 70%的冰冷乙醇,并在冰上孵育60分钟。
    注意:样品在使用前可以在-20°C下保存几天。
  6. 除去酒精并用PBS洗涤细胞。
    注意:对于阳性对照,将固定样品与2-5 µg / mL DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  7. 向样品中加入50µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  8. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  9. 将样品重悬于PBS中,并使用流式细胞仪使用660/20 nm滤光片(APC通道)或带有Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

组织染色方案

以下方案可用作参考,实际应根据需要进行调整。


去石蜡和水化

  1. 通过将载玻片在Coplin广口瓶中在室温下浸入新鲜的二甲苯中5分钟,从而对组织切片(附着在载玻片上)进行脱蜡。再重复一次。(共2次洗涤)
  2. 将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100%乙醇中5分钟,以洗涤样品。
  3. 通过在室温下将载玻片浸入各种浓度的酒精(100、95、85、70、50%)中,分别在室温下浸泡5分钟,从而对样品进行水化处理。
  4. 在室温下将载玻片浸入0.85%NaCl中5分钟,以洗涤样品。
  5. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 


固定

  1. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  2. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤)
  3. 除去液体,然后将载玻片放在平坦的地方。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。(添加至足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。)
  4. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。
  5. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  6. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 


染色

  1. 可选:对于阳性对照,将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca+2和Mg+2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse,并用PBS彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  2. 向样品中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  3. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  4. 加入含DAPI的封固剂(#20005),并用带Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

图示

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*    货号22855

图1.用   HeLa细胞进行TUNEL分析的荧光图像。 固定HeLa细胞,并在37°C下分别使用和不使用DNAse处理60分钟。然后将细胞用Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒(Cat#22855)染色。DNA链断裂在DNAse处理的细胞中表现出强烈的荧光染色。使用Cy5滤光片组在荧光显微镜下检测信号。  

 

参考文献

A Novel Theranostic Combination of Near-infrared Fluorescence Imaging and Laser Irradiation Targeting c-KIT for Gastrointestinal Stromal Tumors.
Authors: Fujimoto, Shota and Muguruma, Naoki and Okamoto, Koichi and Kurihara, Takeshi and Sato, Yasushi and Miyamoto, Yoshihiko and Kitamura, Shinji and Miyamoto, Hiroshi and Taguchi, Takahiro and Tsuneyama, Koichi and Takayama, Tetsuji
Journal: Theranostics (2018): 2313-2328

Multicomponent Synthesis of Some Molecular Hybrid Containing Thiazole Pyrazole as Apoptosis Inducer.
Authors: Kumar, Parvin and Duhan, Meenakshi and Kadyan, Kulbir and Bhardwaj, Jitender Kumar and Saraf, Priyanka and Mittal, Meenu
Journal: Drug research (2018): 72-79

[Salvianolate protects H9c2 cells from hypoxia/reoxygenation injury-induced apoptosis by attenuating mitochondrial DNA oxidative damage].
Authors: Yue, R C and Yang, X L and Zhang, R Y and Liu, S and Liu, J and Zeng, J and Liang, H and Wang, W and Hu, H X and Zeng, C Y
Journal: Zhonghua xin xue guan bing za zhi (2017): 57-63

Caspase 3 as a therapeutic target for regulation of intervertebral disc degeneration in rabbits.
Authors: Sudo, Hideki and Minami, Akio
Journal: Arthritis and rheumatism (2011): 1648-57

Induction of apoptosis and inhibition of PI3K/Akt pathway in PC-3 and LNCaP prostate cancer cells by ethanolic neem leaf extract.
Authors: Gunadharini, Dharmalingam N and Elumalai, Perumal and Arunkumar, Ramachandran and Senthilkumar, Kalimuthu and Arunakaran, Jagadeesan
Journal: Journal of ethnopharmacology (2011): 644-50

[Effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on human gastric cancer xenografts in nude mice in vivo].
Authors: Zhou, Guang-jun and Huang, Zong-hai and Yu, Jin-long and Li, Zhou and Ding, Lian-shu
Journal: Zhonghua wei chang wai ke za zhi = Chinese journal of gastrointestinal surgery (2008): 580-3

[Effect of phenylhexyl isothiocyanate on inducing apoptosis of multiple myeloma cells in vitro].
Authors: Lu, Quan-Yi and Wang, Zhao and Liu, De-Long
Journal: Zhongguo shi yan xue ye xue za zhi (2008): 89-92

[Effect of qihong capsule in inhibiting cell apoptosis induced by Coxsackie virus B].
Authors: Song, Xiao-dong and Wang, Lun and Ji, Bo
Journal: Zhongguo Zhong xi yi jie he za zhi Zhongguo Zhongxiyi jiehe zazhi = Chinese journal of integrated traditional and Western medicine (2005): 511-5

