Amplite 荧光法葡萄糖定量试剂盒

	货号	40005	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法葡萄糖定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于葡萄糖定量的试剂盒，葡萄糖是一种单糖，是生物学中最重要的碳水化合物。它是细胞生长的能量和代谢中间体的来源。葡萄糖是光合作用的主要产物之一，并在原核生物和真核生物中开始细胞呼吸。葡萄糖水平是许多代谢紊乱的关键诊断参数。该葡萄糖测定试剂盒提供了用于测量各种生物样品（例如血清，血浆，体液，食物，生长培养基等）中的葡萄糖的快速且灵敏的方法。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物，使该试剂盒可以在双重荧光测定或比色读数中进行记录。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。该测定是稳健的，并且可以容易地适用于需要测量葡萄糖的各种应用中的高通量测定。例如，该测定可能适合于监测发酵过程中的葡萄糖水平和蛋白质表达过程中的葡萄糖摄取。它也可用于监测葡萄糖转运蛋白。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法葡萄糖定量试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品（50μL）
准备并添加葡萄糖分析工作溶液（50μL）
在37°C孵育10-30分钟
在Ex / Em = 540 / 590nm处检测荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意：避免反复冻融循环。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液（pH 7.4）。

1.2辣根过氧化物酶（HRP）储备液（10 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。注意：未使用的HRP溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖氧化酶（组分D）的小瓶中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性等分试样并储存在-20℃。

1.4葡萄糖原液（800mM）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖小瓶（组分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.标准溶液配制

2.1葡萄糖标准溶液配制
通过将适量的800mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖标准品，以产生30μM的葡萄糖浓度。 然后在测定缓冲液（组分B）中进行1：3连续稀释，得到约10,3,1,0.3,0.1和0.03μM连续稀释的葡萄糖标准品。 包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。

3.工作溶液配制

表1.一个透明底96孔微孔板的分析工作溶液（2X）

操作步骤

表2.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖标准品和测试样品的布局。

GS =葡萄糖标准品（GS1-GS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表3.每个孔的试剂组成

注意：由于Amplite 红色底物（对非荧光产物）的过氧化，高浓度的葡萄糖（例如测试样品或标准品中的100μM）可能导致荧光信号减少。

葡萄糖测定

1.如表2和3中所述，将葡萄糖标准品和含葡萄糖的测试样品加入96孔黑色微孔板中。

2.将50μL葡萄糖测定工作溶液添加到葡萄糖标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（表2），以使总葡萄糖测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）监测荧光强度。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算葡萄糖样品。 点击使用在线线性回归计算器。

图1.使用Gemini酶标仪（Molecular Devices），在96孔黑色平板上用Amplite 荧光葡萄糖定量试剂盒测量葡萄糖剂量反应。

参考文献

Glucose metabolism ontogenesis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the light of the recently sequenced genome: new tools for intermediary metabolism programming
Authors: Lucie Marandel, Vincent Véron, Anne Surget, Elisabeth Plagnes-Juan, Stéphane Panserat
Journal: Journal of Experimental Biology (2016): 734–743

High glucose potentiates L-FABP mediated fibrate induction of PPARα in mouse hepatocytes
Authors: Anca D Petrescu, Avery L McIntosh, Stephen M Storey, Huan Huang, Gregory G Martin, Danilo Landrock, Ann B Kier, Friedhelm Schroeder
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简要概述

Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖-6-磷酸的试剂盒，Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于葡萄糖-6-磷酸（G6P）是葡萄糖转运到细胞中的关键中间体。 G6P也可以转化为糖原或淀粉，用于储存在肝脏和肌肉中。 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）利用G6P产生NADPH形式的还原当量。 这在G6PDH缺乏导致溶血性贫血的红细胞中尤为重要。 AAT Bioquest的Amplite™比色葡萄糖-6-磷酸盐检测试剂盒为检测生物样品（如血清，血浆，尿液）以及细胞培养样品中的G6P提供了一种简单，灵敏，快速的方法。 在偶联酶测定中，G6P浓度与NADPH成比例相关，NADPH由显色NADPH传感器特异性监测。 吸收信号可以通过吸收酶标仪在~575nm处读取。 使用Amplite™G6P检测试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测低至1μM的G6P。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

