StrandBrite 绿色RNA定量试剂*200X DMSO溶解 货号17611-AAT Bioquest荧光染料

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StrandBrite 绿色RNA定量试剂*200X DMSO溶解

StrandBrite 绿色RNA定量试剂*200X DMSO溶解

货号 17611 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 ml 价格 25836
Ex (nm) 509 Em (nm) 529
分子量 N/A 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

StrandBrite 绿色RNA定量试剂是美国AAT Bioquest生产的用于定量RNA的试剂,检测和定量少量RNA对于多种分子生物学程序极为重要,例如在进行Northern blot分析,S1核酸酶测定,RNase保护测定,cDNA文库制备,反向操作之前,测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度。转录PCR和差异展示PCR。测量核酸浓度最常用的技术是测定260 nm的吸光度。基于吸收率的方法的主要缺点是蛋白质,游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰。使用敏感的荧光核酸染色剂可缓解此干扰问题。StrandBrite RNA定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染料,用于定量溶液中的RNA。StrandBrite RNA定量试剂可通过荧光酶标仪或荧光计检测低至5 ng / mL的RNA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的StrandBrite 绿色RNA定量试剂。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

溶液配制

工作溶液配制

1.准备StrandBrite 工作溶液:

1.1  准备的水溶液工作溶液StrandBrite 绿色通过在TE浓缩DMSO溶液的200倍稀释液(在DEPC的10mM的Tris-HCl,1mM的EDTA,pH 7.5中经处理的水)。例如,添加50μL StrandBrite 绿色 至10mL TE缓冲液,以制备足够的工作溶液在200至100个测定样品 μ L终体积。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注意1:我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液,因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注意2:为获得最佳结果,应在准备后的几个小时内使用此溶液。

 

标准液配制:

1.准备RNA标准液的系列稀释液(0到1µg / mL ):

1.1准备一个100 μ 克/ mL储备在RNA的溶液DEPC处理过的水。

1.2添加10μL 100 μ 克/毫升RNA储备溶液(来自步骤2.1) ,以490 μ 大号测定缓冲液(成分B)为具有2 微克/ mL的RNA溶液,然后执行1:2系列稀释来获得1000, 500、250、125、62.5、31.3、15.6和0 ng / mL。

1.3如表1和表2所述,将RNA标准品和含RNA 的测试样品添加到96孔黑色固体微孔板中。

 

表1黑色固体96孔微孔板中RNA标准品和测试样品的布局

BL BL TS TS
RS1 RS1
RS2 RS2
RS3 RS3    
RS4 RS4    
RS5 RS5    
RS6 RS6    
RS7 RS7    

注:RS = RNA 标准;BL =空白控制;TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

RNA标准 空白对照 测试样品
连续稀释(100ul) TL:100ul 100ul

注:将从15.6到1000 ng / mL的RNA标准品的系列稀释液一式两份地添加到DS1到DS7的孔中。

 

运行dsDNA 分析:

1.将100μLStrandBrite Green工作溶液(来自步骤2)添加到RNA标准品,空白对照和测试样品(参见步骤3)的每个孔中,以使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔添加25μL样品和25μLStrandBrite Green工作溶液。

2.在避光的条件下,将反应在室温下孵育5至10分钟。

3.用分光荧光计在Ex / Em = 490/525 nm (在515 nm 处截止)监测荧光的增加。

注意:为使光漂白效应最小化,请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。

4.用空白孔(仅含测定缓冲液)中的荧光作为对照,并从具有RNA标准液或测试样品的比色皿中减去。RNA样品的浓度根据RNA标准曲线测定。

 

参考文献

Inhibitors of Streptococcus pneumoniae surface endonuclease EndA discovered by high-throughput screening using a PicoGreen fluorescence assay
Authors: Peterson EJ, Kireev D, Moon AF, Midon M, Janzen WP, Pingoud A, Pedersen LC, Singleton SF.
Journal: J Biomol Screen (2013): 247

Validation of a PicoGreen-based DNA quantification integrated in an RNA extraction method for two-dimensional and three-dimensional cell cultures
Authors: Chen Y, Sonnaert M, Roberts SJ, Luyten FP, Schrooten J.
Journal: Tissue Eng Part C Methods (2012): 444

