线粒体膜电位荧光探针JC-1 CAS 3520-43-2

	货号	22201	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	50 mg	价格	9948
	Ex (nm)	515	Em (nm)	530
	分子量	652.23	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

线粒体膜电位荧光探针JC-1是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂，JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体，并且随着线粒体膜电位增加（超过约80-100mV的值）可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形成导致发射光从530nm（即JC-1单体形式的发射）转变为590nm（即J-聚集形式的发射）。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-1的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。使用JC-1的主要优点是它可以提供定性信息，考虑到从绿色到橙色荧光发射的转变，以及定量信息，考虑到纯荧光强度，可以在FL1和FL2通道中检测到。除了广泛用于流式细胞仪外，JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用它的方案。尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些细胞系中具有甚至优于JC-1的性能。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

产品说明书

JC-1样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞

添加JC-1工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）在室温或37℃孵育1小时

移除JC-1工作溶液

读取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光强度

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

1.准备JC-1工作解决方案：

1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应及时使用原液; 应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备1X JC-1工作溶液：在实验当天，将JC-1固体溶解在DMSO中或将等分试样的JC-1储备溶液解冻至室温。 在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。 通过votexing很好地混合它们。

注意：JC-1不溶于水，因此它会在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到池中之前对其进行过滤。

2.用荧光酶标仪进行JC-1检测：

2.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-1工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-1装载板在37℃，5％CO2培养箱中培养15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

2.4从平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

2.5监测Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化以进行比率分析。

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定：

3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重悬细胞（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C下孵育10至30分钟，避光。

3.5用您选择的HHBS或缓冲液洗涤细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×10 5个细胞。

3.6用荧光显微镜（使用FITC和TRITC滤光片）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）观察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化。

参考文献

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Authors: Harshal Nemade, Umesh Chaudhari, Aviseka Acharya, Jürgen Hescheler, Jan Georg Hengstler, Symeon Papadopoulos, Agapios Sachinidis
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Mesenchymal stem cells ameliorate hyperglycemia-induced endothelial injury through modulation of mitophagy
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overexpression of protocadherin 7 inhibits neuronal survival by downregulating Birc5 in vitro
Authors: Huajuan Xiao, Ziling Sun, Jun Wan, Shengtao Hou, Yi Xiong
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Therapeutic potential of GSK-J4, a histone demethylase KDM6B/JMJD3 inhibitor, for acute myeloid leukemia
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Hyaluronan polymeric micelles for topical drug delivery
Authors: Daniela Smejkalová, Tomáš Muthny, Kristina Nešporová, Martina Hermannová, Eva Achbergerová, Gloria Huerta-Angeles, Marek Svoboda, Martin Cepa, Veronika Machalová, Dominika Luptáková
Journal: Carbohydrate Polymers (2017): 86–96

New ruthenium compounds bearing semicarbazone 2-formylopyridine moiety: Playing with auxiliary ligands for tuning the mechanism of biological activity
Authors: Michal Lomzik, Olga Mazuryk, Dorota Rutkowska-Zbik, Grazyna Stochel, Philippe C Gros, Malgorzata Brindell
Journal: Journal of Inorganic Biochemistry (2017)

Inhibition of mTOR’s Catalytic Site by PKI-587 Is a Promising Therapeutic Option for Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumor Disease
Authors: Helma Freitag, Friederike Christen, Florentine Lewens, Irina Grass, Franziska Briest, Sara Iwaszkiewicz, Britta Siegmund, Patricia Grabowski
Journal: Neuroendocrinology (2016)

Mesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1α Pathway
Authors: Yujia Yuan, Meimei Shi, Lan Li, Jingping Liu, Bo Chen, Younan Chen, Xingxing An, Shuyun Liu, Ruixi Luo, Dan Long
Journal: Clinical Science (2016): CS20160235

mTOR complex-2 stimulates acetyl-CoA and de novo lipogenesis through ATP citrate lyase in HER2/PIK3CA-hyperactive breast cancer
Authors: Yaqing Chen, Jianchang Qian, Qun He, Hui Zhao, Lourdes Toral-Barza, Celine Shi, Xuesai Zhang, Jiang Wu, Ker Yu
Journal: Oncotarget (2016): 25224–25240

Multiple Active Compounds from Viscum album L. Synergistically Converge to Promote Apoptosis in Ewing Sarcoma
Authors: Monika Twardziok, Susann Kleinsimon, Jana Rolff, Sebastian Jäger, Angelika Eggert, Georg Seifert, Catharina I Delebinski
Journal: PloS one (2016): e0159749

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测

	货号	22801	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	508	Em (nm)	524
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞仪检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒，JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差导致极大的不便。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比，JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）向570nm（即J-聚集体形式的发射）的移动。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了最强大的检测方法。

这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了最可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，JC-10浓缩在线粒体基质中，在那里形成红色荧光聚集体。然而，在凋亡和坏死细胞中，JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡激活剂和抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