Dual excitation multi- fluorescence flow cytometry for detailed analyses of viability and apoptotic cell transition.
Authors: Mazzini, G and Ferrari, C and Erba, E
Journal: European journal of histochemistry : EJH (2003): 289-98

Co-localization of active caspase-3 and DNA fragmentation (TUNEL) in normal and hyperthermia-induced abnormal mouse development.
Authors: Mirkes, P E and Little, S A and Umpierre, C C
Journal: Teratology (2001): 134-43

说明书
Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*.pdf

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光* 货号22857-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*    货号22857 货号 22857 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 4992
Ex (nm) 411 Em (nm) 472
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒是一种强大的工具,可方便地检测由DNA片段化引起的细胞凋亡。该测定是非放射性且快速的。TUNEL分析使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)催化DEAC-dUTP在片段DNA的游离3′-羟基末端的掺入。通过荧光显微镜(AMC滤波片组)分析所得的DEAC标记的DNA。它的蓝色激发光可以方便地与GFP标记的靶标多路复用。荧光DEAC标记的核苷酸的直接掺入可明显减少检测步骤。该试剂盒经过优化,可检测固定细胞和福尔马林固定,石蜡包埋的组织切片中的凋亡。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405nm激光
发射: 525/50nm
通道: Pacific Orange通道
荧光显微镜  
激发: 紫色滤波片组
发射: 紫色滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

 

产品说明书

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4%甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70%冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用带有Violet滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

 

工作溶液配制

TdT染色液

对于一项测试,混合以下试剂以使总体积为51 µL;
45 µL TdT反应缓冲液(组分D)
5 µL CoCl2(组分C)
0.5 µL TF5-dUTP(组分B)
0.5 µL TdT酶(组分A)。
注意:TdT染色溶液应立即使用。

 

操作步骤

细胞染色方案

以下方案可用作参考,实际情况应根据需要进行调整。

  1. 根据需要处理样品。
  2. 用您选择的缓冲液(例如含Ca +2和Mg +2的 PBS)洗涤样品。
  3. 通过在PBS中加入100 µL 4%多聚甲醛固定样品,并在冰上孵育30分钟。
  4. 除去固定液并用PBS洗涤样品。
  5. 向样品中加入100 µL 70%的冰冷乙醇,并在冰上孵育60分钟。
    注意:样品在使用前可以在-20°C下保存几天。
  6. 除去酒精并用PBS洗涤细胞。
    注意:对于阳性对照,将固定样品与2-5 µg / mL DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  7. 向样品中加入50µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  8. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  9. 将样品重悬于PBS中,并使用流式细胞仪使用525/50 nm滤光片(Pacific Orange通道)或带有紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

组织染色方案

以下方案可用作参考,实际应根据需要进行调整。
去石蜡和水化

  1. 通过将载玻片在Coplin广口瓶中在室温下浸入新鲜的二甲苯中5分钟,从而对组织切片(附着在载玻片上)进行脱蜡。再重复一次。(共2次洗涤)
  2. 将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100%乙醇中5分钟,以洗涤样品。
  3. 通过在室温下将载玻片浸入各种浓度的酒精(100、95、85、70、50%)中,分别在室温下浸泡5分钟,从而对样品进行水化处理。
  4. 在室温下将载玻片浸入0.85%NaCl中5分钟,以洗涤样品。
  5. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 


固定

  1. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  2. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤)
  3. 除去液体,然后将载玻片放在平坦的地方。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。(添加至足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。)
  4. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。
  5. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  6. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 


染色

  1. 可选:对于阳性对照,将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse,并用PBS彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  2. 向样品中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  3. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  4. 加入封固剂,并用带紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

图示

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*    货号22857

图1.用   HeLa细胞进行TUNEL分析的荧光图像。 固定HeLa细胞,并在37°C下分别使用和不使用DNAse处理60分钟。然后将细胞用Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒(Cat#22855)染色。DNA链断裂在DNAse处理的细胞中表现出强烈的荧光染色。使用紫色滤光片组在荧光显微镜下检测信号。  

 

参考文献

A Novel Theranostic Combination of Near-infrared Fluorescence Imaging and Laser Irradiation Targeting c-KIT for Gastrointestinal Stromal Tumors.
Authors: Fujimoto, Shota and Muguruma, Naoki and Okamoto, Koichi and Kurihara, Takeshi and Sato, Yasushi and Miyamoto, Yoshihiko and Kitamura, Shinji and Miyamoto, Hiroshi and Taguchi, Takahiro and Tsuneyama, Koichi and Takayama, Tetsuji
Journal: Theranostics (2018): 2313-2328

Multicomponent Synthesis of Some Molecular Hybrid Containing Thiazole Pyrazole as Apoptosis Inducer.
Authors: Kumar, Parvin and Duhan, Meenakshi and Kadyan, Kulbir and Bhardwaj, Jitender Kumar and Saraf, Priyanka and Mittal, Meenu
Journal: Drug research (2018): 72-79