Characterization of PicoGreen interaction with dsDNA and the origin of its fluorescence enhancement upon binding
Authors: Dragan AI, Casas-Finet JR, Bishop ES, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: Biophys J (2010): 3010

Comparison of SYBR Green I-, PicoGreen-, and [3H]-hypoxanthine-based assays for in vitro antimalarial screening of plants from Nigerian ethnomedicine
Authors: Abiodun OO, Gbotosho GO, Ajaiyeoba EO, Happi CT, Hofer S, Wittlin S, Sowunmi A, Brun R, Oduola AM.
Journal: Parasitol Res (2010): 933

Metal-enhanced PicoGreen fluorescence: application to fast and ultra-sensitive pg/ml DNA quantitation
Authors: Dragan AI, Bishop ES, Casas-Finet JR, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: J Immunol Methods (2010): 95

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen dye
Authors: Moreno LA, Cox KL.
Journal: J Vis Exp. (2010)

Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain “PicoGreen”
Authors: Ikeda Y, Iwakiri S, Yoshimori T.
Journal: J Pharm Biomed Anal (2009): 997

Enhanced DNA dynamics due to cationic reagents, topological states of dsDNA and high mobility group box 1 as probed by PicoGreen
Authors: Noothi SK, Kombrabail M, Kundu TK, Krishnamoorthy G, Rao BJ.
Journal: FEBS J (2009): 541

Factors affecting quantification of total DNA by UV spectroscopy and PicoGreen fluorescence
Authors: Holden MJ, Haynes RJ, Rabb SA, Satija N, Yang K, Blasic JR, Jr.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 7221

Label-free DNA sequence detection with enhanced sensitivity and selectivity using cationic conjugated polymers and PicoGreen
Authors: Ren X, Xu QH.
Journal: Langmuir (2009): 43

说明书
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ReadiUse 病毒RNA裂解缓冲液 货号60016-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiUse 病毒RNA裂解缓冲液

ReadiUse 病毒RNA裂解缓冲液

货号 60016 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 500 ML 价格 11988
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:60016

产品名称:ReadiUse 病毒RNA裂解缓冲液

规格:500ml

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:24个月

 

产品介绍

目前对SARS-CoV-2的RT-PCR测试需求导致了全球范围内RNA提取试剂盒的短缺。提取试剂盒制造商和医院所需的关键缺失组分是RNA裂解缓冲液。这种RediUse 病毒RNA裂解缓冲液可以用作Roche MagNA Pure 96外部裂解缓冲液(#:06374913001),BiomérieuxNuclisens裂解缓冲液(#:280134)和Qiagen Buffer RNAeasy裂解缓冲液(#:79216)的替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的ReadiUse 病毒RNA裂解缓冲液。 

 

参考文献

Cell Lysis Based on an Oscillating Microbubble Array.
Authors: Liu, Xiufang and Li, Jinyuan and Zhang, Liangyu and Huang, Xiaowei and Farooq, Umar and Pang, Na and Zhou, Wei and Qi, Lin and Xu, Lisheng and Niu, Lili and Meng, Long
Journal: Micromachines (2020)

Lysis of a Lactococcus lactis Dipeptidase Mutant and Rescue by Mutation in the Pleiotropic Regulator CodY.
Authors: Huang, Chenxi and Hernandez-Valdes, Jhonatan A and Kuipers, Oscar P and Kok, Jan
Journal: Applied and environmental microbiology (2020)

PTPN21-CDSlong isoform inhibits the response of acute lymphoblastic leukemia cells to NK-mediated lysis via the KIR/HLA-I axis.
Authors: Wang, Huafang and Zhu, Ni and Ye, Xiaohang and Wang, Limengmeng and Wang, Binsheng and Shan, Wei and Lai, Xiaoyu and Tan, Yamin and Fu, Shan and Xiao, Haowen and Huang, He
Journal: Journal of cellular biochemistry (2020): 3298-3312

Schistosoma mansoni glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase enhances formation of the blood-clot lysis protein plasmin.
Authors: Pirovich, David B and Da’dara, Akram A and Skelly, Patrick J
Journal: Biology open (2020)