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产品说明书

96孔板样品分析

概述

用密度为5×10⁵到1×10⁶个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

用500μL1XJC-10染料加载溶液重悬细胞（2-5×10⁵细胞/管）

37°C孵育/ 室温15-30分钟

用流式细胞仪分析FL1通道（绿色荧光单体信号）和FL2通道（橙色荧光聚合信号）

操作方法

1.准备细胞：
以5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL的密度制备细胞。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备JC-10染料加载溶液：
2.1使用前在室温下清洗所有试剂盒中的试剂。
2.2将25μL的200X JC-10（组分A）加入5mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。
注意：将未使用的200X JC-10（组分A）等分并保存在-20℃。 避免反复冻/融循环。

3.运行JC-10测定：
3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间以诱导细胞凋亡。设置并行控制实验。
对于阴性对照：仅用载体处理细胞。
对于阳性对照：在37℃，5％CO₂培养箱中用2-10μM的FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。
注意：CCCP或FCCP可与JC-10染料加载溶液同时添加（来自步骤2.2）。可能需要滴定CCCP或FCCP以获得具有单个细胞系的最佳结果。
3.2离心细胞，每管2-5×10⁵个细胞。
注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞摄入，用含有血清的培养基洗涤细胞一次，然后用JC-10染料加载溶液孵育（参见步骤3.3）。
3.3在500μLJC-10染料加载溶液中重悬细胞（来自步骤2.2）。
3.4在室温下或在37℃，5％CO₂培养箱中孵育染料装载细胞15-60分钟，避光。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5通过在FL1通道中使用流式细胞仪检测荧光强度，获得绿色荧光单体信号（在凋亡细胞中），并使用FL2通道检测橙色荧光聚集信号（在健康细胞中）。建议使用FCCP或CCCP处理的细胞进行补偿校正（见附录）。

数据分析

1.在活的非凋亡细胞中，JC-10作为细胞溶质染色绿色中的单体存在，并且还在线粒体染成红色的聚集体中积累。 在凋亡细胞和死细胞中，JC-10仅以单体形式存在，染色细胞溶质绿。
2.使用FL2通道可检测到健康细胞中含有红色JC-10聚集体的线粒体。 通过使用FL1通道（FITC）可检测凋亡细胞中的绿色JC-10单体。
3. FL1与FL2的强度比用于监测化合物处理诱导的线粒体膜电位变化。

图1. FCCP诱导的JurKat细胞线粒体膜电位变化的影响。 将JurKat细胞染色载有JC-10染料加载溶液以及DMSO（Top）或5μMFCCP（低）10分钟。 使用FL1和FL2通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪测量J-聚集体和单体形式JC-10的荧光强度。 将未补偿的数据（左栏）与补偿数据（右栏）进行比较。

参考文献

Anticancer properties of a new non-oxido vanadium (IV) complex with a catechol-modified 3, 3′-diindolylmethane ligand
Authors: Katja Dankhoff, Aamir Ahmad, Birgit Weber, Bernhard Biersack, Rainer Schobert
Journal: Journal of Inorganic Biochemistry (2019)

BDE-47 decreases progesterone levels in BeWo cells by interfering with mitochondrial functions and genes related to cholesterol transport
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Enhancing magnetic resonance/photoluminescence imaging-guided photodynamic therapy by multiple pathways
Authors: Pei Liu, Jinghua Ren, Yuxuan Xiong, Zhe Yang, Wei Zhu, Qianyuan He, Zushun Xu, Wenshan He, Jing Wang
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Journal: The Journal of Toxicological Sciences (2018): 727–734

Determination of Hepatotoxicity in iPSC-Derived Hepatocytes by Multiplexed High Content Assays
Authors: Oksana Sirenko, Evan F Cromwell
Journal: (2018): 339–354

Yap1 safeguards mouse embryonic stem cells from excessive apoptosis during differentiation
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Journal: eLife (2018): e40167

Boosted Membrane Potential as Bioenergetic Response to Anoxia in Dinoroseobacter shibae
Authors: Christian Kirchhoff, Heribert Cypionka
Journal: Frontiers in Microbiology (2017): 695

Evaluation of anticancer properties of a new α-methylene-δ-lactone DL-249 on two cancer cell lines
Authors: Dorota K Pomorska, Katarzyna Gach-Janczak, Rafal Jakubowski, Tomasz Janecki, Jacek Szymański, Anna Janecka
Journal: Open Life Sciences (2017): 178–189

In vitro cardiotoxicity assessment of environmental chemicals using an organotypic human induced pluripotent stem cell-derived model
Authors: Oksana Sirenko, Fabian A Grimm, Kristen R Ryan, Yasuhiro Iwata, Weihsueh A Chiu, Frederick Parham, Jessica A Wignall, Blake Anson, Evan F Cromwell, Mamta Behl
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2017)

Study of the relationship between AGEs and oxidative stress damage to trophoblast cell mitochondria
Authors: Lingling Jiang, Jianying Yan, Lixiang Wu
Journal: Ginekologia Polska (2017): 372–378

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