Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光

	货号	13504	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 tests	价格	4584
	Ex (nm)	532	Em (nm)	619
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光是AAT Bioquest研发的用于检测半胱天冬酶活性的试剂盒。半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用。 Caspase 3/7（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3/7也被鉴定为药物筛选靶标。半胱天冬酶抑制剂具有抗癌和其他药理学潜力。已经证明caspase 3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。我们的Amplite™荧光Caspase 3/7检测试剂盒使用Z-DEVD-ProRed™作为caspase的荧光指示剂-3活动。通过Caspase 3/7切割ProRed DEVD阻断肽残基产生强烈红色荧光ProRed，其在~620nm下荧光测量，激发~535nm。Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光可用于测量细胞提取物和纯化酶中caspase 3/7的活性，以及​​筛选caspase 3/7抑制剂。该试剂盒以96孔格式每孔使用100μl试剂，提供足够的试剂进行100次分析。该试剂盒以384孔的形式每孔使用25ul试剂，提供足够的试剂进行400次分析。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的Caspase 检测试剂/试剂盒。

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）

制备细胞体积的半胱天冬酶3/7测定溶液

在室温下孵育1小时

在Ex / Em = 535 / 620nm处监测荧光强度

操作方法

1.准备细胞：

1.1对于粘附细胞：在生长培养基中将细胞在20,000至80,000个细胞/孔/ 90L下过夜，96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/ 20L，用于384孔板。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于培养基中，培养基浓度为80,000至200,000细胞/孔/ 90L，用于96孔poly-D赖氨酸平板或20,000至50,000细胞/孔/ 20L用于384孔聚-D赖氨酸板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备库存解决方案：

2.1在使用前，在室温下使用组分A，B，C（如果需要，组分D和E）。

2.2如果需要，制备1mM Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO储备液：将100μLDMSO（未提供）直接加入到Ac-DEVD-CHO小瓶（组分D）中。 该抑制剂可用于确认荧光信号强度与Caspase 3/7样蛋白酶活性之间的相关性。

注意：应将未使用的抑制剂储备液等分并在-20°C下干燥储存。

3.准备Caspase 3/7检测溶液：

将50μL200X胱天蛋白酶3/7底物储备溶液（组分A）和100μL1MDTT溶液（组分C）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：50μL的200X caspase 3/7底物储备液足以进行100次测定，每次测定的反应体积为100μL。 未使用的200X caspase 3/7底物储备液应等分，在-20°C干燥储存，避光。

4.运行Caspase 3/7测定：

4.1通过将10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384-板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

4.2将细胞板在培养箱中孵育一段所需的时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

4.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的半胱天冬酶3/7测定溶液（来自步骤3）。

4.4将板在室温下孵育至少1小时，避光。

注1：如果需要，在室温下加入测定溶液10分钟前，将1L Caspase 3/7抑制剂Ac-DEVD-CHO的1mM储备液（来自步骤2.2）加入选定的样品中，以确认Caspase 3 / 7个类似的活动。

注2：如果需要，通过将5mM R110标准品（组分E）稀释到生长培养基中制备R110标准曲线，得到系列稀释的R110标准品，范围为0-50M。将100μL连续稀释的R110标准品加入含有的孔中。 在测量荧光之前的任何时间，100μLCaspase3/7测定溶液。 该标准曲线可用于测定含有胱天蛋白酶3/7的反应中产生的产物的摩尔数。

4.5在制动器关闭的情况下，以800rpm离心细胞板（特别是对于非粘附细胞）2分钟。

4.6在Ex / Em = 490 / 525nm处观察荧光增加。

数据分析

        从具有细胞的那些孔值中减去具有生长培养基的空白孔中的荧光。空白孔的背景荧光根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 将Jurkat细胞在同一天以200,000个细胞/ 90L /孔接种在Costar黑壁/透明底96孔板中。 用终浓度为1M的星形孢菌素处理细胞5小时，而未处理的细胞用作对照。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540 / 620nm下测量荧光强度。

参考文献

High STMN1 level is associated with chemo-resistance and poor prognosis in gastric cancer patients
Authors: Tuya Bai, Takehiko Yokobori, Bolag Altan, Munenori Ide, Erito Mochiki, Mitsuhiro Yanai, Akiharu Kimura, Norimichi Kogure, Toru Yanoma, Masaki Suzuki
Journal: British Journal of Cancer (2017)