Comparison of the efficiency of different cell lysis methods and different commercial methods for RNA extraction from Candida albicans stored in RNAlater.
Authors: Rodríguez, Antonio and Vaneechoutte, Mario
Journal: BMC microbiology (2019): 94

Epithelial ovarian cancer stem‑like cells are resistant to the cellular lysis of cytokine‑induced killer cells via HIF1A‑mediated downregulation of ICAM‑1.
Authors: Bu, Shixia and Li, Boning and Wang, Qian and Gu, Tingting and Dong, Qianggang and Miao, Xiaofei and Lai, Dongmei
Journal: International journal of oncology (2019): 179-190

Extended direct lysis method for virus detection on berries including droplet digital RT-PCR or real time RT-PCR with reduced influence from inhibitors.
Authors: Sun, Baojian and Bosch, Albert and Myrmel, Mette
Journal: Journal of virological methods (2019): 113638

High-resolution studies of lysis-lysogeny decision-making in bacteriophage lambda.
Authors: Shao, Qiuyan and Trinh, Jimmy T and Zeng, Lanying
Journal: The Journal of biological chemistry (2019): 3343-3349

Transcriptomic responses of the marine cyanobacterium Prochlorococcus to viral lysis products.
Authors: Fang, Xiaoting and Liu, Yaxin and Zhao, Yao and Chen, Yue and Liu, Riyue and Qin, Qi-Long and Li, Gang and Zhang, Yu-Zhong and Chan, Wan and Hess, Wolfgang R and Zeng, Qinglu
Journal: Environmental microbiology (2019): 2015-2028

scFTD-seq: freeze-thaw lysis based, portable approach toward highly distributed single-cell 3′ mRNA profiling.
Authors: Dura, Burak and Choi, Jin-Young and Zhang, Kerou and Damsky, William and Thakral, Durga and Bosenberg, Marcus and Craft, Joe and Fan, Rong
Journal: Nucleic acids research (2019): e16

说明书
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Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒 绿色荧光 货号22630-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒 绿色荧光

Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒 绿色荧光

Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒 绿色荧光     货号22630 货号 22630 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) 509 Em (nm) 529
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于标记活细胞的试剂盒,对活细胞中的RNA分子进行检测和成像对于多种分子生物学程序极为重要,包括物理运输,遗传信息解释,基因表达调控和某些重要的生物催化作用。 在活细胞中染色RNA的主要挑战是DNA造成的干扰。 为了解决该困难,开发了新型绿色荧光染料作为RNA选择性探针。 AAT Bioquest的Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒包括StrandBrite RNA Green,因为它能特异性结合细胞中的RNA。 与用于体内RNA染色的商用SYTO®RNA Select染料相比,StrandBrite RNA Green显示出更亮的信号和对RNA的更好的选择性。 此外,该试剂盒可对活细胞和固定细胞中的RNA进行染色。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒。

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: 490nm
发射: 520nm
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: FITC滤波片

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞
2.添加StrandBrite RNA Green工作溶液
3.孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 490/520 nm(FITC滤光片组)的荧光显微镜下分析细胞

 

样品示例及操作

1.根据特定的诱导方案将细胞培养至最适合成像的密度(约1-2×104个细胞/孔/ 96孔板)。

2.对于活细胞:将室温下用培养基或活细胞染色缓冲液(组分B)中稀释400倍的StrandBrite RNA Green(组分A)孵育细胞30-60分钟(100 µL /孔)。注意:25 µL StrandBrite RNA Green(组分A)足以容纳一个96孔板。避光并避免重复的冻融循环。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。有关详细信息,请参见图1。

3.对于固定细胞:在室温下用纯甲醇固定细胞1分钟,然后用PBS洗涤。将细胞浸入1%Triton-100中2分钟,然后用PBS洗涤两次。在室温下,用PBS中1X浓度的StrandBrite RNA Green(组分A)孵育细胞15-30分钟。注意:建议增加标记浓度或孵育时间,以使染料在细胞未充分染色的情况下积累。有关详细信息,请参见图1。

4.(可选)用PBS洗涤细胞1-2次,然后向每个孔中加入100 µL PBS。

5.使用荧光显微镜在Ex / Em = 490/520 nm(FITC通道)上监控荧光强度。

 

Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒 绿色荧光     货号22630

图1. HeLa细胞中RNA染色的荧光图像。 (A)使用Cell Navigator 活细胞RNA成像试剂盒(绿色,目录号22630)对活细胞染色,并用Hoechst 33342(蓝色,目录号17530)复染。 (B)使用相同试剂盒将固定在甲醇中的细胞染色。 (C)染色后,将固定的HeLa细胞与0.5 mg / mL RNase在37ºC下孵育1小时。 RNase消化测试的图像表明StrandBrite RNA Green具有很高的选择性。 使用带有FITC滤光片的荧光显微镜测量绿色荧光信号。

 
 
 
相关产品
 
产品名称 货号
Cell Navigator 活细胞微管蛋白染色试剂盒 Cat#23170

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StrandBrite 绿色RNA定量试剂 200X DMSO溶解 货号17610-AAT Bioquest荧光染料

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StrandBrite 绿色RNA定量试剂 200X DMSO溶解

StrandBrite 绿色RNA定量试剂 200X DMSO溶解

货号 17610 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 ml 价格 3924
Ex (nm) 509 Em (nm) 529
分子量 N/A 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

StrandBrite 绿色RNA定量试剂是美国AAT Bioquest生产的用于定量RNA的试剂,检测和定量少量RNA对于多种分子生物学程序极为重要,例如在进行Northern blot分析,S1核酸酶测定,RNase保护测定,cDNA文库制备,反向操作之前,测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度。转录PCR和差异展示PCR。测量核酸浓度最常用的技术是测定260 nm的吸光度。基于吸收率的方法的主要缺点是蛋白质,游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰。使用敏感的荧光核酸染色剂可缓解此干扰问题。StrandBrite RNA定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染料,用于定量溶液中的RNA。StrandBrite RNA定量试剂可通过荧光酶标仪或荧光计检测低至5 ng / mL的RNA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的StrandBrite 绿色RNA定量试剂。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
孔板: 纯黑色

产品说明书

样品实验方案

溶液配制

工作溶液配制

1.准备StrandBrite 工作溶液:

1.1  准备的水溶液工作溶液StrandBrite 绿色通过在TE浓缩DMSO溶液的200倍稀释液(在DEPC的10mM的Tris-HCl,1mM的EDTA,pH 7.5中经处理的水)。例如,添加50μL StrandBrite 绿色 至10mL TE缓冲液,以制备足够的工作溶液在200至100个测定样品 μ L终体积。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注意1:我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液,因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注意2:为获得最佳结果,应在准备后的几个小时内使用此溶液。

 

标准液配制:

1.准备RNA标准液的系列稀释液(0到1µg / mL ):

1.1准备一个100 μ 克/ mL储备在RNA的溶液DEPC处理过的水。

1.2添加10μL 100 μ 克/毫升RNA储备溶液(来自步骤2.1) ,以490 μ 大号测定缓冲液(成分B)为具有2 微克/ mL的RNA溶液,然后执行1:2系列稀释来获得1000, 500、250、125、62.5、31.3、15.6和0 ng / mL。

1.3如表1和表2所述,将RNA标准品和含RNA 的测试样品添加到96孔黑色固体微孔板中。

 

表1黑色固体96孔微孔板中RNA标准品和测试样品的布局

BL BL TS TS
RS1 RS1
RS2 RS2
RS3 RS3    
RS4 RS4    
RS5 RS5    
RS6 RS6    
RS7 RS7    

注:RS = RNA 标准;BL =空白控制;TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

RNA标准 空白对照 测试样品
连续稀释(100ul) TL:100ul 100ul

注:将从15.6到1000 ng / mL的RNA标准品的系列稀释液一式两份地添加到DS1到DS7的孔中。

 

运行dsDNA 分析:

1.将100μLStrandBrite Green工作溶液(来自步骤2)添加到RNA标准品,空白对照和测试样品(参见步骤3)的每个孔中,以使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔添加25μL样品和25μLStrandBrite Green工作溶液。

2.在避光的条件下,将反应在室温下孵育5至10分钟。

3.用分光荧光计在Ex / Em = 490/525 nm (在515 nm 处截止)监测荧光的增加。

注意:为使光漂白效应最小化,请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。

4.用空白孔(仅含测定缓冲液)中的荧光作为对照,并从具有RNA标准液或测试样品的比色皿中减去。RNA样品的浓度根据RNA标准曲线测定。

 

