标签归档：探针

CytoFix 溶酶体红色探针 货号23210-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针 货号23210 货号 23210 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) Em (nm)
分子量 863.75 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

溶酶体是含有酸性水解酶的细胞器，它通过自噬来分解废物和细胞碎片。 AAT Bioquest提供CytoFix 溶酶体红色探针，可选择性地对溶酶体染色。 即使固定后，CytoFix 溶酶体红色探针也可以很好地保留在溶酶体中。 该探针会渗透完整的活细胞，并保留在溶酶体内。 这种染料在溶酶体中产生的荧光至少可以保留1周，使其成为极好的溶酶体示踪染料。 该探针的主要特征是其高染色效率，固定后可长时间保留并减少了人工操作时间。 CytoFix 溶酶体红色探针可与GFP表达的细胞或其他细胞器染色剂一起使用，进行多色分析。 它既可用于悬浮细胞，也可用于贴壁细胞，并易于适应各种荧光平台。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的CytoFix 溶酶体红色探针。

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： Cy3/TRITC滤波片
发射： Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板： 黑色透明
滤波片： Cy3/TRITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 将细胞与CytoFix LysoRed工作溶液在37°C下孵育20-30分钟
  4. 去除CytoFix LysoRed工作溶液
  5. 使用Cy3 / TRITC滤光片组在荧光显微镜下分析

 

溶液配制 

工作溶液配制

CytoFix LysoRed工作溶液：将20 µL储备溶液添加到10 mLHanks缓冲液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或自备缓冲液中，并充分混合。

注意：20 µL储备液足以进行一次96孔板分析。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

注意 未使用的CytoFix LysoRed储备溶液可以分装，并在≤-20°C下以较小的等分试样存储。 避光并避免重复的冻融循环。

 

实验步骤

 

1.在生长培养基中准备细胞。

2.去除细胞培养基并洗涤两次（可选）

3.在细胞培养板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的CytoFix LysoRed工作溶液

（注意细胞膜探针的最佳浓度因具体应用而异。）

4.避光保存，在37°C下孵育细胞20-30分钟。

5.除去每个孔中的工作溶液。 用HHBS或您自备缓冲液洗涤细胞一次（可选）。

6.可选：在室温下用4％甲醛将细胞固定20分钟。 洗涤细胞两次以除去任何固定液。

7.使用带有Cy3 / TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

 图示

 

CytoFix 溶酶体红色探针 货号23210

图1.在黑色96孔板上用CytoFix LysoRed染色的HeLa细胞的荧光图像。 在室温下用4％甲醛溶液定影（左）和（右）定影20分钟后获取图像。 使用带有Cy3 / TRITC滤光片的荧光显微镜对细胞成像。

 

说明书
CytoFix 溶酶体红色探针.pdf

钙离子荧光探针Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 货号20550-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*

钙离子荧光探针Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*

钙离子荧光探针Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 货号20550 货号 20550 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 495 Em (nm) 528
分子量 1096.95 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Fluo-4 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-4®和Rhod-4 系列钙检测试剂是最亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520 和Cal-590 具有最高的细胞内钙检测信号/背景比。AAT Bioquest以最高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： FITC
发射： FITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 490nm
发射： 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。 对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1） 丙磺舒为-2.5 mM，对于磺吡酮为0.1-0.25 mM，以减少去酯化指标的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注意1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注意2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书）。

 

试剂应用文献

14,15‐epoxyeicosatrienoic acid produced by cytochrome P450s enhances neurite outgrowth of PC12 and rat hippocampal neuronal cells
Authors: Oguro, Ami and Inoue, Takumi and Kudoh, Suguru N and Imaoka, Susumu
Journal: Pharmacology Research & Perspectives (2018): e00428

 

参考文献

14, 15-epoxyeicosatrienoic acid produced by cytochrome P450s enhances neurite outgrowth of PC 12 and rat hippocampal neuronal cells
Authors: Ami Oguro, Takumi Inoue, Suguru N Kudoh, Susumu Imaoka
Journal: Pharmacology Research & Perspectives (2018): e00428

Succinate, increased in metabolic syndrome, activates GPR91 receptor signaling in urothelial cells
Authors: Abubakr H Mossa, Monica Velasquez Flores, Philippe G Cammisotto, Lysanne Campeau
Journal: Cellular Signalling (2017)

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

说明书
钙离子荧光探针Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*.pdf

钙离子荧光探针Fluo-3,五铵盐 CAS 339221-91-9 货号21018-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-3,五铵盐 CAS 339221-91-9

