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钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐 货号21144-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐

钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐

货号 21144 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 4584
Ex (nm) 493 Em (nm) 515
分子量 957.06 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，Cal-520 在探测细胞内钙离子方面提供了一个卓越的荧光分析工具。 Cal-520 AM是新型的钙离子荧光染料相比现在还在应用的绿色钙离子荧光指示剂(例如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM)在信噪比和细胞内滞留方面有着显著的改进。G蛋白偶联受体或者.钙离子通道可以被 Cal-520 AM 通过细胞膜标记钙离子而预先加载。 Cal 520 AM 一旦进入细胞内，其亲脂基团就会被剪切酶水解成一个带阴性负离子的荧光染料被阻断在细胞内。它与钙离子结合其荧光就会显著的增强。当细胞内的细胞器受到刺激就会释放出钙离子， Cal-520 的荧光信号就会显著的增加。长波长、高灵敏性、大于100倍的荧光信号增强使得 Cal-520 AM成为一个理想的细胞内钙离子测量指示器。高的信噪比和极好的细胞内滞留使得Cal-520 在测评 GPCR 和钙离子通道目标及他们的受体激动剂和拮抗剂的筛选方面相比其他钙离子探针显现更加卓越的优越性。 Cal-520 钠盐或者钾盐是在细胞内水解了的 Cal-520 AM。它选择性的与钙离子结合，它的荧光强度与钙离子浓度正向相关。相比其他 Cal-520 指示器 Cal-520FF 具有最小的钙离子亲和力他用以标记 Kd ~ 10 uM单位的钙离子。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520FF，AM原液。
2.1Cal-520FF ，AM的用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal-520FF ，AM与439.01μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMCal-520FF ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Cal-520FF ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal-520FF TM，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520FF™的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMCal-520FF，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/514 nm运行实验。

 

参考文献

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

Extensive Ca 2+ leak through K4750Q cardiac ryanodine receptors caused by cytosolic and luminal Ca 2+ hypersensitivity
Authors: Akira Uehara, Takashi Murayama, Midori Yasukochi, Michael Fill, Minoru Horie, Toru Okamoto, Yoshiharu Matsuura, Kiyoko Uehara, Takahiro Fujimoto, Takashi Sakurai
Journal: The Journal of general physiology (2017): 199–218

 

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说明书
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钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076 货号 21076 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 891.00 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下，荧光探针显现出光谱响应，这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。 Rhod-FF 与 Ca2+ 结合能力较低，适合于测量 Ca2+浓度从 10 到 200 uM.像它的前体Rhod-2, Rhod-FF在不结合Ca2+时是没有荧光的，在结合Ca3+其产生强烈的绿色荧光。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

 

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

W-5 and quin 2-AM reverse the inhibitory effect of insulin on lipolysis due to dibutyryl cAMP
Authors: Goko H, Matsuoka A.
Journal: Diabetes Res Clin Pract (1999): 101

Calcium chelator Quin-2 prevents crocidolite-induced DNA strand breakage in human white blood cells
Authors: Faux SP, Michelangeli F, Levy LS.
Journal: Mutat Res (1994): 209

Fluorescence lifetime imaging of intracellular calcium in COS cells using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Lederer WJ, Kirby MS, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1994): 7

Possible mechanisms of epinephrine actions in quin-2-loaded platelets refractory to arachidonic acid
Authors: Rao GH, Gerrard JM, Murthy M, White JG.
Journal: Biochem Med Metab Biol (1993): 322

Fluorescence lifetime imaging of calcium using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1992): 131

Involvement of calcium and iron in Quin 2 toxicity to isolated hepatocytes
Authors: Carpenter-Deyo L, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 747

Toxicity to isolated hepatocytes caused by the intracellular calcium indicator, Quin 2
Authors: Carpenter-Deyo L, Duimstra JR, Hedstrom O, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 739

Aspirin, prostaglandin E1 and Quin-2 AM-induced platelet dysfunction: restoration of function by noradrenalin
Authors: Rao GH, White JG.
Journal: Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids (1990): 141

Characterization of indo-1 and quin-2 as spectroscopic probes for Zn2(+)-protein interactions
Authors: Jefferson JR, Hunt JB, Ginsburg A.
Journal: Anal Biochem (1990): 328

Effect of Quin-2 on Ca2+ uptake mediated by Na+i/Ca2+o exchange and 45Ca2+ efflux in rat brain synaptosomes: a requirement for [Ca2+]i
Authors: Blanco P, Martinez-Serrano A, Bogonez E, Satrustegui J.
Journal: Cell Calcium (1990): 25

 

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钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

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Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色* 货号36361-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色* 货号36361 货号 36361 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 1944
Ex (nm) 652 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂盒，钙对所有生物体都是必不可少的，特别是在细胞生理学中，钙离子Ca2+进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素，它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使，也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张，神经冲动传递，肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围（9至10.5mg / dL）内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭，维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。 Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理溶液中检测钙的简单方法。该试剂盒使用我们的Calcium Blue 作为显色钙指示剂。其吸光度随钙结合而变化。 Calcium Blue 在中性pH范围内紧密结合钙，产生钙蓝色 – 钙复合物，在~650 nm处具有强烈的吸收。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法钙离子定量试剂盒。 

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收: 600 or 650nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

准备测试样品和钙标准溶液（50μL）
添加Calcium Blue 试剂（50μL）
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
钙标准溶液（3 mM）：
将10μL标准钙（300mM）（组分C）加入到990μL稀释缓冲液（组分B）中以得到钙标准溶液（3mM）并充分混合。

 

2.钙标准溶液配制

 

操作步骤

 

表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准（CS1-CS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
CS1 CS1 … …
CS2 CS2 … …
CS3 CS3    
CS4 CS4    
CS5 CS5    
CS6 CS6    
CS7 CS7    