[Salvianolate protects H9c2 cells from hypoxia/reoxygenation injury-induced apoptosis by attenuating mitochondrial DNA oxidative damage].
Authors: Yue, R C and Yang, X L and Zhang, R Y and Liu, S and Liu, J and Zeng, J and Liang, H and Wang, W and Hu, H X and Zeng, C Y
Journal: Zhonghua xin xue guan bing za zhi (2017): 57-63

Caspase 3 as a therapeutic target for regulation of intervertebral disc degeneration in rabbits.
Authors: Sudo, Hideki and Minami, Akio
Journal: Arthritis and rheumatism (2011): 1648-57

Induction of apoptosis and inhibition of PI3K/Akt pathway in PC-3 and LNCaP prostate cancer cells by ethanolic neem leaf extract.
Authors: Gunadharini, Dharmalingam N and Elumalai, Perumal and Arunkumar, Ramachandran and Senthilkumar, Kalimuthu and Arunakaran, Jagadeesan
Journal: Journal of ethnopharmacology (2011): 644-50

[Effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on human gastric cancer xenografts in nude mice in vivo].
Authors: Zhou, Guang-jun and Huang, Zong-hai and Yu, Jin-long and Li, Zhou and Ding, Lian-shu
Journal: Zhonghua wei chang wai ke za zhi = Chinese journal of gastrointestinal surgery (2008): 580-3

[Effect of phenylhexyl isothiocyanate on inducing apoptosis of multiple myeloma cells in vitro].
Authors: Lu, Quan-Yi and Wang, Zhao and Liu, De-Long
Journal: Zhongguo shi yan xue ye xue za zhi (2008): 89-92

[Effect of qihong capsule in inhibiting cell apoptosis induced by Coxsackie virus B].
Authors: Song, Xiao-dong and Wang, Lun and Ji, Bo
Journal: Zhongguo Zhong xi yi jie he za zhi Zhongguo Zhongxiyi jiehe zazhi = Chinese journal of integrated traditional and Western medicine (2005): 511-5

Dual excitation multi- fluorescence flow cytometry for detailed analyses of viability and apoptotic cell transition.
Authors: Mazzini, G and Ferrari, C and Erba, E
Journal: European journal of histochemistry : EJH (2003): 289-98

Co-localization of active caspase-3 and DNA fragmentation (TUNEL) in normal and hyperthermia-induced abnormal mouse development.
Authors: Mirkes, P E and Little, S A and Umpierre, C C
Journal: Teratology (2001): 134-43

说明书
Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*.pdf

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光* 货号22853-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*    货号22853 货号 22853 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 4992
Ex (nm) 544 Em (nm) 570
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒是一个强大的工具,可方便地检测由DNA片段化引起的细胞凋亡。该测定是非放射性且快速的。TUNEL测定法使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)催化TMR-dUTP在片段DNA的游离3′-羟基末端的掺入。通过荧光显微镜(Cy3或TRITC滤光片组)分析所得的TMR标记的DNA。它的红色发射可以方便地与GFP标记的靶标多路复用。荧光TMR标记的核苷酸的直接掺入可显着减少测试步骤。该试剂盒经过优化,可检测固定细胞和福尔马林固定,石蜡包埋的组织切片中的凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的细胞凋亡检测试剂/试剂盒。 

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 575/26nm滤波片
通道: PE通道
荧光显微镜  
激发: Cy3滤波片组
发射: Cy3滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

 

产品说明书

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4%甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70%冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

 

工作溶液配制方案

TdT染色液

对于1test,混合以下试剂以使总体积为51 µL;
45 µL TdT反应缓冲液(组分D)
5 µL CoCl 2  (组分C)
0.5 µL TF5-dUTP(组分B)
0.5 µL TdT酶(组分A)。
注意:TdT染色溶液应立即使用。

 

操作步骤

  1. 根据需要处理样品。
  2. 用您选择的缓冲液(例如含Ca +2和Mg +2的 PBS)洗涤细胞。
  3. 通过在PBS中加入100 µL 4%多聚甲醛固定细胞,并在冰上孵育30分钟。
  4. 除去固定液并用PBS洗涤细胞。
  5. 向细胞中加入100 µL 70%的冰冷乙醇,并在冰上孵育60分钟。
    注意:在使用前,可将细胞在此步骤中于-20°C存放几天。
  6. 除去酒精并用PBS洗涤细胞。
    注意:对于阳性对照,将固定细胞与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞,然后继续执行其余的操作步骤。
  7. 向细胞中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  8. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤细胞。
  9. 将细胞重悬于PBS中,并使用575/26 nm滤光片(PE通道)通过流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