The trivalent cerium-induced cell death and alteration of ion flux in sweetpotato [Ipomoea batatas (L.) Lam]
Authors: Jiaojiao Jiang, Jianzhong Hu, Zeyi Xie, Qinghe Cao, Daifu Ma, Yonghua Han, Zongyun Li
Journal: Journal of Rare Earths (2017)

Uncarboxylated Osteocalcin Induces Antitumor Immunity against Mouse Melanoma Cell Growth
Authors: Yoshikazu Hayashi, Tomoyo Kawakubo-Yasukochi, Akiko Mizokami, Mai Hazekawa, Tomiko Yakura, Munekazu Naito, Hiroshi Takeuchi, Seiji Nakamura, Masato Hirata
Journal: Journal of Cancer (2017): 2478–2486

Docetaxel induces Bcl-2-and pro-apoptotic caspase-independent death of human prostate cancer DU145 cells
Authors: Takeharu Ogura, Yoshiyuki Tanaka, Hiroki Tamaki, Mamoru Harada
Journal: International journal of oncology (2016): 2330–2338

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

Identification of an allosteric small-molecule inhibitor selective for the inducible form of heat shock protein 70
Authors: Matthew K Howe, Khaldon Bodoor, David A Carlson, Philip F Hughes, Yazan Alwarawrah, David R Loiselle, Alex M Jaeger, David B Darr, Jamie L Jordan, Lucas M Hunter
Journal: Chemistry & biology (2014): 1648–1659

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光

	货号	22795	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	341	Em (nm)	441
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过检测Caspase 3的激活来监测细胞凋亡。由于caspase-3（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的启动很重要，因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。Caspase 3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）的底物选择性。该试剂盒使用Ac-DEVD-AMC作为caspase-3活性的荧光指示剂。Caspase 3切割AMC肽会产生强荧光的AMC，该荧光在450-480 nm激发下用340-370 nm的荧光进行监测。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案，该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板，每孔使用100 uL试剂，试剂足够200次检测。该试剂盒以384孔板，每孔使用25 uL试剂，试剂足够800次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2. 加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液
3. 在室温下孵育1小时
4. 检测Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）的荧光强度

 

溶液配制

工作溶液配制

将50 µL Caspase 3/7底物（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意：将未使用的组分A和B分装并存储在-20℃下。 避免重复冻结/解冻循环。

 

实验步骤

1. 通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。
2. 将细胞板在37°C，5％CO₂培养箱中孵育（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。
3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Caspase 3/7底物工作溶液。
4. 在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
5. 以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。
6. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）处检测荧光强度。

 

图示

 

图1.使用Cell Meter Caspase 3/7活性凋亡测定试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 3/7活性。 当天，将Jurkat细胞以80,000个细胞/孔/ 90 µL的浓度接种在Costar黑色96孔板中。 在有和没有1 µM星形孢菌素的情况下将细胞处理4小时，并在有或没有10 µM的胱天蛋白酶抑制剂AC-DEVD-CHO的情况下处理细胞10分钟。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液（100μL/孔），并在室温下孵育1小时。 在Ex / Em ＝ 360 / 470nm（截止＝ 420nm）下测量荧光强度。

图2.白蛋白暴露上调了足细胞中的促凋亡途径。 A，活化的半胱天冬酶3/7活性相对于用5mg / ml白蛋白（实心柱）或5mg / ml右旋糖酐（实心柱）处理的足细胞中的总细胞蛋白标准化了指定的时间。 *表示与相应的右旋糖酐处理的对照相比，P <0.0001。 B，用5mg / ml葡聚糖（Dex）或5mg / ml白蛋白（Alb）处理培养的足细胞的TUNEL染色。核用DAPI染成蓝色。 TUNEL阳性细胞核是绿色的。 C，将半胱天冬酶3/7活性标准化为用5 mg / ml白蛋白或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD（泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂）处理的足细胞中的总细胞蛋白。 z VAD很大程度上废除了caspase活性（*，P = 0.01对白蛋白+ z VAD）。 D，用锥虫蓝测定法测定的死细胞百分比，用单独的5 mg / ml白蛋白（空心柱）或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD（实心柱）处理24小时或5 mg / ml的足细胞单独使用白蛋白（水平阴影线）或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD 48小时（垂直阴影线）。 *表示在48小时时与白蛋白+ z-VAD相比，P = 0.001。 * Caspase活性是根据制造商的指导使用Caspase 3/7活性试剂盒（AAT Bioquest，Sunnyvale，CA）确定的。资料来源：Graph from Endocytosis of Albumin by Podocytes Elicits an Inflammatory Response and Induces Apoptotic Cell Death by Kayo Okamura, et al., PLoS ONE, Jan. 2013.

