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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 货号36318-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

货号 36318 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 9216
Ex (nm) 493 Em (nm) 515
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供最强大的均相荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte -520NW，其可以穿过细胞膜。 Calbryte -520 NW是最适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内，Calbryte -520NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带电荷的荧光染料停留在细胞内，并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Calbryte -520NW的荧光。其优异的细胞保留特性，高灵敏度和100-250倍的荧光增加（当它与钙形成复合物时）使Calbryte -520NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte -520NW是唯一的钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了最优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他可用仪器：
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

分析方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte 520 NW染料加载溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意：使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

 

操作方法 

1.将20μL（Cat＃36317）或200μL（Cat＃36318和＃36319）DMSO加入到Calbryte 520 NW（组分A）的小瓶中并充分混合。

注意：20μLCalbryte 520 NW储备溶液足以用于一个平板。 如果管子密封，可以将未使用的Calbryte 520 NW储备溶液等分并在<-20℃下储存超过一个月。

注意：避光，避免反复冻融循环。

2.将9 mL HHBS（组分C，不包括在试剂盒Cat＃36319中）与1 mL 10X Pluronic F127 Plus（10X）（组分B）混合并充分混合。 

 

实验方案

1.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Calbryte 520NW染料加载溶液加入到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育15-30分钟。

注意：如果测定需要37°C，立即进行实验，无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.用HHBS或所需缓冲液制备复合板

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算ATP样品。我们建议使用在线四参数物流计算器。

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 货号36318

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体与ATP的荧光信号反应的比较。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 使用Screen Quest Calbryte 520不含Probenecid和WashFree钙测定试剂盒，FLIPR Calcium 4 Assay Kit和Fluo-4 Direct Calcium Assay试剂盒测量钙通量响应。 通过FlexStation 3添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

说明书
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Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株 货号38000-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株

Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株

Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株 货号38000 货号 38000 存储条件 在零下80度以下保存
规格 Each 价格 0
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：38000

产品名称：Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株

规格：Each

 

产品介绍

G蛋白偶联受体（GPCRs）是药物发现计划中最大的靶向受体之一。钙通量（通过Gq途径耦合）分析是筛选GPCR靶点的首选方法。然而，超过60%的已知GPCRs信号通过腺苷酸环化酶活性偶联到cAMP。现有的cAMP检测方法不仅需要细胞裂解，而且缺乏时间和空间分辨率。Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株能够研究不通过细胞内钙结合的GPCR。Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株以一系列G蛋白嵌合物为基础，包括混杂的G蛋白、Gα16和外源性环核苷酸门控通道（CNGC）。嵌合体由一个Gq蛋白复合物的α亚单位组成，其5个羧基末端氨基酸已被另一个G蛋白（Gαs、Gαi、Gαo或Gαz）的氨基酸所取代。这些氨基酸负责受体与其G蛋白的偶联。这些嵌合体或CNGC与特定的非Gq偶联受体的共表达可能在受体刺激下产生细胞内钙信号。Screen Quest HEK-CNGC胰淀素3受体（AMY3）细胞系是稳定转染人胰淀素3受体和CNGC受体的HEK-293细胞。细胞内组成性表达的CNGC通过协同改变阳离子通量（如钙、钾或钠）实时响应细胞内cAMP水平的增加或减少。可使用钙敏感荧光指示剂（如Calbryte 520 AM、Cal-520 AM、Fluo-8 AM或Fluo-4 AM和相应的免洗钙试剂盒）或AAT优化的膜电位测定试剂盒检测这些细胞中的AMY3的活化。该细胞系已成功应用于药物发现和筛选环境，用于研究不通过细胞内钙结合的GPCRs。它已有效地用于FLIPR和FDSS系统。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株。 

 

图示

Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株 货号38000

图1. Screen Quest 活细胞cAMP测定原理
Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株 货号38000

图2.HEK-AMY3细胞和亲代细胞对胰岛淀粉样多肽和降钙素的反应。 将HEK-Aym3细胞和亲本细胞均在Poly-D-赖氨酸包被的黑色384孔板中以20 µL /孔的培养基铺板过夜。 将细胞与等体积（20 µL）的MP染料工作溶液在室温下孵育2小时。 在添加大鼠胰岛淀粉样多肽或hCT之前和之后30分钟获得两个读数。 图中绘制了两个读数的比率（F / F0）。 A：大鼠胰岛淀粉样多肽和人降钙素在HEK-AMY3细胞系中的剂量反应曲线。 在存在PDE抑制剂Ro20-1724的情况下，rAmy的EC50 = 7.2 pM，hCT的EC50 = 934 pM。 B：大鼠胰岛淀粉样多肽和人降钙素在亲代细胞中的剂量反应曲线。 在存在PDE抑制剂Ro20-1724的情况下，rAmy的EC50 = 230 pM，hCT的EC50 = 28.7 pM

 

参考文献

A cardiac mitochondrial cAMP signaling pathway regulates calcium accumulation, permeability transition and cell death
Authors: Wang Z, Liu D, Varin A, Nicolas V, Courilleau D, Mateo P, Caubere C, Rouet P, Gomez AM, V and ecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.
Journal: Cell Death Dis (2016): e2198

Activation of P2X7 and P2Y11 purinergic receptors inhibits migration and normalizes tumor-derived endothelial cells via cAMP signaling
Authors: Avanzato, D and Genova, T and Pla, A Fiorio and Bernardini, M and Bianco, S and Bussolati, B and Mancardi, D and Giraudo, E and Maione, F and Cassoni, P and others
Journal: Scientific Reports (2016)

Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
Authors: Alqurashi M, Gehring C, Marondedze C.
Journal: Int J Mol Sci (2016): 852

