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Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒 *适合于难检测细胞系* 货号36308-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒 *适合于难检测细胞系*

Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒 *适合于难检测细胞系*

货号 36308 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 4584
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的钙检测试剂盒，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Fluo-8 NW，其可以穿过细胞膜。 Fluo-8 NW是可用于HTS筛选的最亮钙指示剂。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，产生带负电荷的荧光染料，其停留在细胞内，并且在与钙结合时其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Fluo-8 NW的荧光。其长波长，高灵敏度和100-250倍荧光增加的特性（当它与钙形成复合物时）使Fluo-8 NW成为测量细胞钙的理想指标。这个Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒。 

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 510nm
推荐孔板: 黑色
仪器使用: 底部读取模式/可编程液体处理
其他可用仪器：
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞
2.去除生长培养基
3.添加Fluo-8 NW染料工作溶液
4.在室温下孵育1小时
5.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Fluo-8 NW配制：
对于Cat No.36307，将10μLDMSO加入Fluo-8 NW（组分A）中，并充分混合。
对于Cat No.36308和36309，将100μLDMSO加入Fluo-8 NW（组分A）中，并充分混合。 注意：10μLFluo-8 NW原液足以容纳1个平板。

1.2分析缓冲液储备液（1X）：
对于Cat No.36307和36308，将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中并充分混合。
对于Cat No.36309，将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中并充分混合。 注意：对于一个平板，10 mL的1X分析缓冲液就足够了。

 

2.工作溶液配制

将10μLFluo-8 NW DMSO储备溶液加入10mL 1X测定缓冲液中并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

操作步骤

1.有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

2.从细胞板上除去生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以最大限度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。注意：或者，在含有0.5％至1％FBS的生长培养基中培养细胞，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中加入2X染料。 [我们为那些在生长培养基中使用0.5％至1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个独立的无洗涤钙测定试剂盒（目录号36315和目录号36316）。

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8NW染料工作溶液加入到细胞板中。

4.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。注意：如果测定需要37°C，立即进行实验，无需进一步室温孵育。注意：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞培养板1-2小时（建议培养时间不超过2小时。）

5.用HHBS或所需缓冲液制备复合板。

6.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。注意：在实验之前运行信号测试很重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使其信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU（Max-Min））用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算卡巴胆碱剂量样品。 

Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒 *适合于难检测细胞系* 货号36308

图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW Assay Kit和Fluo-4 NW Assay Kit在HEK-293细胞中测量Carbachol剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种在Costar黑壁/透明底96孔板中过夜。 除去生长培养基，使用Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒或Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）将细胞与100μL染料上样溶液一起在室温下孵育1小时 温度。 通过NOVOstar（BMG Labtech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到最终指示的浓度。 Fluo8 NW的EC50约为1.2μM。

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

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Journal: Scientific Reports (2017)

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Journal: Scientific reports (2017): 17093

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说明书
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Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36552-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36552 货号 36552 存储条件 Multiple
规格 100 Plates 价格 45684
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钾（K+）离子通道在调节基本生物过程（包括心率，激素和神经递质分泌，水和电解质平衡）中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐，疼痛，糖尿病，神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K+通道的渗透性已被广泛用于测定K+通道。表达目的K+通道的细胞（例如hERG，Kv1.3，Kir2.1，KATP）预先装有Tl+敏感染料。该染料是非荧光的，并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后，非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl+刺激缓冲液添加到细胞中时，Tl +会流过K+通道并与Tl+敏感染料结合，从而产生荧光信号。该信号与K+通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞，则荧光信号分别降低或升高，以反映K+通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 490nm
发射： 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式 底读模式
其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
  5. 加入Tl2SO4 / K2SO4刺激溶液（96孔板为50 µL /孔，384孔板为12.5 µL /孔）
  6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液：将20 µL（#36550）或DMSO（#36551和＃36552）的DMSO加到TI-520 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（组分B）添加到9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液（1X）：在8 mL的ddH2O中加入2 mL的无氯缓冲液（5X）（组分D），并充分混合。

4. Tl2SO4溶液（未提供，Sigma Cat＃208191）：将Tl2SO4溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意：Tl2SO4有毒。 采取必要的预防措施，以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液：将20 µL TI-520 AM储备溶液（500X）加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液（5X）：在1X无氯化物缓冲液中用Tl2SO4稀释配体（用于非电压门控钾通道）或K2SO4（用于电压门控钾通道）。

表1.应针对每个靶标优化参考（HEK293-KCNH2细胞中的电压门控hERG通道），Tl2SO4和K2SO4（电压门控钾通道）或配体（非电压门控钾通道）的浓度及细胞类型。

组分

容积

5X 浓度

最终浓度

无氯缓冲液(5X)

2 mL

 

 

K2SO4 (250 mM)

1 mL

25 mM

5 mM

TI2SO4 (80mM)

0.5 mL

4 mM

0.8 mM

ddH2O

5.5 mL

 

 

总计:

10 mL

 

 

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K+通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂（用于抑制研究）将板孵育30分钟。

