胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK 货号13476-AAT Bioquest荧光染料

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胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK

胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK

胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK    货号13476 货号 13476 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 1272
Ex (nm) 412 Em (nm) 505
分子量 708.19 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK是美国AAT Bioquest生产的用于Caspase的试剂,FAM- VAD具有绿色荧光细胞渗透性抑制靶向胱天蛋白酶1 ,2,3 ,6,8 ,9或10 。一旦进入细胞,所述抑制剂共价结合胱天蛋白酶,产生绿色荧光。当加入到细胞群体中, FAM- VAD -FMK探针进入每个细胞与共价结合到驻留在胱天蛋白酶活性的异二聚体的VAD-FMK,从而抑制酶活性的反应性半胱氨酸残基。结合的标记试剂被保留在细胞内,而任何未结合的试剂将扩散出细胞,并冲走。绿色荧光信号的直接测量活性胱天蛋白酶的存在于细胞中的试剂加入的时间量。含有结合的标记试剂细胞可以通过96 – 孔板的基于荧光,荧光显微镜或流式细胞仪进行分析。该探头具有光谱性质类似于Pacific Blue®和BD Horizon V450 ,Pacific Blue这样的过滤器®和BD Horizon V450可以方便的用流式细胞仪或显微镜使用。该探头是特别设计用于多色检测半胱氨酸蛋白酶与紫激光装备 。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK。 

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产品说明书

样品操作及分析

以下协议仅提供指导,应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光,或使用酶标仪监测吸光度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1:250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 µL至500 µL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Suppression of human T cell proliferation by the caspase inhibitors, z-VAD-FMK and z-IETD-FMK is independent of their caspase inhibition properties
Authors: Lawrence CP, Chow SC.
Journal: Toxicol Appl Pharmacol. (2012)

[Inhibition of elicitation of allergic contact dermatitis by topical use of Z-VAD-FMK, a broad caspase inhibitor: experiment in mice]
Authors: Li YY, Yan CL.
Journal: Zhonghua Yi Xue Za Zhi (2012): 1992

Intracochlear perfusion of leupeptin and z-VAD-FMK: influence of antiapoptotic agents on gunshot-induced hearing loss
Authors: Abaamrane L, Raffin F, Schmerber S, Sendowski I.
Journal: Eur Arch Otorhinolaryngol (2011): 987

Plasmodium falciparum metacaspase PfMCA-1 triggers a z-VAD-fmk inhibitable protease to promote cell death
Authors: Meslin B, Beavogui AH, Fasel N, Picot S.
Journal: PLoS One (2011): e23867

Structure of human caspase-6 in complex with Z-VAD-FMK: New peptide binding mode observed for the non-canonical caspase conformation
Authors: Muller I, Lamers MB, Ritchie AJ, Dominguez C, Munoz-Sanjuan I, Kiselyov A.
Journal: Bioorg Med Chem Lett (2011): 5244

Pretreatment with pancaspase inhibitor (Z-VAD-FMK) delays but does not prevent intraperitoneal heat-killed group B Streptococcus-induced preterm delivery in a pregnant mouse model
Authors: Equils O, Moffatt-Blue C, Ishikawa TO, Simmons CF, Ilievski V, Hirsch E.
Journal: Infect Dis Obstet Gynecol (2009): 749432

[Attenuation of allergic contact dermatitis by Z-VAD-FMK, a broad caspase inhibitor: experiment with mice]
Authors: Li YY, Yan CL, Xu W.
Journal: Zhonghua Yi Xue Za Zhi (2008): 3153

Bodipy-VAD-Fmk, a useful tool to study yeast peptide N-glycanase activity
Authors: Witte MD, Descals CV, de Lavoir SV, Florea BI, van der Marel GA, Overkleeft HS.
Journal: Org Biomol Chem (2007): 3690

Caspase inhibitor Z-VAD-FMK enhances the freeze-thaw survival rate of human embryonic stem cells
Authors: Heng BC, Clement MV, Cao T.
Journal: Biosci Rep (2007): 257

Effects of caspase inhibitors (z-VAD-fmk, z-VDVAD-fmk) on Nile Red fluorescence pattern in 7-ketocholesterol-treated cells: investigation by flow cytometry and spectral imaging microscopy
Authors: Vejux A, Lizard G, Tourneur Y, Riedinger JM, Frouin F, Kahn E.
Journal: Cytometry A (2007): 550

 

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胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物(Z-DEVD)2-R110 绿 Cat#13430

说明书
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胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Z-IETD-AFC 绿 CAS 219138-02-0 货号13425-AAT Bioquest荧光染料

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胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Z-IETD-AFC 绿 CAS 219138-02-0

胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Z-IETD-AFC 绿 CAS 219138-02-0

胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Z-IETD-AFC 绿  CAS 219138-02-0    货号13425 货号 13425 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1668
Ex (nm) 376 Em (nm) 482
分子量 821.75 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 3/7显色底物 Z-DEVD-pNA是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,一种含有苄氧羰酰基(Z)的Caspase 3显色底物,一种蛋白酶,当细胞暴露在细胞凋亡的条件下时具有快速催化活性;会切断多聚(ADP-ribose)聚合酶。这种七-氨基-4氟甲基香豆素衍生物比七-氨基-4甲基香豆素衍生物具有更好的膜渗透性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 3/7显色底物 Z-DEVD-pNA。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

 

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说明书
胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Z-IETD-AFC 绿 CAS 219138-02-0.pdf

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光 货号13504-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光    货号13504 货号 13504 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 4584
Ex (nm) 532 Em (nm) 619
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光是AAT Bioquest研发的用于检测半胱天冬酶活性的试剂盒。半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用。 Caspase 3/7(CPP32 / apopain)的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3/7也被鉴定为药物筛选靶标。半胱天冬酶抑制剂具有抗癌和其他药理学潜力。已经证明caspase 3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物选择性。我们的Amplite™荧光Caspase 3/7检测试剂盒使用Z-DEVD-ProRed™作为caspase的荧光指示剂-3活动。通过Caspase 3/7切割ProRed DEVD阻断肽残基产生强烈红色荧光ProRed,其在~620nm下荧光测量,激发~535nm。Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光可用于测量细胞提取物和纯化酶中caspase 3/7的活性,以及​​筛选caspase 3/7抑制剂。该试剂盒以96孔格式每孔使用100μl试剂,提供足够的试剂进行100次分析。该试剂盒以384孔的形式每孔使用25ul试剂,提供足够的试剂进行400次分析。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的Caspase 检测试剂/试剂盒。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 535nm
发射 620nm
cutoff: 610nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板的测定方案

 

概述

用测试化合物(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)

制备细胞体积的半胱天冬酶3/7测定溶液

在室温下孵育1小时

在Ex / Em = 535 / 620nm处监测荧光强度

 

操作方法

1.准备细胞:

1.1对于粘附细胞:在生长培养基中将细胞在20,000至80,000个细胞/孔/ 90L下过夜,96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/ 20L,用于384孔板。

1.2对于非粘附细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀悬浮于培养基中,培养基浓度为80,000至200,000细胞/孔/ 90L,用于96孔poly-D赖氨酸平板或20,000至50,000细胞/孔/ 20L用于384孔聚-D赖氨酸板。 在实验之前,在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备库存解决方案:

2.1在使用前,在室温下使用组分A,B,C(如果需要,组分D和E)。

2.2如果需要,制备1mM Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO储备液:将100μLDMSO(未提供)直接加入到Ac-DEVD-CHO小瓶(组分D)中。 该抑制剂可用于确认荧光信号强度与Caspase 3/7样蛋白酶活性之间的相关性。

注意:应将未使用的抑制剂储备液等分并在-20°C下干燥储存。

3.准备Caspase 3/7检测溶液:

将50μL200X胱天蛋白酶3/7底物储备溶液(组分A)和100μL1MDTT溶液(组分C)加入10mL测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。

注意:50μL的200X caspase 3/7底物储备液足以进行100次测定,每次测定的反应体积为100μL。 未使用的200X caspase 3/7底物储备液应等分,在-20°C干燥储存,避光。

4.运行Caspase 3/7测定:

4.1通过将10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384-板)加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。 对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

4.2将细胞板在培养箱中孵育一段所需的时间(用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

4.3加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的半胱天冬酶3/7测定溶液(来自步骤3)。

4.4将板在室温下孵育至少1小时,避光。

注1:如果需要,在室温下加入测定溶液10分钟前,将1L Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO的1mM储备液(来自步骤2.2)加入选定的样品中,以确认Caspase 3 / 7个类似的活动。

注2:如果需要,通过将5mM R110标准品(组分E)稀释到生长培养基中制备R110标准曲线,得到系列稀释的R110标准品,范围为0-50M。将100μL连续稀释的R110标准品加入含有的孔中。 在测量荧光之前的任何时间,100μLCaspase3/7测定溶液。 该标准曲线可用于测定含有胱天蛋白酶3/7的反应中产生的产物的摩尔数。

4.5在制动器关闭的情况下,以800rpm离心细胞板(特别是对于非粘附细胞)2分钟。

4.6在Ex / Em = 490 / 525nm处观察荧光增加。

 

数据分析

        从具有细胞的那些孔值中减去具有生长培养基的空白孔中的荧光。空白孔的背景荧光根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光    货号13504