 

 

参考文献

Anti-Tumor Effects of Low Dose Zoledronate on Lung Cancer-Induced Spine Metastasis
Authors: Akoury, Elie and Ramirez Garcia Luna, Ana Sofia and Ahangar, Pouyan and Gao, Xiaoya and Zolotarov, Pylyp and Weber, Michael H and Rosenzweig, Derek H
Journal: Journal of clinical medicine (2019): 1212

Reversal of obesity-driven aggressiveness of endometrial cancer by metformin
Authors: Guo, Hui and Kong, Weimin and Zhang, Lu and Han, Jianjun and Clark, Leslie H and Yin, Yajie and Fang, Ziwei and Sun, Wenchuan and Wang, Ji and ong and Gilliam, Timothy P and others
Journal: American journal of cancer research (2019): 2170

Serine/Threonine Kinase 35, a Target Gene of STAT3, Regulates the Proliferation and Apoptosis of Osteosarcoma Cells
Authors: Wu, Zhong and Liu, Jie and Hu, Siyuan and Zhu, Yuchang and Li, Shaohua
Journal: Cellular Physiology and Biochemistry (2018): 808–818

Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Palma, Luis Mario Aguirre and Flamme, Hanna and Gerke, Iris and Kreuzer, Karl-Anton
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13–26

Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Knoll, Gertrud and Bittner, Sebastian and Kurz, Maria and Jantsch, Jonathan and Ehrenschwender, Martin
Journal: Oncotarget (2016)

Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Wang, Lin and Hu, Xiaofan and Ma, Xiangyu and Ma, Zhensheng and Zhang, Yang and Lu, Yizhao and Li, Xiang and Lei, Wei and Feng, Yafei
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452

Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Wang, Q and Shi, Y and Butler, HJ and Xue, J and Wang, G and Duan, P and Zheng, H
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006

microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: He, Wei and Feng, Jianfang and Zhang, Yan and Wang, Yuanyuan and Zang, Wenqiao and Zhao, Guoqiang
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317–324

Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Han, Jianjun and Zhang, Lu and Guo, Hui and Wysham, Weiya Z and Roque, Dario R and Willson, Adam K and Sheng, Xiugui and Zhou, Chunxiao and Bae-Jump, Victoria L
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668–675

IL-7 abrogates the immunosuppressive function of human double-negative T cells by activating Akt/mTOR signaling
Authors: Allgäuer, Andrea and Schreiner, Elisabeth and Ferrazzi, Fulvia and Ekici, Arif B and Gerbitz, Armin and Mackensen, Andreas and Völkl, Simon
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139–3148

胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物Ac-IETD-AMC 蓝

	货号	13411	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	2604
	Ex (nm)	341	Em (nm)	441
	分子量	675.68	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Caspase 8荧光底物Ac-IETD-AMC 蓝是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡或程序性细胞死亡中是必需的，在发育和成年生活的大多数其他阶段，并且因其在细胞中的作用而被称为“刽子手”蛋白质。免疫系统中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴细胞的成熟。细胞凋亡失败是肿瘤发展和自身免疫疾病的主要原因之一。半胱天冬酶也参与缺血和阿尔茨海默病。凋亡caspase有两种类型：引发剂和效应剂。 启动子半胱天冬酶（例如，CASP2，CASP8，CASP9和CASP10）切割效应半胱天冬酶的无活性前体形式，从而激活它们。效应子半胱天冬酶（例如，CASP3，CASP6，CASP7）依次切割细胞内的其他蛋白质底物，以触发细胞凋亡过程。该级联反应的起始受半胱天冬酶抑制剂的调节。

AAT Bioquest提供一组蓝色，绿色和红色荧光底物，用于监测caspase活性。AMC-，AFC-，R110-和ProRed – 衍生的蛋白酶底物是无色和非荧光的。通过半胱天冬酶切割阻断蛋白酶可切割的肽残基分别产生强烈的蓝色，绿色或红色荧光，其可以通过荧光仪器监测。我们专有的ProRed 衍生的半胱氨酸蛋白酶底物是用于荧光检测各种半胱天冬酶活性的最敏感的红色指示剂。通常，R110和ProRed 底物比基于AMC-，AFC-或4-硝基苯胺的底物灵敏得多。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Caspase 8荧光底物Ac-IETD-AMC。

点击查看光谱 

产品说明书

操作方法

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223

相关产品