5.用FLIPR，FDSS或Flexstation加50X /孔（对于96孔板）或12.5μL/孔（对于384孔板）的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36552

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑，并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。
Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36552

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM，0.5 mM，0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。

 

 

说明书
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Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒 货号36305-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒

Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒

货号 36305 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 4584
Ex (nm) 437 Em (nm) 466
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。该试剂盒使用高度钙敏感和膜通透的腔肠素类似物作为用载脂蛋白基因转染细胞的钙指示剂。水母发光蛋白是来自维多利亚水母的钙敏感生物发光蛋白，已广泛用作细胞中的钙指示剂。当与钙离子结合时，水母发光蛋白复合物发出蓝光。发光强度与Ca 2+浓度成正比。我们的腔肠素试剂盒比荧光钙测定试剂盒（如Fluo-4，Fluo-3，Calcium-3和Calcium-4）灵敏得多。该试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

发光酶标仪  
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 通过去除生长培养基制备细胞
  2. 加入腔肠素装载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在室温下孵育3-4小时
  4. 检测水母发光蛋白的发光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1.腔肠素类似物：将250 µL 100％ETOH（组分B）加到腔肠素类似物（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：25 µL重组腔肠素类似物对于一块板就足够了。 如果将试管密封，则未使用的腔肠素类似物原液可在<-20℃下保存一个月以上。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36305（10板试剂盒），准备使用1X分析缓冲液（组分C）。b）对于 ＃36306（100板试剂盒），通过将10 mL的10X分析缓冲液（组分C）稀释到90 mL的HHBS缓冲液（试剂盒中未提供）中，制成1X分析缓冲液，并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 将未使用的1X分析缓冲液存储在4℃下。

 

工作溶液配制

腔肠素装载溶液：将25 µL ETOH重构的腔肠素类似物（储备溶液制备）添加到10 mL 1X分析缓冲液（储备溶液制备）中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时，并避免光照。

 

实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。 注意：重要的是去除生长培养基，以最大程度地减少化合物对血清或培养基的干扰。 注意：将细胞在含0.5-1％FBS的生长培养基中培养，以避免去除培养基的步骤。 在这种情况下，需要在1X缓冲液中装载2X腔肠素。

2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的腔肠素加载溶液添加到细胞板中。

3.在避光的条件下，于室温下孵育腔肠素装载板3-4小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过使用具有光电倍增管的封闭腔室的光子检测系统，检测水母发光蛋白的发光强度。 仪器必须完全排除外部光线。

 

图示

Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒 货号36305

图1. CHO-aeq细胞上的ATP剂量反应。 用载脂蛋白精稳定转染的CHO细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔接种在Costar白色96孔板中过夜。 除去生长培养基，并使用Screen Quest 腔肠素钙测定试剂盒将细胞与100 µL染料上载溶液一起在室温下孵育3小时，并避光。 由NOVOstar（BMG Labtech）添加ATP（25 µL /孔），以达到最终指示的浓度。 ATP的EC50约为0.8 µM。

 

 

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说明书
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Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒 货号36320-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

货号 36320 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Plates 价格 5244
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体（GPCR）药物发现的首选方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道激活引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fura-2AM预加载，Fura-2AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内，亲脂封闭基团Fura-2AM被酯酶裂解，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，其荧光波长在与钙结合时蓝移。当细胞受到激动剂刺激时，受体发出细胞内钙离子释放的信号，从而大大提高Fura-2在短波处的荧光强度。Fura-2的比色特性使该试剂盒成为比单波长Fluo-4更精确测定细胞钙浓度的理想工具。通过单次添加，该分析很容易在高透性环境中进行。该方法可用于96孔或384孔微孔板，且易于自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发: 340/380nm
发射: 510nm
cutoff: 470nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他可用仪器：
FDSS, FLIPR, FlexStation

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Fura-2 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在室温下孵育1-2小时
  4. 检测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fura-2 AM储备溶液：将200 µL DMSO加入小瓶Fura-2 AM（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL Fura-2 AM储备溶液足以装满一块板。 如果试管密封严密，可将未使用的Fura-2 AM储备溶液分装并在<-20℃下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36320（10板试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。
b）对于＃36321（100个板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X分析缓冲液。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fura-2 AM染料加载溶液：将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fura-2 AM染料加载溶液添加到细胞板中。 注意：如果您的化合物干扰血清，则需要用HHBS缓冲液代替生长培养基。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育20分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。 注意：在实验前进行信号测试非常重要。 不同的仪器具有各自的强度范围。 注意：对于在FDSS上进行的测定，请在仪器上对Fura-2钙测定使用标准滤波器。
 

图示

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒 货号36320

图1.用Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒测量的CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒在室温下孵育1小时。 通过FlexStation（分子设备）添加ATP（50 µL /孔）以达到最终指示的浓度。

 

 

参考文献

Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM
Authors: Barreto-Chang OL, Dolmetsch RE.
Journal: J Vis Exp. (2009)

Measurement of [Ca2+]i in whole cell suspensions using fura-2
Authors: Hirst RA, Harrison C, Hirota K, Lambert DG.
Journal: Methods Mol Biol (2006): 37