参考文献

Inhibitors of Streptococcus pneumoniae surface endonuclease EndA discovered by high-throughput screening using a PicoGreen fluorescence assay
Authors: Peterson EJ, Kireev D, Moon AF, Midon M, Janzen WP, Pingoud A, Pedersen LC, Singleton SF.
Journal: J Biomol Screen (2013): 247

Validation of a PicoGreen-based DNA quantification integrated in an RNA extraction method for two-dimensional and three-dimensional cell cultures
Authors: Chen Y, Sonnaert M, Roberts SJ, Luyten FP, Schrooten J.
Journal: Tissue Eng Part C Methods (2012): 444

Characterization of PicoGreen interaction with dsDNA and the origin of its fluorescence enhancement upon binding
Authors: Dragan AI, Casas-Finet JR, Bishop ES, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: Biophys J (2010): 3010

Comparison of SYBR Green I-, PicoGreen-, and [3H]-hypoxanthine-based assays for in vitro antimalarial screening of plants from Nigerian ethnomedicine
Authors: Abiodun OO, Gbotosho GO, Ajaiyeoba EO, Happi CT, Hofer S, Wittlin S, Sowunmi A, Brun R, Oduola AM.
Journal: Parasitol Res (2010): 933

Metal-enhanced PicoGreen fluorescence: application to fast and ultra-sensitive pg/ml DNA quantitation
Authors: Dragan AI, Bishop ES, Casas-Finet JR, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: J Immunol Methods (2010): 95

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen dye
Authors: Moreno LA, Cox KL.
Journal: J Vis Exp. (2010)

Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain “PicoGreen”
Authors: Ikeda Y, Iwakiri S, Yoshimori T.
Journal: J Pharm Biomed Anal (2009): 997

Enhanced DNA dynamics due to cationic reagents, topological states of dsDNA and high mobility group box 1 as probed by PicoGreen
Authors: Noothi SK, Kombrabail M, Kundu TK, Krishnamoorthy G, Rao BJ.
Journal: FEBS J (2009): 541

Factors affecting quantification of total DNA by UV spectroscopy and PicoGreen fluorescence
Authors: Holden MJ, Haynes RJ, Rabb SA, Satija N, Yang K, Blasic JR, Jr.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 7221

Label-free DNA sequence detection with enhanced sensitivity and selectivity using cationic conjugated polymers and PicoGreen
Authors: Ren X, Xu QH.
Journal: Langmuir (2009): 43

说明书
StrandBrite 绿色RNA定量试剂 200X DMSO溶解 .pdf

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 货号17656-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒    货号17656 货号 17656 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) 509 Em (nm) 529
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的RNA检测试剂盒,检测和定量少量RNA对于各种分子生物学程序非常重要,例如测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度,然后进行Northern印迹分析,S1核酸酶测定,RNase保护测定,cDNA文库制备,反向转录PCR和差异显示PCR。最常用的测量核酸浓度的技术是测定260nm处的吸光度。基于吸光度的方法的主要缺点是由蛋白质,游离核苷酸和其他UV吸收化合物引起的干扰。使用敏感的荧光核酸染色可以缓解这种干扰问题。 StrandBrite RNA定量试剂是一种超灵敏荧光核酸染色剂,用于定量溶液中的RNA。 StrandBrite RNA定量试剂可使用荧光酶标仪或荧光分光光度计检测低至1.4 ng / mL的RNA。我们的StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒包括我们的StrandBrite 绿色核酸染色,具有优化且稳健的方案。它提供了一种方便的方法来量化溶液中的RNA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 。 

 

适用仪器


荧光分光光度计  
激发: 490nm
发射: 545nm
cutoff: 515nm

产品说明书

96孔板检测示例

操作步骤

以下方案是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 打开前让所有组件升温至室温。处理所有材料时,务必使用干净的一次性手套 使用无核酸酶水和无菌一次性聚丙烯塑料制品进行试剂制备。

注意:没有数据可用于解决StrandBrite Green RNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合,所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理,并进行适当的处理。 应谨慎处理DMSO储备溶液,因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

 