Odor-induced cAMP production in Drosophila melanogaster olfactory sensory neurons
Authors: Miazzi F, Hansson BS, Wicher D.
Journal: J Exp Biol (2016): 1798

Role of the cAMP Pathway in Glucose and Lipid Metabolism
Authors: Ravnskjaer K, Madiraju A, Montminy M.
Journal: Handb Exp Pharmacol (2016): 29

The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
Authors: Almahariq M, Mei FC, Cheng X.
Journal: Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) (2016): 75

cAMP-Induced Histones H3 Dephosphorylation Is Independent of PKA and MAP Kinase Activations and Correlates With mTOR Inactivation
Authors: Rodriguez P, Rojas J.
Journal: J Cell Biochem (2016): 741

A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors
Authors: Vedel L, Brauner-Osborne H, Mathiesen JM.
Journal: J Biomol Screen (2015): 849

Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
Journal: Circ Res (2015): 707

Cardiac cAMP: production, hydrolysis, modulation and detection
Authors: Boularan C, Gales C.
Journal: Front Pharmacol (2015): 203

说明书
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Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系 货号38102-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系

Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系

货号 38102 存储条件 在零下80度以下保存
规格 Each 价格 0
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：38102

产品名称：Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系

规格：Each

 

适用仪器

其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

 

产品介绍

Screen Quest 细胞系是一系列细胞，已成功用于药物发现和筛选环境中，用于研究通常不通过细胞内钙偶联的G蛋白偶联受体（GPCR）。它已与FLIPR，FDSS系统有效结合，与许多受体的非Gq偶联成员结合使用，例如趋化因子，5-羟色胺，谷氨酸，多巴胺，阿片样物质，血管加压素以及α和β肾上腺素受体家族。超过60％的已知GPCR信号通过Gq以外的途径导致细胞内钙的增加，并且随着基因组学揭示出更多的G蛋白偶联受体靶标，这种趋势持续增加。 Screen Quest 细胞系用于研究通常不通过细胞内钙偶联的G蛋白偶联受体（GPCR）。 Screen Quest 细胞系基于一系列G蛋白嵌合体，包括混杂的G蛋白Gα16。嵌合体由Gq蛋白复合物的α亚基组成，该复合物的5个羧基末端氨基酸已被其他G蛋白之一（Gαs，Gαi，Gαo或Gαz）取代。这些氨基酸负责受体与其G蛋白的偶联。这些嵌合体与通常通过cAMP途径起作用的特定非Gq偶联受体的共表达可能会导致受体刺激后细胞内钙信号的产生。 Screen Quest CHO-Gqo细胞系是被嵌合Gqoα亚基蛋白稳定转染的CHO-K1细胞。当用作转染表达Gi偶联受体的宿主细胞时，细胞中组成型表达的Gqo蛋白可使正常通过cAMP途径起作用的转染受体与Gq信号转导和动员的细胞内钙偶联。可以使用钙敏感染料（例如Calbryte 520 AM，Cal-520 AM，Fluo-8 AM或Fluo-4 AM）和免洗的钙试剂盒检测特定配体对这些非Gq偶联受体的激活。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系。 

 

图示

Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系 货号38102

图1.用Cal-520®，AM（Cat＃21130）在CHO-Ga16-NOP细胞中测量了伤害感受肽刺激的钙反应。 将CHO-Ga16-NOP细胞以60,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 在含有20 mM Hepes缓冲液（HHBS）的Hanks中，将等体积（100 µL）的10 µMCal-520®AM和2 mM丙磺舒在37°C下孵育1小时。 用具有1 mM丙磺舒的HHBS代替Cal-520®AM上样溶液。 通过FlexStation（分子设备）添加了Nociceptin，以达到最终指示的浓度。

 

 

参考文献

A cardiac mitochondrial cAMP signaling pathway regulates calcium accumulation, permeability transition and cell death
Authors: Wang Z, Liu D, Varin A, Nicolas V, Courilleau D, Mateo P, Caubere C, Rouet P, Gomez AM, V and ecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.
Journal: Cell Death Dis (2016): e2198

Activation of P2X7 and P2Y11 purinergic receptors inhibits migration and normalizes tumor-derived endothelial cells via cAMP signaling
Authors: Avanzato, D and Genova, T and Pla, A Fiorio and Bernardini, M and Bianco, S and Bussolati, B and Mancardi, D and Giraudo, E and Maione, F and Cassoni, P and others
Journal: Scientific Reports (2016)

Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
Authors: Alqurashi M, Gehring C, Marondedze C.
Journal: Int J Mol Sci (2016): 852

Odor-induced cAMP production in Drosophila melanogaster olfactory sensory neurons
Authors: Miazzi F, Hansson BS, Wicher D.
Journal: J Exp Biol (2016): 1798

Role of the cAMP Pathway in Glucose and Lipid Metabolism
Authors: Ravnskjaer K, Madiraju A, Montminy M.
Journal: Handb Exp Pharmacol (2016): 29

The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
Authors: Almahariq M, Mei FC, Cheng X.
Journal: Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) (2016): 75

cAMP-Induced Histones H3 Dephosphorylation Is Independent of PKA and MAP Kinase Activations and Correlates With mTOR Inactivation
Authors: Rodriguez P, Rojas J.
Journal: J Cell Biochem (2016): 741

A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors
Authors: Vedel L, Brauner-Osborne H, Mathiesen JM.
Journal: J Biomol Screen (2015): 849

Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
Journal: Circ Res (2015): 707

Cardiac cAMP: production, hydrolysis, modulation and detection
Authors: Boularan C, Gales C.
Journal: Front Pharmacol (2015): 203

说明书
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