组织染色方案

去石蜡和水化方案

  1. 通过将载玻片在Coplin广口瓶中在室温下浸入新鲜的二甲苯中5分钟,从而对组织切片(附着在载玻片上)进行脱蜡。再重复一次。(共2次洗涤)
  2. 将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100%乙醇中5分钟,以洗涤样品。
  3. 通过在室温下将载玻片浸入各种浓度的酒精(100%,95%,85%,70%,50%)中,然后分别在室温下浸没5分钟,使样品重新水化。
  4. 在室温下将载玻片浸入0.85%NaCl中5分钟,以洗涤样品。
  5. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 

 

固定方案

  1. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  2. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤)
  3. 除去液体,然后将载玻片放在平坦的表面上。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。添加足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。
  4. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。
  5. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  6. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 

 

染色方案

  1. 可选:对于阳性对照,将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2  和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse,并用PBS彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  2. 向样品中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  3. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  4. 加入含DAPI的封固剂(AAT Bioquest Cat#20005),并用Cy3滤光片组检测荧光强度荧光显微镜。 

 

图示

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*    货号22853

图1. 用 HeLa细胞进行TUNEL分析的荧光图像。固定HeLa细胞,并在37°C下分别使用及不使用DNAse处理60分钟。然后将细胞用Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒染色。DNA链断裂在DNAse处理的细胞中表现出强烈的荧光染色。使用Cy3滤光片组在荧光显微镜下采集信号。

 

 

参考文献

Vitex Rotundifolia Fractions Induced Apoptosis in Human Breast Cancer T-47D Cell Line via Activation of Extrinsic and Intrinsic Pathway.
Authors: Chaudhry, Gul-E-Saba and Jan, Rehmat and Naveed Zafar, Muhammad and Mohammad, Habsah and Muhammad, Tengku Sifzizul Tengku
Journal: Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP (2019): 3555-3562

A mechanism for semaphorin-induced apoptosis: DNA damage of endothelial and myogenic cells in primary cultures from skeletal muscle.
Authors: Hei Yuan, Haynes Shek and Katyal, Sachin and Anderson, Judy E
Journal: Oncotarget (2018): 22618-22630

Damaging legacy: maternal cigarette smoking has long-term consequences for male offspring fertility.
Authors: Sobinoff, A P and Sutherland, J M and Beckett, E L and Stanger, S J and Johnson, R and Jarnicki, A G and McCluskey, A and St John, J C and Hansbro, P M and McLaughlin, E A
Journal: Human reproduction (Oxford, England) (2014): 2719-35

MyD88 mediates the decision to die by apoptosis or necroptosis after UV irradiation.
Authors: Harberts, Erin and Fishelevich, Rita and Liu, Juan and Atamas, Sergei P and Gaspari, Anthony A
Journal: Innate immunity (2014): 529-39

Hepatic transcriptome profiling indicates differential mRNA expression of apoptosis and immune related genes in eelpout (Zoarces viviparus) caught at Göteborg harbor, Sweden.
Authors: Asker, Noomi and Kristiansson, Erik and Albertsson, Eva and Larsson, D G Joakim and Förlin, Lars
Journal: Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2013): 58-67

α-Lipoic acid attenuates light insults to neurones.
Authors: Ji, Dan and Majid, Aman Shah Abdul and Yin, Zheng Qin
Journal: Biological & pharmaceutical bulletin (2013): 1060-7

Phenethyl isothiocyanate (PEITC) inhibits growth of ovarian cancer cells by inducing apoptosis: role of caspase and MAPK activation.
Authors: Satyan, K S and Swamy, Narasimha and Dizon, Don S and Singh, Rakesh and Granai, Cornelius O and Brard, Laurent
Journal: Gynecologic oncology (2006): 261-70

p53 mediates particulate matter-induced alveolar epithelial cell mitochondria-regulated apoptosis.
Authors: Soberanes, Saul and Panduri, Vijayalakshmi and Mutlu, Gökhan M and Ghio, Andrew and Bundinger, G R Scott and Kamp, David W
Journal: American journal of respiratory and critical care medicine (2006): 1229-38

Bile salts inhibit growth and induce apoptosis of human esophageal cancer cell line.
Authors: Zhang, Ru and Gong, Jun and Wang, Hui and Wang, Li
Journal: World journal of gastroenterology (2005): 5109-16

Does apoptosis occur in amyotrophic lateral sclerosis? TUNEL experience from human amyotrophic lateral sclerosis (ALS) tissues.
Authors: Tomik, Barbara and Adamek, Dariusz and Pierzchalski, Piotr and Banares, Steven and Duda, Aleksandra and Partyka, Dorota and Pawlik, Wiesław and Kałuza, Józef and Krajewski, Stan and Szczudlik, Andrzej
Journal: Folia neuropathologica (2005): 75-80

说明书
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