 

表2.每个孔的试剂组成

钙标准 空白对照 测试样本
连续稀释：50μL 稀释缓冲液（化合物B）：50μL 50 µL

 

钙测定

将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中，一式两份。

向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue （组分A），使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

 

血清或尿液样本的分析方案

表3.每个孔的试剂组成

钙标准 空白对照 血清或尿液
连续稀释液：10μL 稀释缓冲液（化合物B）：10μL 10 µL

 

钙测定

1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。

2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™（组分A），使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（吸光度）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算钙样品。 

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色* 货号36361

图1.使用Amplite 比色钙定量试剂盒在96孔黑色/透明底板上测量钙剂量响应。 在5分钟的孵育时间内检测到低至~2.5μM的Ca2+（n = 3）

 

参考文献

High efficiency single-step biomaterial-based microparticle fabrication via template-directed supramolecular coordination chemistry
Authors: Kwok Kei Lai, Reinhard Renneberg, Wing Cheung Mak
Journal: Green Chemistry (2016): 1715–1723

Microcystin-LR causes sexual hormone disturbance in male rat by targeting gonadotropin-releasing hormone neurons
Authors: Xueting Wang, Jie Ding, Zou Xiang, Peipei Jiang, Jing Du, Xiaodong Han
Journal: Toxicon (2016): 45–55

 

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Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mmSLLGC13NL

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产品名称：Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mm

产品型号：SLLGC13NL

产品报价：66

产品特点：Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mm，专为离子色谱设计的13 mm 和25 mm 低溶出物过滤器。低吸附性过滤膜、低IC 溶出物、净化水溶液和温和有机溶液。澄清水溶液和温和有机溶液，以获得清晰的离子色谱

SLLGC13NLMillipore lC Millex离子色谱过滤器13mm的详细资料：

Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mm

Millex-LG，0.20 µm，亲水性 PTFE，13 mm，经 IC 认证，澄清水溶液和温和有机溶液，以获得清晰的离子色谱

IC Millex 过滤器提供两种孔径和两种直径。13 mm 过滤器可用于过滤从1 到10mL 的溶液。25 mm 过滤器可用于过滤10 到100 mL 溶液。每批过滤器都通过测试以确保符合密理博的质量控制标准。标准包括：泡点、流速、外壳压力、下游颗粒和IC 级别。每一个包装盒中都有完整技术指标的质量证书。

溶出物  
离子 级别(μg/mL)
离子*  
CI- ＜ 0.20
N03– ＜ 0.20
SC42- ＜ 0.50
滤出颗粒＞ 10 μm  
＜ 50 颗粒/ 过滤器  
* 由离子色谱决定。  

Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mm

• 低吸附性过滤膜
• 低IC 溶出物
• 净化水溶液和温和有机溶液

低结合、低溶出的聚四氟乙烯 (PTFE) 滤膜，可用于去除水溶液以及温和的有机溶液中的微粒，使IC色谱更清晰。 外壳使用低溶出、高密度聚乙烯 (HDPE) 制成。 此外，每个过滤装置单独包装，极大程度地降低了外来离子污染的风险。
 
IC Millex过滤装置有两种孔径和两种直径。建议使用13 mm过滤装置来过滤1至10 mL体积。 建议使用25 mm过滤装置来过滤10至100 mL体积。

每批过滤装置都经过检测，以确保它们均符合密理博产品质量控制标准。每批产品的放行标准包括：泡点、流量、外壳压力、下游微粒及IC水平。每个包装盒中都放有一份包含完整技术规格的产品质量证书。

 

Millipore lC Millex离子色谱过滤器13mmSLLGC13NL

上海金畔生物科技有限公司主营密理博针头式过滤器，滤膜，超滤离心管，超滤杯，微量层析柱，微生物检测滤膜，Sterifil 卫生过滤系统，可换膜过滤器，Milli-Q实验室纯水产品等系列产品，欢迎选购。

钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0 货号21005-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0

钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0

钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0 货号21005 货号 21005 存储条件 在零下15度以下保存
规格 10 mg 价格 1944
Ex (nm) Em (nm)
分子量 668.6 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

关键参数

分子量：668.6

CAS：99590-86-0

溶剂：DMSO

消光系数：N/A

 

产品介绍

钙离子指示剂EGTA, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，EGTA是最为被广泛使用的钙离子选择性的螯合剂。它与钙离子形成的复合物比与镁离子形成的复合物要稳定100,000倍。它被用来制备钙缓冲液和控制钙离子的浓度。EGTA, AM是EGTA的乙酰甲酯衍生物，通过AM法，能被轻易负载到细胞中。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子指示剂EGTA, AM。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM EGTA AM * CAS 99590-86-0 *储备液。
2.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *使用量：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg EGTA AM * CAS 99590-86-0 *与747.83μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 * 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的最终孔内浓度：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的最终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，0.04％Pluronic？F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。

 

参考文献

Distortion of the Actin A-Triad Results in Contractile Disinhibition and Cardiomyopathy
Authors: Meera C Viswanathan, William Schmidt, Michael J Rynkiewicz, Karuna Agarwal, Jian Gao, Joseph Katz, William Lehman, Anthony Cammarato
Journal: Cell Reports (2017): 2612–2625

Routes of Ca2+ Shuttling during Ca2+ Oscillations FOCUS ON THE ROLE OF MITOCHONDRIAL Ca2+ HANDLING AND CYTOSOLIC Ca2+ BUFFERS
Authors: László Pecze, Walter Blum, Beat Schwaller
Journal: Journal of Biological Chemistry (2015): 28214–28230

 

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产品名称 货号
钙离子指示剂EGTA, AM *10mM DMSO溶液* Cat#21006

说明书
钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0.pdf