胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿

	货号	13427	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	1272
	Ex (nm)	500	Em (nm)	522
	分子量	1403.41	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，(Ac-LEHD)2-R110是Caspase 9的荧光底物。因为高纯的罗丹明110(R110)衍生底物被置于内酯的构型内，因此是无色的，也不发出荧光。在Caspase蛋白酶（天冬氨酸蛋白水解酶或胱冬肽酶）的作用下，切割R110上的多肽而获得具有强烈荧光的R110产物，该产物可在480nm（最常见的荧光检测仪上都具有这种激发光源）处被激发后，在510nm-530 nm处用荧光法检测。R110衍生的Caspase底物可能是被广泛用于检测多种Caspase酶活性的底物中最灵敏的荧光底物。我们的R110衍生底物是高纯度的，并保证经HPLC检测不出R110，因这些残留的R11可能会产生显著的本底干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

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简要概述

胱天蛋白酶Caspase 3/7显色底物 Z-DEVD-pNA是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，一种含有苄氧羰酰基(Z)的Caspase 3显色底物，一种蛋白酶，当细胞暴露在细胞凋亡的条件下时具有快速催化活性；会切断多聚(ADP-ribose)聚合酶。这种七-氨基-4氟甲基香豆素衍生物比七-氨基-4甲基香豆素衍生物具有更好的膜渗透性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 3/7显色底物 Z-DEVD-pNA。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

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简要概述

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光是AAT Bioquest研发的用于检测半胱天冬酶活性的试剂盒。半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用，而Caspase 3/7（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3/7也被鉴定为药物筛选靶标。半胱天冬酶抑制剂具有抗癌和其他药理学潜力。已经证明Caspase 3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。

我们的Amplite™荧光Caspase 3/7检测试剂盒使用Ac-DEVD-AMC作为Caspase 3/7活性的荧光指示剂。AMC肽几乎不发荧光。 Caspase 3/7对AMC肽的切割产生强荧光AMC，其在440-460nm下荧光监测，激发340-350nm。 它可用于使用荧光酶标仪或荧光计连续测量细胞提取物和纯化酶制剂中Caspase 3/7的活性。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的Caspase 检测试剂/试剂盒。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

用测试化合物制备细胞（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

加入等体积的Caspase 3/7测定溶液

在室温下孵育1小时

监测Ex的荧光强度 / Em = 350 / 450nm

操作方法

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞在20,000至80,000个细胞/孔/ 90L过夜，96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/ 20L，用于384孔板。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于培养基中，培养基浓度为80,000至200,000细胞/孔/ 90L，用于96孔poly-D赖氨酸平板或20,000至50,000细胞/孔/ 20L用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备库存解决方案：

2.1在使用前，在室温下使用组分A，B，C（如果需要，组分D）。

2.2如果需要，制备1mM Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO储备液：将100μLDMSO（未提供）直接加入到Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO小瓶中（组分D） ）。该抑制剂可用于确认荧光信号强度与Caspase 3/7样蛋白酶活性之间的相关性。

注意：应将未使用的抑制剂储备液等分并在-20°C下干燥储存。

3.准备Caspase 3/7检测溶液：

将50μL200XCaspase 3/7底物储备溶液（组分A）和100μL1MDTT溶液（组分C）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：50μL的200X Caspase 3/7底物储备液足以进行100次分析，每次分析的反应体积为100μL。未使用的200X Caspase 3/7底物储备溶液应等分并在-20°C下干燥储存。远离光明。

4.运行Caspase 3/7测定：

4.1通过在PBS或所需缓冲液中加入10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384-板）来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

4.2将细胞板在37℃，5％CO 2培养箱中培养所需的一段时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

4.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7测定溶液（来自步骤3）。

4.4在室温下孵育板至少1小时，避光。

注1：如果需要，在室温下加入测定溶液10分钟前，将1L Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO的1mM储备液（来自步骤2.2）加入所选样品，以确认caspase 3 / 7个类似的活动。

4.5在制动器关闭的情况下，以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟。

4.6在Ex / Em = 350 / 450nm处观察荧光增加。

数据分析

        从具有细胞的那些孔的值中减去具有生长培养基的空白孔中的荧光。空白孔的背景荧光根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 Jurkat细胞在同一天以80,000个细胞/孔/ 90L在黑色壁/透明底96孔Costar平板中接种。 用或不用20M喜树碱处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用NOVOStar仪器（来自BMG Labtech）在Ex / Em = 350 / 450nm下测量荧光强度。

参考文献

The use of tail-anchored protein chimeras to enhance liposomal cargo delivery
Authors: Abbi Abdelrehim, Lior Shaltiel, Ling Zhang, Yechezkel Barenholz, Stephen High, Lynda K Harris
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