1.准备1X测定缓冲液

通过用无菌,蒸馏,无核酸酶的水稀释浓缩的缓冲液20X(组分B)来制备1X测定缓冲液。

 

2.准备StrandBrite 绿色工作溶液

通过在1X测定缓冲液中将浓缩的DMSO溶液稀释200倍来制备StrandBrite Green工作溶液。例如,将50μLStrandBrite Green(组分A)加入10 mL 1X测定缓冲液中(来自步骤1)。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1:我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备,因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2:为获得最佳结果,该溶液应在制备后几小时内使用。

 

3.准备RNA标准品的连续稀释液(0至1μg/ mL):

3.1将10μL100μg/ mL RNA原液(组分C)加入990μL分析缓冲液(组分B)中,得到1μg/ mL RNA溶液,然后进行1:3连续稀释,得到约1000,300, 100,30,10,3,1和0 ng / mL。

注意:未使用的核糖体RNA标准品(组分C)应在无核酸酶的塑料瓶中分成单次使用的等分试样,并储存在-20℃。

3.2如说明书中表1和2中所述,将RNA标准品和含有测试样品的RNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

 

4.运行RNA测定:

4.1将100μLStrandBrite 绿色工作溶液(来自步骤2)添加到RNA标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤3)中,使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLStrandBrite 绿色工作溶液。

4.2在室温下孵育反应2至5分钟,避光。

4.3使用荧光分光光度计在Ex / Em = 490 / 545nm(515nm处的截止值)下观察荧光增加。

注意:为尽量减少光漂白,请保持所有样品的荧光测量时间不变。

4.4空白孔中的荧光(仅含测定缓冲液)用作对照,并从具有RNA标准品或测试样品的那些比色皿的值中减去。根据RNA标准曲线确定样品的RNA浓度。

 

参考文献

Inhibitors of Streptococcus pneumoniae surface endonuclease EndA discovered by high-throughput screening using a PicoGreen fluorescence assay
Authors: Peterson EJ, Kireev D, Moon AF, Midon M, Janzen WP, Pingoud A, Pedersen LC, Singleton SF.
Journal: J Biomol Screen (2013): 247

Validation of a PicoGreen-based DNA quantification integrated in an RNA extraction method for two-dimensional and three-dimensional cell cultures
Authors: Chen Y, Sonnaert M, Roberts SJ, Luyten FP, Schrooten J.
Journal: Tissue Eng Part C Methods (2012): 444

Characterization of PicoGreen interaction with dsDNA and the origin of its fluorescence enhancement upon binding
Authors: Dragan AI, Casas-Finet JR, Bishop ES, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: Biophys J (2010): 3010

Comparison of SYBR Green I-, PicoGreen-, and [3H]-hypoxanthine-based assays for in vitro antimalarial screening of plants from Nigerian ethnomedicine
Authors: Abiodun OO, Gbotosho GO, Ajaiyeoba EO, Happi CT, Hofer S, Wittlin S, Sowunmi A, Brun R, Oduola AM.
Journal: Parasitol Res (2010): 933

Metal-enhanced PicoGreen fluorescence: application to fast and ultra-sensitive pg/ml DNA quantitation
Authors: Dragan AI, Bishop ES, Casas-Finet JR, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: J Immunol Methods (2010): 95

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen dye
Authors: Moreno LA, Cox KL.
Journal: J Vis Exp. (2010)

Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain “PicoGreen”
Authors: Ikeda Y, Iwakiri S, Yoshimori T.
Journal: J Pharm Biomed Anal (2009): 997

Enhanced DNA dynamics due to cationic reagents, topological states of dsDNA and high mobility group box 1 as probed by PicoGreen
Authors: Noothi SK, Kombrabail M, Kundu TK, Krishnamoorthy G, Rao BJ.
Journal: FEBS J (2009): 541

Factors affecting quantification of total DNA by UV spectroscopy and PicoGreen fluorescence
Authors: Holden MJ, Haynes RJ, Rabb SA, Satija N, Yang K, Blasic JR, Jr.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 7221

Label-free DNA sequence detection with enhanced sensitivity and selectivity using cationic conjugated polymers and PicoGreen
Authors: Ren X, Xu QH.
Journal: Langmuir (2009): 43

 

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