钙离子荧光探针Fluo-3,五铵盐 CAS 339221-91-9

钙离子荧光探针Fluo-3,五铵盐 CAS 339221-91-9 货号21018 货号 21018 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 1944
Ex (nm) 507 Em (nm) 516
分子量 854.69 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Fluo-3和Rhod-2是可见光激发钙指示剂中最常用的。除非与Ca2 +结合，否则Fluo-3本质上是无荧光的，并且在饱和Ca2 +处的量子产率约为〜0.14，Ca2 +的Kd为390 nM。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Fluo-3,五钾盐 Cat#21017
钙离子荧光探针Fluo-3,五钠盐 Cat#21016

说明书
钙离子荧光探针Fluo-3,五铵盐 CAS 339221-91-9.pdf

钙离子荧光探针Cal-520 , AM 货号21130-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Cal-520 , AM

钙离子荧光探针Cal-520 , AM

钙离子荧光探针Cal-520 , AM 货号21130 货号 21130 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 493 Em (nm) 515
分子量 1102.95 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-520 , AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙在各种细胞中充当通用的第二信使。 生命的开始，受精行为，受Ca2+调节。 所有类型细胞的许多功能都被Ca2+或多或少地调节。 自20世纪20年代以来，科学家们一直试图测量Ca2+，但由于Ca2+探针的有限性，很少有人成功。 Ridgway和Ashley通过将发光蛋白水母发光蛋白注射到藤壶的巨大肌纤维中来进行Ca2+的首次可靠测量。 随后，在20世纪80年代，Tsien及其同事制作了各种荧光指示剂。 其中，基于荧光素的Ca2+试剂（如Fluo-3和Fluo-4）为测量Ca2+提供了值得信赖的方法。 自从这些Ca2+探针发展以来，对Ca2+相关的细胞内现象的研究已经飙升。

自从Fluo-3推出以来，Fluo-3成像及其类似物（如Fluo-4）揭示了Ca2+信号传导中许多基本过程的空间动力学。 Fluo-3和Fluo-4也已广泛用于流式细胞术和基于微孔板（如FLIPR）的钙检测。然而，对于染料提取物的弱信号和高剂量的丙磺舒需要限制了它们在一些细胞分析中的应用，特别是对于那些对丙磺舒敏感的GPCR和钙通道细胞系。我们开发了无色Cal-520系列钙检测试剂，以解决Fluo-3和Fluo-4的这些局限性。

Fluo-3和Fluo-4在细胞应用中最重要的特性是它们的吸收光谱与氩离子激光源在488nm激发相容，并且响应Ca2 +结合的荧光强度增加非常大。使用我们的Cal-520 Ca2+检测试剂保留了这两个有价值的特性。 Cal-520试剂的吸收和发射峰分别为490nm和514nm。它们可以用488nm的氩离子激光很好地激发，并且它们发射的荧光（波长514nm）随着Ca2+的增加而增加。确定Cal-520在与Ca2+结合后经历> 200倍的荧光增加。由于刺激后许多细胞中Ca2+的增加范围通常为5至10倍，因此Cal-520是在该区域中以高灵敏度使用的优异探针。 Cal-520的Kd估计为380nM（22℃，pH 7.0-7.5），但该值可能受pH，粘度和体内条件下结合蛋白的显着影响。

除了方便的488 nm激发波长和钙的大荧光增强外，与包括Fluo-3和Fluo-4在内的所有其他现有荧光钙指示剂相比，Cal-520具有更好的信号背景（S / B）比。此外，Cal-520对位于细胞膜中的有机阴离子转运蛋白具有更强的抵抗力，因此具有比Fluo-3和Flu-4更好的细胞保留特性。这一特性使Cal-520更适合HTS应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

钙离子荧光探针Cal-520 , AM 货号21130

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： FITC
发射： FITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 490nm
发射： 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

将Cal-520®，AM加载到活细胞中的方案

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM 丙磺舒溶液

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520®，AM原液
a.Cal-520®，AM的用量：1毫克
b.所需浓度：2 mM
c.在合适的容器中，将1mg的Cal-520，AM与453.33μL的无水DMSO混合。

3.使用10μMCal-520®，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
a.最终孔内浓度为Cal-520®，AM：5μM
b.Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
c.最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
d.在合适的容器中混合16μL的Cal-520，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。

