Cell Meter BX650固定化细胞活性染料 货号22520-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter BX650固定化细胞活性染料

Cell Meter BX650固定化细胞活性染料

Cell Meter BX650固定化细胞活性染料    货号22520 货号 22520 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2472
Ex (nm) 518 Em (nm) 654
分子量 844.83 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:22520

产品名称:Cell Meter BX650固定化细胞活性染料

规格:200 Tests

储存条件:保存在冰箱-15℃干燥

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:N/A

激发波长(nm):518

发射波长(nm):654

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 480nm激光
发射: 695/40nm滤波片
滤波片: PerCP滤波片组
荧光显微镜  
激发: TexasRed滤波片组
发射: TexasRed滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

 

产品介绍 

从活细胞中区分和排除死细胞可以更清晰地分离和鉴定细胞群。Cell Meter BX650固定化细胞活性染料是一类细胞不可渗透的荧光活性染料,它们经过优化以匹配常见流式细胞仪的主要激发激光,例如350、405、488、633和647 nm。这些染料不渗入活细胞,但渗入膜受损的细胞。它们与含胺和硫醇的蛋白质以及其他细胞成分发生不可逆的反应。由于具有受损膜的死细胞或固定细胞更容易与Cell Meter BX650固定化细胞活性染料发生反应,因此比具有完整膜的活细胞的染色更亮,因此这些染料可用于评估哺乳动物细胞的活与死状态。使用这些染料时,需要考虑一些因素,例如,每种染料的滴定,以确保活细胞几乎没有染色。Cell Meter BX650固定化细胞活性染料经过优化,可以在488 nm的蓝色激光激发下以650 nm的波长发射。与其他商业上类似的活性染料相比,这种固定化细胞活性染料更加耐用、稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter BX650固定化细胞活性染料。 

点击查看光谱

 

图示

 

 

Cell Meter BX650固定化细胞活性染料    货号22520

图1.通过Cell Meter 固定化细胞活性染料检测Jurkat细胞活性。处理Jurkat细胞并用Cell Meter BX650(Cat#22520)染色,然后固定在3.7%甲醛中,并通过流式细胞仪进行分析。带有PerCP通道的死细胞群体(蓝色峰)很容易与活细胞群体(红色峰)区分开,在固定之前和之后都获得了几乎相同的结果。

 

 

参考文献

Fluorescence-based method is more accurate than counting-based methods for plotting growth curves of adherent cells.
Authors: Pereira, Túlio Felipe and Levin, Gabriel and DeOcesano-Pereira, Carlos and Caodaglio, Amanda Schiersner and Fujita, André and Tonso, Aldo and Sogayar, Mari Cleide
Journal: BMC research notes (2020): 57

[Immune function of myeloid-derived suppressor cells and its mechanism in obstructive sleep apnea syndrome].
Authors: Chen, S W and Li, J and Xiang, B and Xu, S J and Wang, L
Journal: Zhonghua yi xue za zhi (2020): 295-300

CFDA-SE Combined with MACSiBeads™ Particles to Evaluate the Inhibitory Effect of Treg Cells in vitro.
Authors: Ren, Qingqi and Jiang, Chunlin and Liu, Jikui
Journal: Annals of clinical and laboratory science (2019): 740-747

Tracking keratinocytes and melanocytes using carboxyfluorescein hydroxysuccinimidyl ester staining.
Authors: Lönnqvist, Susanna and Junker, Johan P E and Sedell, Maria and Nyman, Erika and Kratz, Gunnar
Journal: PloS one (2019): e0221878

[Effects of skin γδ T lymphocytes on wound healing of mice through regulating proliferation and differentiation of mice epidermal cells].
Authors: Zhu, H J and Li, Y S and Wang, Y P and Hu, X H and Zhang, X R and Qiu, L and He, W F and Luo, G X
Journal: Zhonghua shao shang za zhi = Zhonghua shaoshang zazhi = Chinese journal of burns (2019): 298-307

Impaired Immunosuppressive Effect of Bronchoalveolar Mesenchymal Stem Cells in Hypersensitivity Pneumonitis: Preliminary Findings.
Authors: Balogh, Enikő and Nagy, Béla and Gyetvai, Ágnes and Bene, Zsolt and Hendrik, Zoltán and Jeney, Viktória and Nagy, Péter and Papp, Ágnes and Balla, József and Balla, György and Kappelmayer, János and Nagy, Béla
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2018): 363-368