制备G6P测定混合物（50μL）

加入G6P标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻试剂盒组分

操作方法

1.准备NADP储备溶液（100X）：

向小瓶中加入100μLH2O（组分C）以制备100X NADP储备溶液。

2.准备G6P原液：

将100μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到G6P标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM G6P标准溶液。

注意：未使用的G6P标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在冰箱中。

3.准备G6P标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将10μLG6P储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM G6P标准溶液。 然后将10μL的1mM G6P储备溶液加入990L 1x PBS缓冲液中以产生100μMG6P标准溶液。

注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1 mM G6P标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的G6P标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将G6P标准品和含有G6P的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.准备G6P分析混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAP原液（100X，步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种G6P测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行G6P检测：

5.1将50μLG6P测定混合物（来自步骤4.2）加入G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3使用吸光度板读数器在A575nm / A605nm处检测吸光度比率的增加。

参考文献

The microsomal enzyme 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 3 faces the cytoplasm and uses NADPH generated by glucose-6-phosphate dehydrogenase
Authors: Legeza B, Balazs Z, Nashev LG, Odermatt A.
Journal: Endocrinology (2013): 205

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Journal: Malar J (2011): 241

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Journal: J Infect Dev Ctries (2011): 792

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Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，葡萄糖-6 – 磷酸（ G6P ）是用于葡萄糖到细胞转运的关键中间体。 G6P也可在肝脏和肌肉中转化为糖原或淀粉进行存储。 G6P是由葡萄糖-6 – 磷酸脱氢酶（ G6PD）用来生成在NADPH形式的还原当量。其中G6PD缺乏引起的溶血性贫血。 AAT Bioquest的Amplite 荧光葡萄糖-6 – 磷酸检测试剂盒提供了用于生物样品如血清，血浆，以及细胞培养样品中检测G6P一种简单，灵敏，快速的基于荧光的方法。在偶联酶测定中， 比例是专门由一个荧光NADPH传感器监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪在EX/ EM = 530-570 nm/590-600纳米读取（建议EX / EM = 540 nm/590 nm建议）。Amplite G6P测定试剂盒，我们能够检测少至0.3 μM G6P在100微升反应体积。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备G6P工作溶液（50 µL）
2.添加G6P标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H2O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6P标准溶液（100 mM）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到G6P标准品（组分D）的小瓶中，制成100 mM G6P标准品溶液。

2.标准溶液

G6P标准
将10 µL 100 mM G6P标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，生成1 mM G6P标准溶液。 然后，将100 µL 1 mM G6P标准溶液添加到900 µL 1 x PBS缓冲液中，制成100 µM G6P标准溶液（G6P7）。 取100 µM G6P标准溶液（G6P7）并进行1：3连续稀释，以使用1x PBS缓冲液连续稀释G6P标准溶液（G6P6- G6P1）。注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。

3.2将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6P工作溶液。 注意：此G6P工作溶液足以用于一个96孔板。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G6P标准品和测试样品的布局。 G6P = G6P标准品（G6P1-G6P7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备G6P标准品（G6P），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6P工作溶液，以使G6P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570nm）下监测荧光的增加。 注意：该板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并通过吸光度酶标仪以A575nm / A605nm的比率进行读取。 与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

参考文献

The microsomal enzyme 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 3 faces the cytoplasm and uses NADPH generated by glucose-6-phosphate dehydrogenase
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Authors: Meyer T, Holscher C, Schwoppe C, von Schaewen A.
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Frequency of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in malaria patients from six African countries enrolled in two randomized anti-malarial clinical trials
Authors: Carter N, Pamba A, Duparc S, Waitumbi JN.
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Authors: Nock ML, Johnson EM, Krugman RR, Di Fiore JM, Fitzgerald S, Sandhaus LM, Walsh MC.
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