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 将Jurkat细胞在同一天以200,000个细胞/ 90L /孔接种在Costar黑壁/透明底96孔板中。 用终浓度为1M的星形孢菌素处理细胞5小时,而未处理的细胞用作对照。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液(100μL/孔)并在室温下温育1小时。 用FlexStation荧光酶标仪(Molecular Devices)在Ex / Em = 540 / 620nm下测量荧光强度。

 

参考文献

High STMN1 level is associated with chemo-resistance and poor prognosis in gastric cancer patients
Authors: Tuya Bai, Takehiko Yokobori, Bolag Altan, Munenori Ide, Erito Mochiki, Mitsuhiro Yanai, Akiharu Kimura, Norimichi Kogure, Toru Yanoma, Masaki Suzuki
Journal: British Journal of Cancer (2017)

The trivalent cerium-induced cell death and alteration of ion flux in sweetpotato [Ipomoea batatas (L.) Lam]
Authors: Jiaojiao Jiang, Jianzhong Hu, Zeyi Xie, Qinghe Cao, Daifu Ma, Yonghua Han, Zongyun Li
Journal: Journal of Rare Earths (2017)

Uncarboxylated Osteocalcin Induces Antitumor Immunity against Mouse Melanoma Cell Growth
Authors: Yoshikazu Hayashi, Tomoyo Kawakubo-Yasukochi, Akiko Mizokami, Mai Hazekawa, Tomiko Yakura, Munekazu Naito, Hiroshi Takeuchi, Seiji Nakamura, Masato Hirata
Journal: Journal of Cancer (2017): 2478–2486

Docetaxel induces Bcl-2-and pro-apoptotic caspase-independent death of human prostate cancer DU145 cells
Authors: Takeharu Ogura, Yoshiyuki Tanaka, Hiroki Tamaki, Mamoru Harada
Journal: International journal of oncology (2016): 2330–2338

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

Identification of an allosteric small-molecule inhibitor selective for the inducible form of heat shock protein 70
Authors: Matthew K Howe, Khaldon Bodoor, David A Carlson, Philip F Hughes, Yazan Alwarawrah, David R Loiselle, Alex M Jaeger, David B Darr, Jamie L Jordan, Lucas M Hunter
Journal: Chemistry & biology (2014): 1648–1659

说明书
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光.pdf

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿 货号13427-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿    货号13427 货号 13427 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 1272
Ex (nm) 500 Em (nm) 522
分子量 1403.41 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,(Ac-LEHD)2-R110是Caspase 9的荧光底物。因为高纯的罗丹明110(R110)衍生底物被置于内酯的构型内,因此是无色的,也不发出荧光。在Caspase蛋白酶(天冬氨酸蛋白水解酶或胱冬肽酶)的作用下,切割R110上的多肽而获得具有强烈荧光的R110产物,该产物可在480nm(最常见的荧光检测仪上都具有这种激发光源)处被激发后,在510nm-530 nm处用荧光法检测。R110衍生的Caspase底物可能是被广泛用于检测多种Caspase酶活性的底物中最灵敏的荧光底物。我们的R110衍生底物是高纯度的,并保证经HPLC检测不出R110,因这些残留的R11可能会产生显著的本底干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

 

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胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物(Ac-IETD)2-R110 绿 Cat#13431

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胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿.pdf

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝 CAS 292633-16-0 货号13426-AAT Bioquest荧光染料

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胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝 CAS 292633-16-0

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝 CAS 292633-16-0

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝  CAS 292633-16-0    货号13426 货号 13426 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1944
Ex (nm) 341 Em (nm) 441
分子量 711.72 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,Caspase 9是半胱氨酸蛋白酶家族中CED-3亚家族成员,在凋亡起始阶段占有必要地位。这些酶主要具有特异的保守性区域,并特异的切开识别位点后面的天冬氨酸残基。起始凋亡蛋白酶(例如caspases-8)激活效应蛋白酶,例如caspase-3或者-7。这些效应蛋白酶然后酶切细胞底物导致凋亡的形态学改变。AC-LHED-AMC是caspase-9选择性荧光底物。Caspase-9酶切水解特异性底物AC-LHED-AMC,导致释放AMC荧光集团,其激发波长是365nm,发射光波长为450nm。这个实验的准备试验缓冲液包含50nM MES,pH6.5,10%PEG8000, 0.1% CHAPS, 5 mM DTT, and 1 mM EDTA.。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝。

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样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Structure-dependent induction of apoptosis by hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in the human hepatoma cell line HepaRG: Single versus repeated exposure
Authors: Julia Waizenegger, Albert Braeuning, Markus Templin, Alfonso Lampen, Stefanie Hessel-Pras
Journal: Food and Chemical Toxicology (2018)

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

说明书
胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝 CAS 292633-16-0.pdf