Delineating the distinct role of AKT in mediating cell survival and proliferation induced by CD154 and IL-4/IL-21 in chronic lymphocytic leukemia.
Authors: Chapman, Elinor A and Oates, Melanie and Mohammad, Ishaque S and Davies, Barry R and Stockman, Paul K and Zhuang, Jianguo and Pettitt, Andrew R
Journal: Oncotarget (2017): 102948-102964

Human auricular chondrocytes with high proliferation rate show high production of cartilage matrix.
Authors: Ishibashi, Makiko and Hikita, Atsuhiko and Fujihara, Yuko and Takato, Tsuyoshi and Hoshi, Kazuto
Journal: Regenerative therapy (2017): 21-28

[Tumor derived IgG suppress the proliferation of T cells in cord blood].
Authors: Liu, E Y and Liu, J F and Shao, W W and Xiao, L and Li, G H and Chang, X H and Qiu, X Y
Journal: Beijing da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Peking University. Health sciences (2017): 824-828

A comparative study of colorimetric cell proliferation assays in immune cells.
Authors: Koyanagi, Madoka and Kawakabe, So and Arimura, Yutaka
Journal: Cytotechnology (2016): 1489-98

说明书
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Cell Meter BX590固定化细胞活性染料 货号22514-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter BX590固定化细胞活性染料

Cell Meter BX590固定化细胞活性染料

Cell Meter BX590固定化细胞活性染料    货号22514 货号 22514 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2472
Ex (nm) 492 Em (nm) 579
分子量 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:22514

产品名称:Cell Meter BX590固定化细胞活性染料

规格:200 Tests

储存条件:保存在冰箱-15℃干燥

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:N/A

激发波长(nm):492

发射波长(nm):579

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 480nm激光
发射: 575/26nm滤波片
通道: PE通道
荧光显微镜  
激发: Cy3/TRITC滤波片组
发射: Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

 

 
产品介绍
 

从活细胞中区分和排除死细胞可以更清晰地分离和鉴定细胞群。Cell Meter BX590固定化细胞活性染料是一类细胞不可渗透的荧光活性染料,它们通过优化以匹配常见流式细胞仪的主要激发激光,例如350、405、488、633和647 nm。这些染料不渗入活细胞,但渗入膜受损的细胞。它们与含胺和硫醇的蛋白质以及其他细胞成分发生不可逆的反应。由于具有受损膜的死细胞或固定细胞更容易与Cell Meter BX590固定化细胞活性染料发生反应,因此比具有完整膜的活细胞的染色更亮,因此这些染料可用于评估哺乳动物细胞的活与死状态。使用这些染料时,需要考虑一些因素,例如,每种染料的滴定,以确保活细胞几乎没有染色。Cell Meter BX590固定化细胞活性染料通过优化,可在488 nm的蓝色激光激发并在590 nm发射。与其他商业上类似的活性染料相比,这种Cell Meter BX590固定化细胞活性染料更加耐用、稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter BX590固定化细胞活性染料。 

点击查看光谱

 

图示

 

 

Cell Meter BX590固定化细胞活性染料    货号22514

图1.通过Cell Meter BX590固定化细胞活性染料检测Jurkat细胞活性。处理Jurkat细胞并用Cell Meter BX590(Cat#22514)染色,然后固定在3.7%甲醛中,并通过流式细胞仪进行分析。带有PE-TexasRed通道的死细胞数量(蓝峰)很容易与活细胞数量(红峰)区分开,在固定之前和之后获得的结果几乎相同。

 

 

参考文献

CFSE dilution to study human T and NK cell proliferation in vitro.
Authors: Terrén, Iñigo and Orrantia, Ane and Vitallé, Joana and Zenarruzabeitia, Olatz and Borrego, Francisco
Journal: Methods in enzymology (2020): 239-255

Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) to Identify Quiescent Glioblastoma Stem-Like Cells.
Authors: Azari, Hassan and Deleyrolle, Loic P and Reynolds, Brent A
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2018): 59-67

Estimates and impact of lymphocyte division parameters from CFSE data using mathematical modelling.
Authors: Mazzocco, Pauline and Bernard, Samuel and Pujo-Menjouet, Laurent
Journal: PloS one (2017): e0179768

Analysis of CFSE time-series data using division-, age- and label-structured population models.
Authors: Hross, Sabrina and Hasenauer, Jan
Journal: Bioinformatics (Oxford, England) (2016): 2321-9

