Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

简要概述

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供最强大的均相荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte -520NW，其可以穿过细胞膜。 Calbryte -520 NW是最适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内，Calbryte -520NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带电荷的荧光染料停留在细胞内，并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Calbryte -520NW的荧光。其优异的细胞保留特性，高灵敏度和100-250倍的荧光增加（当它与钙形成复合物时）使Calbryte -520NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte -520NW是唯一的钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了最优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子检测试剂盒。

产品说明书

分析方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte 520 NW染料加载溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意：使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

操作方法 

1.将20μL（Cat＃36317）或200μL（Cat＃36318和＃36319）DMSO加入到Calbryte 520 NW（组分A）的小瓶中并充分混合。

注意：20μLCalbryte 520 NW储备溶液足以用于一个平板。 如果管子密封，可以将未使用的Calbryte 520 NW储备溶液等分并在<-20℃下储存超过一个月。

注意：避光，避免反复冻融循环。

2.将9 mL HHBS（组分C，不包括在试剂盒Cat＃36319中）与1 mL 10X Pluronic F127 Plus（10X）（组分B）混合并充分混合。 

实验方案

1.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Calbryte 520NW染料加载溶液加入到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育15-30分钟。

注意：如果测定需要37°C，立即进行实验，无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.用HHBS或所需缓冲液制备复合板

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算ATP样品。我们建议使用在线四参数物流计算器。

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体与ATP的荧光信号反应的比较。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 使用Screen Quest ™ Calbryte ™ 520不含Probenecid和WashFree钙测定试剂盒，FLIPR Calcium 4 Assay Kit和Fluo-4 Direct Calcium Assay试剂盒测量钙通量响应。 通过FlexStation 3添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

Screen Quest 细胞趋化因子（c-x-c motif）受体4表达细胞株

	货号	38003	存储条件	在零下80度以下保存
	规格	Each	价格	0
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：38003

产品名称：Screen Quest 细胞趋化因子（c-x-c motif）受体4表达细胞株

规格：Each

产品介绍

超过60％的已知G蛋白偶联受体（GPCR）通过Gq以外的途径发出信号，导致细胞内钙的增加。随着基因组学揭示出更多的G蛋白偶联受体靶标，这种趋势持续增加。 Screen Quest 细胞趋化因子（c-c）受体2B表达细胞株能够研究通常不通过细胞内钙偶联的GPCR。 Screen Quest 细胞趋化因子（c-c）受体2B表达细胞株基于一系列G蛋白嵌合体，包括混杂的G蛋白Gα16。嵌合体由Gq蛋白复合物的α亚基组成，该复合物的5个羧基末端氨基酸已被其他G蛋白之一（Gαs，Gαi，Gαo或Gαz）取代。这些氨基酸负责受体与其G蛋白的偶联。这些嵌合体与特定的非Gq偶联受体共表达可能会在受体刺激后导致细胞内钙信号的产生。 Screen Quest 细胞趋化因子（c-c）受体2B表达细胞株是被混杂G蛋白，Gα16和趋化因子（C-C）受体2B受体（CCR2B）稳定转染的CHO-K1细胞。细胞中组成型表达的Gα16蛋白使通常通过cAMP途径发挥作用的该受体与Gq信号转导和动员的细胞内钙偶联。可以使用钙敏感性染料（例如Calbryte 520 AM，Cal-520 AM，Fluo-8 AM或Fluo-4 AM）和相应的免洗钙试剂盒检测特定配体对CCR2B的激活。该细胞系已成功用于药物发现和筛选环境中，以研究通常不通过细胞内钙偶联的GPCR。它已被FLIPR和FDSS系统有效使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 细胞趋化因子（c-c）受体2B表达细胞株。 

参考文献

A cardiac mitochondrial cAMP signaling pathway regulates calcium accumulation, permeability transition and cell death
Authors: Wang Z, Liu D, Varin A, Nicolas V, Courilleau D, Mateo P, Caubere C, Rouet P, Gomez AM, V and ecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.
Journal: Cell Death Dis (2016): e2198

Activation of P2X7 and P2Y11 purinergic receptors inhibits migration and normalizes tumor-derived endothelial cells via cAMP signaling
Authors: Avanzato, D and Genova, T and Pla, A Fiorio and Bernardini, M and Bianco, S and Bussolati, B and Mancardi, D and Giraudo, E and Maione, F and Cassoni, P and others
Journal: Scientific Reports (2016)

Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
Authors: Alqurashi M, Gehring C, Marondedze C.
Journal: Int J Mol Sci (2016): 852

Odor-induced cAMP production in Drosophila melanogaster olfactory sensory neurons
Authors: Miazzi F, Hansson BS, Wicher D.
Journal: J Exp Biol (2016): 1798

Role of the cAMP Pathway in Glucose and Lipid Metabolism
Authors: Ravnskjaer K, Madiraju A, Montminy M.
Journal: Handb Exp Pharmacol (2016): 29

The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
Authors: Almahariq M, Mei FC, Cheng X.
Journal: Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) (2016): 75

cAMP-Induced Histones H3 Dephosphorylation Is Independent of PKA and MAP Kinase Activations and Correlates With mTOR Inactivation
Authors: Rodriguez P, Rojas J.
Journal: J Cell Biochem (2016): 741

A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors
Authors: Vedel L, Brauner-Osborne H, Mathiesen JM.
Journal: J Biomol Screen (2015): 849

Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
Journal: Circ Res (2015): 707

Cardiac cAMP: production, hydrolysis, modulation and detection
Authors: Boularan C, Gales C.
Journal: Front Pharmacol (2015): 203

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒*1% FBS生长培养基**10×10板*

	货号	36335	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Plates	价格	52308
	Ex (nm)	523	Em (nm)	551
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的最亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备细胞
2. 除去生长培养基
3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
4. 在室温下孵育1小时
5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Rhod-4 NW工作溶液：将20 µL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 注意：如果细胞在室温下能长时间正常工作，请在室温下孵育细胞板1-2小时。
 
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。

4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。

 

图示

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到最终指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。

 

参考文献

Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
Authors: Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
Journal: Appl Spectrosc (2007): 138

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
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Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
Authors: Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
Journal: Cell Calcium (2004): 509

Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, del Nido PJ.
Journal: Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127

Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
Journal: Cardiovasc Res (2003): 695

Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Biophys J (2001): 549

Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Cell Calcium (2001): 217

Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
Authors: Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2001): 265

Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
Authors: MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
Journal: J Biomed Opt (2001): 23

Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
Authors: Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
Journal: J Comp Neurol (2000): 297