Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光

	货号	15255	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测赖氨酸氧化酶的试剂盒。赖氨酰氧化酶是一种细胞外酶，其催化从胶原蛋白和弹性蛋白前体中的赖氨酸残基形成醛。 这些醛具有高反应性，并与其他赖氨酰氧化酶衍生的醛残基或未修饰的赖氨酸残基发生自发的化学反应。 化学反应导致胶原蛋白和弹性蛋白的交联，这对于稳定胶原纤维和成熟弹性蛋白的完整性和弹性是必需的。 生物样品中赖氨酰氧化酶的活性传统上通过使用放射性同位素标记的胶原蛋白或弹性蛋白底物的氚释放终点测定来评估。

Amplite 荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒提供灵敏的荧光检测，用于检测赖氨酰氧化酶的活性。 它利用专有的LOX底物，在HRP偶联反应中使用我们的Amplite ADHP底物释放过氧化氢。 该方法允许检测亚ng / mL赖氨酰氧化酶，并且比目前可用的测定灵敏得多。 它消除了某些生物样品中发生的干扰，可以很容易地用于检测细胞提取物或溶液中的赖氨酰氧化酶活性。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒。

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产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测定反应混合物（50μL）

添加赖氨酰氧化酶标准品或测试样品（50μL）

在37℃孵育10-30分钟

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备试剂：

注意1：在硫醇如DTT，谷胱甘肽（还原型：GSH）和β-巯基乙醇存在下，Amplite™HRP底物不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在将显着降低测定动态范围。

注意2：某些洗涤剂（如Brij-35，Tween-20和NP40），NADH和NADPH也会干扰检测。

1.1 250X Amplite™HRP底物储备液：将100μLDMSO（组分D）加入到Amplite™HRP底物（组分A）的小瓶中。应及时使用原液; 任何未使用的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环。

1.2 50U / mL辣根过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备测定反应混合物：

根据说明书中的表格制备测定反应混合物并避光。

3.在上清液中进行赖氨酰氧化酶测定：

3.1将50μL测定反应混合物（来自步骤2）加入到赖氨酰氧化酶标准品，空白对照和测试样品（参见步骤2，表3）的每个孔中，以使总赖氨酰氧化酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.2在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

4.对细胞进行赖氨酰氧化酶测定：

Amplite™荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒可用于测量细胞中活性赖氨酰氧化酶的释放。 以下是建议的说明，可根据您的特定研究需求进行修改。

4.1在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要活化细胞。 

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

4.2将50 µL赖氨酰氧化酶工作溶液添加到细胞培养基的每个孔中（来自上一步）和赖氨酰氧化酶标准品的孔中（参见表1）。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL细胞培养基和25μL测定反应混合物。

4.3在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

4.4使用荧光读板仪在Ex / Em = 530至570/590至600 nm（最大Ex / Em = 540/590 nm）下观察荧光增加。

参考文献

Biallelic HEPHL1 variants impair ferroxidase activity and cause an abnormal hair phenotype
Authors: Prashant Sharma, Marie Reichert, Yan Lu, Thomas C Markello, David R Adams, Peter J Steinbach, Brie K Fuqua, Xenia Parisi, Stephen G Kaler, Christopher D Vulpe
Journal: PLoS genetics (2019): e1008143

Lysyl oxidase assists tumor-initiating cells to enhance angiogenesis in hepatocellular carcinoma
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Journal: Journal of Molecular and Cellular Cardiology (2017)

Endothelial Antioxidant-1: a Key Mediator of Copper-dependent Wound Healing in vivo
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Journal: Scientific Reports (2016)

Inhibition of lysyl oxidase by cortisol regeneration in human amnion: Implications for rupture of fetal membranes
Authors: Chao Liu, Chunming Guo, Wangsheng Wang, Ping Zhu, Wenjiao Li, Yabing Mi, Leslie Myatt, Kang Sun
Journal: Endocrinology (2016): 4055–4065

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Authors: Chao Liu, Ping Zhu, Wangsheng Wang, Wenjiao Li, Qun Shu, Zi-Jiang Chen, Leslie Myatt, Kang Sun
Journal: Molecular and cellular endocrinology (2016): 118–127

LOX Fails to Substitute for RANKL in Osteoclastogenesis
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简要概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有最大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过最优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。 应立即使用原液，避光。

2. HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL的HRP标准溶液。

3. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL分析缓冲液（组分C）中加入1μL的20U / mL HRP标准溶液，得到10mU / mL HRP标准溶液（SD7）。 取10 mU / mL HRP标准溶液（SD7）并进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6-SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H₂O₂储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。注意：高水平的HRP（例如，> 100mU / mL终浓度）可能由于Amplite TM Red（至非荧光）的过度氧化而导致荧光信号降低。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 540±10nm，发射= 590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 575nm）监测荧光增加。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Shuaizhang Li, Ruili Huang, Samuel Solomon, Yitong Liu, Bin Zhao, Michael F Santillo, Menghang Xia
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715

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Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒 红色荧光

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简要概述

Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，单胺氧化酶（MAO）属于核黄素含氨氧化酶，它可以催化单氨的氧化。它存在于许多组织包括肝脏，肠粘膜和神经所含线粒体的外膜上。在人体内有两种类型的MAO：MAO-A和MAO-B。MAO-A在摄取的食物中单氨的代谢过程中非常重要。MAOs在神经递质失活过程扮演者主要角色。在抑郁症，精神分裂症，药物滥用，注意力不集中，偏头疼或者性早熟疾病中，都伴随着MAO的功能紊乱。Amplite单胺氧化酶检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测血液样本或者其他生物样本内的单胺氧化酶或者氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的活性。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被酶标仪（576nm）检测。Amplite 单胺氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到10U／ml的单胺氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.MAO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MAO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite TM Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

2. HRP股票解决方案（200X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.血浆胺氧化酶（PAO）标准溶液（20 U / mL）：
将125μL测定缓冲液（组分B）加入等离子体胺氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red原液（250X），25μLHRP储备液（200X）和25μLMAO底物（组分D）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL 单胺氧化酶（MAO）工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中PAO标准品和测试样品的布局。 PAO =血浆胺氧化酶标准品（PAO1-PAO7,1至1000mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将血浆胺氧化酶标准品（PAO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔固体黑色微孔板中。对于384孔板，使用25每孔μL试剂代替50μL。

2.在PAO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMAO工作溶液，使总PAO测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLMAO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

参考文献

An Increase in Plasma Homovanillic Acid with Cocoa Extract Consumption Is Associated with the Alleviation of Depressive Symptoms in Overweight or Obese Adults on an Energy Restricted Diet in a Randomized Controlled Trial
Authors: Idoia Ibero-Baraibar, Aurora Perez-Cornago, Maria J Ramirez, J Alfredo Martínez, M Angeles Zulet
Journal: The Journal of nutrition (2016): 897S–904S

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