Assessment of lymphocyte proliferation for diagnostic purpose: Comparison of CFSE staining, Ki-67 expression and 3H-thymidine incorporation.
Authors: Lašťovička, Jan and Rataj, Michal and Bartůňková, Jiřina
Journal: Human immunology (2016): 1215-1222

Poor association of allergen-specific antibody, T- and B-cell responses revealed with recombinant allergens and a CFSE dilution-based assay.
Authors: Eckl-Dorna, J and Campana, R and Valenta, R and Niederberger, V
Journal: Allergy (2015): 1222-9

Quality control of extracorporeal photochemotherapy: Proliferation assay using CFSE validated according to ISO 15189:2007 standards.
Authors: Faivre, Lionel and Lecouflet, Lucie and Liu, Wang-Qing and Khadher, Isabelle and Lahaie, Camille and Vidal, Michel and Legouvello, Sabine and Beaumont, Jean-Louis and Bierling, Philippe and Rouard, Hélène and Birebent, Brigitte
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2015): 30-9

Mathematical models for CFSE labelled lymphocyte dynamics: asymmetry and time-lag in division.
Authors: Luzyanina, Tatyana and Cupovic, Jovana and Ludewig, Burkhard and Bocharov, Gennady
Journal: Journal of mathematical biology (2014): 1547-83

Quality control of extracorporeal photochemotherapy: Proliferation assay using CFSE validated according to ISO 15189:2007 standards.
Authors: Lionel, Faivre and Lucie, Lecouflet and Wang-Qing, Liu and Isabelle, Khadher and Camille, Lahaie and Michel, Vidal and Sabine, Legouvello and Jean-Louis, Beaumont and Philippe, Bierling and Hélène, Rouard and Brigitte, Birebent
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2014)

Asymmetry of Cell Division in CFSE-Based Lymphocyte Proliferation Analysis.
Authors: Bocharov, Gennady and Luzyanina, Tatyana and Cupovic, Jovana and Ludewig, Burkhard
Journal: Frontiers in immunology (2013): 264

说明书
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Cell Meter RX700固定化细胞活性染料 货号22532-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter RX700固定化细胞活性染料

Cell Meter RX700固定化细胞活性染料

Cell Meter RX700固定化细胞活性染料    货号22532 货号 22532 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2472
Ex (nm) 690 Em (nm) 713
分子量 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:22532

产品名称:Cell Meter RX700固定化细胞活性染料

规格:200 Tests

储存条件:保存在冰箱-15℃干燥

保质期:12个月

 

产品介绍

从活细胞中区分和排除死细胞可以更清晰地分离和鉴定细胞群。Cell Meter RX700固定化细胞活性染料是一类细胞不可渗透的荧光活性染料,它们经过优化以匹配常见流式细胞仪的主要激发激光,例如350、405、488、633和647 nm。这些染料不渗入活细胞,但渗入膜受损的细胞。它们与含胺和硫醇的蛋白质以及其他细胞成分发生不可逆的反应。由于具有受损膜的死细胞或固定细胞更容易与Cell Meter RX700固定化细胞活性染料发生反应,因此比具有完整膜的活细胞的染色更亮,因此这些染料可用于评估哺乳动物细胞的活与死状态。使用这些染料时,需要考虑一些因素,例如,每种染料的滴定,以确保活细胞几乎没有染色。Cell Meter RX700固定化细胞活性染料经过优化,可以在633/647 nm的红色激光激发下以700 nm的波长发射。与其他商业上类似的活性染料相比,这种固定化细胞活性染料更加耐用、稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter RX700固定化细胞活性染料。 

 

参考文献

CFSE dilution to study human T and NK cell proliferation in vitro.
Authors: Terrén, Iñigo and Orrantia, Ane and Vitallé, Joana and Zenarruzabeitia, Olatz and Borrego, Francisco
Journal: Methods in enzymology (2020): 239-255

PGC-1α Regulates Cell Proliferation and Invasion via AKT/GSK-3β/β-catenin Pathway in Human Colorectal Cancer SW620 and SW480 Cells.
Authors: Yun, Seong-Hoon and Park, Joo-In
Journal: Anticancer research (2020): 653-664

The miR-3940-5p inhibits cell proliferation of gingival mesenchymal stem cells.
Authors: Han, Xiao and Yang, Haoqing and Cao, Yangyang and Ge, Lihua and Han, Nannan and Zhang, Chen and Fan, Zhipeng and Yao, Rui
Journal: Oral diseases (2019): 1363-1373