注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520®的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的丙磺舒。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
a.该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至：5μMCal-520®，AM，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育
a.将添加染料的培养基在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
b.将添加染料的培养基在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM 丙磺舒，准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
a.在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM 丙磺舒。
a.首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
b.在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.实验观察
a.为您的样品添加所需的处理。
b.在Ex / Em = 492/514 nm进行观察。

 

附加信息

1 M NaOH配方：
1.在合适的容器中准备2 mL蒸馏水。
2.在混合下向溶液中缓慢加入100mg NaOH。
3.加入蒸馏水至体积为2.5 mL。
4.在室温下将溶液储存在塑料容器中。

注意：步骤2这是一个放热过程，应遵循适当的预防措施和指南。

 

10％Pluronic F-127配方：
1.将1克Pluronic®F-127（Cat#20050）溶解在10毫升蒸馏水中，制成10％（w / v）储备溶液。
2.在40至50℃的温度下加热10％Pluronic F-127储备溶液约30分钟。
3.根据其储存规格储存多余的10％Pluronic®F-127。

 

25 mM Probenecid配方：
1.在合适的容器中，将1小瓶（72mg）的丙磺舒（Cat＃20060）溶解在0.3mL的1M NaOH中。
2.加入HHBS或您选择的缓冲液，直至体积为10 mL。
3.根据其储存规格分装并储存任何未使用的25 mM 丙磺舒溶液。

 

重点提示：
1.可根据实验设置的需要和体积调整浓度。
2.Pluronic®F-127（PF-127）是一种非离子表面活性剂，对细胞无毒。 PF-127通常与染料一起使用AM酯改善其水溶性。
3.如果您的细胞含有有机体阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（0.5-1.0 mM）添加到染料工作溶液中减少脱酯化指标的泄漏。
4.细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。
5.如果孵育> 2小时，染料在一些细胞系上表现更好。

 

参考文献

In Neurobiology, Cal-520® AM has been used to study:
» Neuron single action potentials in neocortical neurons both in vitro and in vivo, and associated voltage-dependent calcium channels[1]
» Superior colliculus in mice in conjunction with two-photon calcium imaging to visualize retinal ganglion cells in the superficial lamina[2]
» Aldolase C compartments in mice, looking at complex spike synchrony and its relation to sensory processing in awake animals[3]
» Neural circuits in brain slice and whole brain preparation, specifically looking at individual action potentials in vivo[4]
» Ca2+ dependent cell signaling pathways using cultured human neuroblastoma SH-SY5Y cells and high-speed video-microscopy[5]

In Cell Signaling, Cal-520® AM has been used to study:
» Intracellular calcium in sperm using the microplate reader platform as a means to quantitating parameters such as motility[6]
» Calcium signaling pathways in meniscus fibrochondrocytes by way of visualizing calcium localization and concentration[7]
» Ca2+ mediated cellular signaling in relation to inositol triphosphate and its flux through gap junctions[8]
» Retinal wave-mediated formation of calcium transients in Müller glial cells with focus on expression of GCaMP3[9]
» Ca2+ signaling pathways in zebrafish sperm, specifically looking at calcium flux resulting from cGMP-induced hyperpolarization[10]

In Cardiology, Cal-520® AM has been used to study:
» Sarcoplasmic reticulum insofar as its role in cardiac excitation-contraction coupling and calcium spark events[11]
» Optical mapping of calcium in cardiac tissue slices to develop a framework for future investigations into calcium transients[12]
» Sodium-calcium exchanger functionality and mechanism with regards to burst pacemaker activity in knockout mice[13]
» Pacemaker modulation in embryonic heart as a function of inositol-1,4,5-triphosphate receptors[14]
» Calcium current and the role of potassium channel-interacting protein 2 (KChIP2) in mice with regards to heart failure[15]

 

相关产品

产品名称 货号
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 590, AM *细胞渗透性* Cat#20700