Load of calcium probe Fura -2/AM in Escherichia coli cells
Authors: Shao M, Wang HM, Liu ZH, Shen P, Cai RX.
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Abnormal spectra alteration observed in Triton calibration method for measuring [Ca2+]i with fluorescence indicator, fura-2
Authors: Xu T, Yang W, Huo XL, Song T.
Journal: J Biochem Biophys Methods (2004): 219

Fluorescence measurements of free [Mg2+] by use of mag-fura 2 in Salmonella enterica
Authors: Froschauer EM, Kolisek M, Dieterich F, Schweigel M, Schweyen RJ.
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Photonic crystal fibre enables short-wavelength two-photon laser scanning fluorescence microscopy with fura-2
Authors: McConnell G, Riis E.
Journal: Phys Med Biol (2004): 4757

Cytoplasmic calcium measurement in rotavirus enterotoxin-enhanced green fluorescent protein (NSP4-EGFP) expressing cells loaded with Fura-2
Authors: Berkova Z, Morris AP, Estes MK.
Journal: Cell Calcium (2003): 55

AMPA-induced Ca(2+) influx in cultured rat cortical nonpyramidal neurones: pharmacological characterization using fura-2 microfluorimetry
Authors: Fischer W, Franke H, Scheibler P, Allgaier C, Illes P.
Journal: Eur J Pharmacol (2002): 53

Purinergic receptors have different effects in rat exocrine pancreas. Calcium signals monitored by fura-2 using confocal microscopy
Authors: Novak I, Nitschke R, Amstrup J.
Journal: Cell Physiol Biochem (2002): 83

Measurement of [Ca2+]i in whole cell suspensions using fura-2
Authors: Hirst RA, Harrison C, Hirota K, Lambert DG.
Journal: Methods Mol Biol (1999): 31

说明书
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Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 货号36316-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 货号36316 货号 36316 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Plates 价格 39060
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒，Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的感兴趣的GPCR的细胞预加载有可以穿过细胞膜的Fluo-8 NW。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被酯酶裂解，导致带电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体发出细胞内钙的释放信号，这显着增加了Fluo-8 NW的荧光。 Fluo-8 NW具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，是测量细胞钙的理想指标。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒为监测G蛋白偶联受体和钙通道提供了一种优化的检测方法。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙检测试剂盒。

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适用仪器

荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 510nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他可用仪器：
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于粘附细胞：在生长培养基中将细胞过夜，对于96孔板，具有0.5-1％FBS，40,000至80,000个细胞/孔/100μL，或者对于384孔板，为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中（参见下面的步骤2.4），125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

 

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液：
2.1在使用前，在室温下1小瓶Fluo-8 NW（组分A），1瓶10XPluronic®F127Plus（组分B）和HHBS（组分C）。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL（Cat＃36314）或200μL（Cat＃36315和＃36316）DMSO到Fluo-8 NW（A组分）小瓶中，混匀。
注意：20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封，未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光，避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液：
一个）。对于Cat＃36314（1个试剂盒）和＃36315（10个试剂盒试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中制备1X测定缓冲液，并充分混合。

B）。对于Cat＃36316（100个试剂盒试剂盒），将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中，制成1X试剂缓冲液，并充分混合。
注意：对于一个平板，10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光，避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液：将20μLFluo-8 NW储备溶液（来自步骤2.2）加入10 mL 1X分析缓冲液（来自步骤2.3），并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行钙测定：
3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8 NW染料加载溶液（来自步骤2.4）加入到细胞板中。
注意：或者，在含有5-10％FBS的生长培养基中培养细胞以改善细胞生长。在这种情况下，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以最小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒（Cat＃36308和36309）]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：如果测定需要37℃，立即进行实验，无需进一步室温孵育。
注2：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1-2小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

参考文献

A Long-Acting PYY3–36 Analog Mediates Robust Anorectic Efficacy with Minimal Emesis in Nonhuman Primates
Authors: Shamina M Rangwala, Katharine D’Aquino, Yue-Mei Zhang, Lindsay Bader, Wilson Edwards, Songmao Zheng, Annette Eckardt, Ann Lacombe, Rebecca Pick, Veronica Moreno
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Prosocial effects of an oxytocin metabolite, but not synthetic oxytocin receptor agonists, in a mouse model of autism
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Human iPS cell-derived cardiac tissue sheets for functional restoration of infarcted porcine hearts
Authors: Masanosuke Ishigami, Hidetoshi Masumoto, Takeshi Ikuno, Takayuki Aoki, Masahide Kawatou, Kenji Minakata, Tadashi Ikeda, Ryuzo Sakata, Jun K Yamashita, Kenji Minatoya
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Structural characterization of agonist binding to protease-activated receptor 2 through mutagenesis and computational modeling
Authors: Amanda J Kennedy, Flavio Ballante, Johan R Johansson, Graeme Milligan, Linda Sundström, Anneli Nordqvist, Jens Carlsson
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2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

 

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