Evaluation of Cell Proliferation and Apoptosis in Immunotoxicity Testing.
Authors: Nagarkatti, Mitzi and Rieder, Sadiye Amcaoglu and Nagarkatti, Prakash S
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2018): 209-230

Toll-Like Receptor 4 (TLR4)/Cyclooxygenase-2 (COX-2) Regulates Prostate Cancer Cell Proliferation, Migration, and Invasion by NF-κB Activation.
Authors: Wang, Wei and Wang, Jiye
Journal: Medical science monitor : international medical journal of experimental and clinical research (2018): 5588-5597

Gag-Specific CD4 T Cell Proliferation, Plasmacytoid Dendritic Cells, and Ethnicity in Perinatally HIV-1-Infected Youths: The ANRS-EP38-IMMIP Study.
Authors: Scott-Algara, Daniel and Warszawski, Josiane and Chenadec, Jérôme Le and Didier, Céline and Montange, Thomas and Viard, Jean-Paul and Dollfus, Catherine and Avettand-Fenoel, Véronique and Rouzioux, Christine and Blanche, Stéphane and Buseyne, Florence
Journal: AIDS research and human retroviruses (2017): 21-28

Quantitative analysis of cell proliferation by a dye dilution assay: Application to cell lines and cocultures.
Authors: Chung, Soobin and Kim, Seol-Hee and Seo, Yuri and Kim, Sook-Kyung and Lee, Ji Youn
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2017): 704-712

[Myeloid-derived suppressor cells promoted autologous B cell proliferation in rheumatoid arthritis].
Authors: Chen, W and Hu, F L and Liu, H J and Xu, L L and Li, Y N and Li, Z G
Journal: Beijing da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Peking University. Health sciences (2017): 819-823

A comparative study of colorimetric cell proliferation assays in immune cells.
Authors: Koyanagi, Madoka and Kawakabe, So and Arimura, Yutaka
Journal: Cytotechnology (2016): 1489-98

Hypoxia inhibits mesenchymal stem cell proliferation through HIF1α-dependent regulation of P27.
Authors: Kumar, Sanjay and Vaidya, Meenal
Journal: Molecular and cellular biochemistry (2016): 29-38

说明书
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Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光 货号20113-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光     货号20113 货号 20113 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 493 Em (nm) 517
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞,胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 此Cell Meter 活细胞caspase 6活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 6活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中激活的caspase 6活性,或用于筛选caspase 6抑制剂。 FAM-VEID-FMK,绿色标记试剂,可通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的caspase 6。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 见表1
发射: 见表1
荧光显微镜  
激发: 见表1
发射: 见表1
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 见表1
发射: 见表1
通道: 黑色透明
读取模式: 底读模式

表1:参数信息

  FAM-VEID-FMK 碘化丙啶 hoechst 染料
流式细胞仪 530/30nm滤波片(FITC通道) 610/20nm滤波片(PE-Texas Red通道) 450/40nm滤波片(Pacific Blue通道)
荧光显微镜 FITC 通道 TRITC 通道 DAPI通道
荧光酶标仪 490/525nm 535/635nm 350/461nm

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。

注1:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

6.1对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

6.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20108
Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20115
Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20117

说明书
Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光 .pdf

Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光 货号20117-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光     货号20117 货号 20117 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 493 Em (nm) 517
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞,胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 此Cell Meter 活细胞caspase 9活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 9活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 9活性,或用于筛选caspase 9抑制剂。 FAM-LEHD-FMK,绿色标记试剂,可通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的caspase 9。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 见表1
发射: 见表1
荧光显微镜  
激发: 见表1
发射: 见表1
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 见表2
发射: 见表2
通道: 黑色透明
读取模式: 底读模式

表1:参数信息

  流式细胞仪 荧光显微镜
FAM-LEHD-FMK 530/30 nm激光(FITC 通道) FITC 通道
碘化丙啶 610/20 nm激光 (PE-Texas Red 通道) TRITC 通道
hoechst 染料 450/40 nm激光(Pacific Blue 通道) DAPI 通道

表2:参数信息

  激发 发射 cutoff
FAM-LEHD-FMK 490nm 525nm 515nm
碘化丙啶 535nm 635nm  
hoechst 染料 350nm 461nm  

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。

注1:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

6.1对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

6.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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