说明书
钙离子荧光探针Cal-520 , AM.pdf

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐 货号21088-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐 货号21088 货号 21088 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 796.53 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下，荧光探针显现出光谱响应，这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。在众多的被可见光激发的钙离子指示剂中，Fluo-3 和 Fluo-4是经常使用的。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解作用下，在活细胞中只产生中度荧光；并且需要更苛刻的细胞载入条件使它们细胞的钙离子响应最大化。Quest Fluo-8 是在保持了Fluo-3和Fluo-4便捷地光谱波长，最大激发光在~490 nm处，最大发生光在~520 nm处的同时，提高了细胞载入和钙离子响应能力。Quest Fluo-8 AM只需要在室温下完成细胞载入，而Fluo-3 AM 和Fluo-4 AM需要在37℃的条件下。此外，Quest Fluo-8 的荧光亮度是Fluo-4 AM的两倍，是Fluo-3 AM的四倍。AAT Bioquest提供一组不同凡响的Quest Fluo-8 试剂，它们与钙离子的结合力都不相同(Quest Fluo-8: Kd = 389 nM; Quest Fluo-8H: Kd = 232 nM; Quest Fluo-8L: Kd = 1.86nM; Quest Fluo-8FF: Kd = 10 nM)。我们也提供多种不同大小的包装以满足你们的特殊要求，例如1 mg; 10×50 ug; 20×50 ug;高通量筛选大包装，不需要您做任何包装剂量上的改变，可直接用于HTS高通量筛选实验分析。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

使用Fluo-8®AM酯类

1.使用Fluo-8®AM酯：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将Fluo-8®AM酯加入活细胞的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Fluo-8®AM酯原液。

b）在实验当天，将Fluo-8® 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或0.02％Pluronic®F-127的缓冲液中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用浓度范围为4-5 uM的Fluo-8®试剂。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小染料浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Fluo-8®AM 酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）在细胞培养箱中孵育或染料装载板室温下为20分钟至一小时。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）运行用Ex / Em比值=490/525纳米

 

使用Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒进行HTS应用

        可以通过直接测量受体介导的cAMP积累或细胞内Ca 2+浓度的变化来检测GPCR活化。通过Gq偶联的GPCR靶标产生细胞内Ca 2+的增加可以使用Fluo-8®试剂和荧光酶标仪的组合进行测量。荧光成像板读取器（例如，FLIPR TM，FDSS或BMG NovoStar ）具有冷却的CCD相机成像系统，其同时收集来自微孔板（96孔和384孔）的每个孔的信号。这些读板器可以以亚秒的间隔读取，这使得能够捕获响应的动力学，并且具有可以被编程用于连续液体添加的集成移液器。除了对GPCR靶标的强大应用外，我们的Screen Quest Fluo-8钙测定试剂盒还可用于表征钙离子通道和筛选钙离子通道靶向化合物。

 

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐 货号21088

图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW测定试剂盒和Fluo-4 NW测定试剂盒在HEK-293细胞中测量卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。除去生长培养基，并将细胞分别与100μL的Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒和Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）在室温下温育1小时。通过NOVOstar（BMG LabTech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到最终指示的浓度。Fluo-8 NW 的EC 50约为1.2 uM。

 

与基于Fluo-3或Fluo-4的其他商业钙测定试剂盒相比，我们的Screen Quest 钙测定试剂盒具有以下HTS应用优势：

  • 广泛的应用：与GPCR和钙通道目标一起使用。
  • 方便的光谱波长：最大激发波长@ 490 nm; 最大发射@ ~514 nm。
  • 灵活的染料加载：室温下的染料加载（而不是Fluo-4 AM所需的37ºC）。
  • 无需清洗，无淬火干扰您的目标。
  • 强大的性能：使用Fluo-4 AM或Fluo-3 AM无法进行钙分析。
  • 最强信号强度：比Fluo-4 AM亮2倍;比Fluo-3 AM亮4倍。

使用Fluo-8® 盐

        钙校准可以通过测量具有精确已知的游离Ca 2+浓度的溶液中的指示剂的盐形式（荧光酶标仪中25至50μM）的荧光强度来进行。可以基于30mM MOPS EGTA Ca 2+缓冲液使用校准溶液。通常，水含有微量的钙离子。强烈建议使用30 mM MOPS + 100 mM KCl，pH 7.2作为缓冲系统。可以简单地制备如下所列的0和39μM钙原液，这两种溶液用于制备不同Ca 2+浓度的连续溶液

A.0μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA

B.39μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA + 10mM CaCl 2

 

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

的[Ca] 游离 = K d [F─˚F 分钟 ] / F 最大 ─F]

其中F是特定实验钙水平下指示剂的荧光强度，F min是不存在钙时的荧光强度，F max是钙饱和探针的荧光强度。

 

解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的钙结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的K d值。通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或Triton®X-100可用于将指示剂暴露于受控Ca.2+水平的细胞外培养基。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431

P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

说明书
钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐.pdf