Screen Quest 大麻素受体表达细胞株

	货号	38001	存储条件	在零下80度以下保存
	规格	Each	价格	0
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：38001

产品名称：Screen Quest 大麻素受体表达细胞株

规格：Each

产品介绍

G蛋白偶联受体（GPCR）是药物发现计划针对的最大受体类别之一。钙通量（通过Gq途径耦合）测定法是药物发现中筛选GPCR靶标的首选方法。但是，超过60％的已知GPCR通过与cAMP偶联的腺苷酸环化酶活性发出信号。大多数现有的cAMP分析不仅需要细胞裂解，而且缺乏时间和空间分辨率。 Screen Quest 大麻素受体表达细胞株能够研究通常不通过细胞内钙偶联的GPCR。 Screen Quest 大麻素受体表达细胞株基于一系列G蛋白嵌合体，包括混杂G蛋白Gα16和外源性环状核苷酸门控通道（CNGC）。嵌合体由Gq蛋白复合物的α亚基组成，该复合物的5个羧基末端氨基酸已被其他G蛋白之一（Gαs，Gαi，Gαo或Gαz）取代。这些氨基酸负责受体与其G蛋白的偶联。这些嵌合体或CNGC与特定的非Gq偶联受体共表达可能会在受体刺激后导致细胞内钙信号的产生。 Screen Quest HEK-CNGC-大麻素受体1（CB1）细胞系是用CNGC和人类大麻素受体稳定转染的HEK-293细胞。细胞中组成型表达的CNGC通过协调改变阳离子通量（例如钙，钾或钠）实时响应细胞内cAMP水平的升高或降低。可以使用钙敏感的荧光指示剂（例如Calbryte 520 AM，Cal-520 AM，Fluo-8 AM或Fluo-4 AM和相应的免洗钙试剂盒）检测特定配体对这些细胞中CB1的激活。或AAT优化的膜电位测定试剂盒。该细胞系已成功用于药物发现和筛选环境中，以研究通常不通过细胞内钙偶联的GPCR。它已被FLIPR和FDSS系统有效使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 大麻素受体表达细胞株。 

图示

图1. Screen Quest 活细胞cAMP测定原理

图2.HEK-CB1细胞和亲代细胞对CP-55940的反应。 将HEK-CB1细胞和亲本细胞均在Poly-D-赖氨酸包被的黑色384孔板中以20 µL /孔的培养基铺板过夜。 将细胞与等体积（20 µL）的MP染料工作溶液在室温下孵育2小时。 在添加CP-55940之前和之后50分钟获得了两个读数。 图中绘制了两个读数的比率（F / F0）。 A：HEK-CB1细胞系中CP-55940的剂量反应曲线。 在PDE抑制剂Ro20-1724和β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素存在下，EC50 = 53 nM。 B：亲代细胞对CP-55940无反应。

参考文献

A cardiac mitochondrial cAMP signaling pathway regulates calcium accumulation, permeability transition and cell death
Authors: Wang Z, Liu D, Varin A, Nicolas V, Courilleau D, Mateo P, Caubere C, Rouet P, Gomez AM, V and ecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.
Journal: Cell Death Dis (2016): e2198

Activation of P2X7 and P2Y11 purinergic receptors inhibits migration and normalizes tumor-derived endothelial cells via cAMP signaling
Authors: Avanzato, D and Genova, T and Pla, A Fiorio and Bernardini, M and Bianco, S and Bussolati, B and Mancardi, D and Giraudo, E and Maione, F and Cassoni, P and others
Journal: Scientific Reports (2016)

Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
Authors: Alqurashi M, Gehring C, Marondedze C.
Journal: Int J Mol Sci (2016): 852

Odor-induced cAMP production in Drosophila melanogaster olfactory sensory neurons
Authors: Miazzi F, Hansson BS, Wicher D.
Journal: J Exp Biol (2016): 1798

Role of the cAMP Pathway in Glucose and Lipid Metabolism
Authors: Ravnskjaer K, Madiraju A, Montminy M.
Journal: Handb Exp Pharmacol (2016): 29

The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
Authors: Almahariq M, Mei FC, Cheng X.
Journal: Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) (2016): 75

cAMP-Induced Histones H3 Dephosphorylation Is Independent of PKA and MAP Kinase Activations and Correlates With mTOR Inactivation
Authors: Rodriguez P, Rojas J.
Journal: J Cell Biochem (2016): 741

A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors
Authors: Vedel L, Brauner-Osborne H, Mathiesen JM.
Journal: J Biomol Screen (2015): 849

Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
Journal: Circ Res (2015): 707

Cardiac cAMP: production, hydrolysis, modulation and detection
Authors: Boularan C, Gales C.
Journal: Front Pharmacol (2015): 203

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

	货号	36550	存储条件	Multiple
	规格	1 Plate	价格	2604
	Ex (nm)	495	Em (nm)	516
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

钾（K⁺）离子通道在调节基本生物过程（包括心率，激素和神经递质分泌，水和电解质平衡）中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐，疼痛，糖尿病，神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl ⁺通过K⁺通道的渗透性已被广泛用于测定K⁺通道。表达目的K⁺通道的细胞（例如hERG，Kv1.3，Kir2.1，KATP）预先装有Tl⁺敏感染料。该染料是非荧光的，并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后，非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl⁺刺激缓冲液添加到细胞中时，Tl ⁺会流过K⁺通道并与Tl⁺敏感染料结合，从而产生荧光信号。该信号与K⁺通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞，则荧光信号分别降低或升高，以反映K⁺通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在37°C孵育1小时
4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
5. 加入Tl₂SO₄ / K₂SO₄刺激溶液（96孔板为50 µL /孔，384孔板为12.5 µL /孔）
6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液：将20 µL（#36550）或DMSO（#36551和＃36552）的DMSO加到TI-520 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（组分B）添加到9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液（1X）：在8 mL的ddH₂O中加入2 mL的无氯缓冲液（5X）（组分D），并充分混合。

4. Tl₂SO₄溶液（未提供，Sigma Cat＃208191）：将Tl₂SO₄溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意：Tl₂SO₄有毒。 采取必要的预防措施，以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液：将20 µL TI-520 AM储备溶液（500X）加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液（5X）：在1X无氯化物缓冲液中用Tl₂SO₄稀释配体（用于非电压门控钾通道）或K₂SO₄（用于电压门控钾通道）。

表1.应针对每个靶标优化参考（HEK293-KCNH₂细胞中的电压门控hERG通道），Tl₂SO₄和K₂SO₄（电压门控钾通道）或配体（非电压门控钾通道）的浓度及细胞类型。

组分	容积	5X 浓度	最终浓度
无氯缓冲液(5X)	2 mL
K2SO4 (250 mM)	1 mL	25 mM	5 mM
TI2SO4 (80mM)	0.5 mL	4 mM	0.8 mM
ddH2O	5.5 mL
总计:	10 mL

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K⁺通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂（用于抑制研究）将板孵育30分钟。

5.用FLIPR，FDSS或Flexstation加50X /孔（对于96孔板）或12.5μL/孔（对于384孔板）的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑，并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM，0.5 mM，0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。